定量蛋白质斑点印迹实验
试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPERFILM或柯达 X 光底片缓冲液 A实验步骤 材料与设备样品，由各步纯化操作所得硝酸纤维素膜 (0.45um，8x11.5 cm)(Schleicher&Schuell，Inc+)斑点印迹装置（Minifold*I，Schleicher&Schuell，Inc.27510)鼠抗-σ32 单克隆抗体 3RH2(MAb3RH2)辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 G(IgG-HRP)(AmershamLifeScience，Inc.)ECLTM#1 和#2 试剂（AmershamLifeScience，Inc)ECLTMHYPERFILM(AmershamLifeScience,Inc,) 或柯达 X 光底片试剂缓冲......阅读全文
定量蛋白质斑点印迹实验
试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPERFILM或柯达 X 光底片缓冲液 A实验步骤 材料与设备样品，由各步纯化操作所得硝酸纤维素膜 (0.
定量蛋白质斑点印迹实验
试剂、试剂盒 鼠抗-σ32 单克隆抗体 辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 G ECLTM#1 和#2 试剂 十二烷基肌氨酸钠 Tris-缓冲盐溶液
量蛋白质斑点印迹实验
蛋白质印迹法，它是用免疫学方法来测量某一蛋白质的量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒鼠抗-σ32 单克隆抗体辣根过氧化酶共价标记的羊抗鼠免疫球蛋白 GECLTM#1 和#2 试剂十二烷基肌氨酸钠Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材硝酸纤维素膜斑点印迹装置ECLTMHYPER
快速蛋白质斑点印迹试验
试剂、试剂盒 Tris缓冲盐溶液(TBS) TBS+1%牛血清白蛋白 TBS+0.1%Tween-20(TBST) 5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮蓝四唑(BCIP NBT)显
快速蛋白质斑点印迹试验
试剂、试剂盒 Tris缓冲盐溶液(TBS)TBS+1%牛血清白蛋白TBS+0.1%Tween-20(TBST)5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮蓝四唑(BCIP NBT)显色试剂鼠抗σ32单克隆抗体3RH2(MAb 3RH2)兔抗鼠免疫球蛋白G(IgG)~碱性磷酸酶缀合物仪器、耗材 硝酸纤维素膜
快速蛋白质斑点印迹试验
试剂、试剂盒Tris缓冲盐溶液(TBS)TBS+1%牛血清白蛋白TBS+0.1%Tween-20(TBST)5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸 氮蓝四唑(BCIP NBT)显色试剂鼠抗σ32单克隆抗体3RH2(MAb 3RH2)兔抗鼠免疫球蛋白G(IgG)~碱性磷酸酶缀合物仪器、耗材硝酸纤维素膜实验步骤
蛋白质定量实验
考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法 碱性铜还原分析法 胺衍生法 实验方法原理 蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基，其化学结构中
蛋白质定量实验
试剂、试剂盒 考马斯亮蓝 G250乙醇磷酸实验步骤 (1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品，可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比
蛋白质定量实验步骤
(1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品，可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度（microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比值太高, 可能会增加反应混合物的 PH 而导致反应背景较高
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤 材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液）Bradford 试剂（CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液）Bradford 试剂（CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)分光光
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 产物微量滴定板，尼龙膜，紫外交联装置，96 孔或 384 孔复制器，热循环仪，PCR 管或反应板
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
对于高通量的筛选，推荐使用几个热循环仪厂家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板，或者使用单个的管子。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验方法原理dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 产物微量滴定板，尼龙膜，紫外交联装置，96 孔或 384 孔复制器，热循环仪，PCR 管或反应板试剂、试剂盒 dNTP PCR 缓冲液聚合酶混合液嵌套引物LB-氨苄
蛋白质定量实验_胺衍生法
试剂、试剂盒OPA 储存液实验步骤1.于分析前至少 30 min 将 15uL 2-巯基乙醇加人到 5 mL OPA 储存液中, 这一试剂可稳定维持一天。所有荧光样品和相关反应在所有时间内都需要避光。2.蛋白质标准品 (0.2~10 ug/mL) 和未知浓度的待测样品在分析前需要调节 pH 至 8.
蛋白质定量
Quantitative Determination of Peptides by Sulfhydryl (-SH) Groups New (Contributed by David Van Horn, Dept. of Chemistry, UC Berkeley Greg Bulaj, Dept
斑点印迹的定义
中文名称斑点印迹英文名称dot blot定 义一种定性检测核酸或蛋白质的技术。即将待测核酸或蛋白点样于固相载体上，以同位素或非同位素标记探针与之杂交，通过显影或显色而进行检测。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（三级学科）
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验 实验步骤 一、引言 蛋 白 质 翻 译 后 修 饰 (P T
蛋白质定量实验_碱性铜还原分析法
试剂、试剂盒Folin-Ciocalteu 试剂硫酸铜试剂碱性铜试剂实验步骤碱性铜还原分析法 (Lowry 法）（Lowryetal.，1951) 和其他能够增强检测性能的方法都是基于一个包括两个步骤的过程。首先，双缩脲反应涉及蛋白质在碱性溶液环境中将铜还原（由Cu2+到 Cu+); 随后是反应增强
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验
蛋白质翻译后修饰 (PTM) 在细胞生物调节中发挥着基本作用。PTM 是 mRNA 翻译后蛋白质的酶促共价化学修饰。蛋白质化学修饰非常重要，因为它们会潜在地改变蛋白质的物理或化学性质、组成、活性、细胞定位或稳定性。实际上，在氨基酸或蛋白质的 N 端或 C 端加入或移除化学基团会导致大部分蛋白质发生变
蛋白质定量实验_考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法
实验方法原理蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基，其化学结构中的共轭双键，具有吸收紫外光的特性，吸收高峰在280 nm处，蛋白质溶液的吸光度(A280)与蛋白质含量成正比关系，可作为样品中蛋白质定量测定。该方法简便、灵敏、快速，且样品用量少且可回收，低浓度的盐类也不干扰测定，但测定
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验4
五、质 谱 分 析质谱仪器的多种设计和配置都支持蛋白质组的动态性质及其相关 P T M 的研究工作 。对 鉴 定 PTM 而言，质谱仪的最重要的两个特征（feature) 就是其质量准确度和分辨率 。与蛋白质鉴定不同 (其通常是基于鉴定同一蛋白质中的多个独立肽段)P T M 必须通过单独的 MS/M
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验6
七、P T M 的定量分析 当研究 P T M 的生物学意义时，如能了解一个特定修饰或一组P T M 的相对或绝对丰度通常会有帮助。这样可以将不同的生物样品间的目的修饰进行直接比较。例如, 将正常与疾病状态下细胞或组织内某一 P T M 的丰度进行比较。定量分析这些变化能够帮助
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（三）
2.2 糖基化糖 基 化 是 一 种 常 见 的 P T M , 并 且 已 经 证 明 能 够 影 响 酶 的 活 性 、蛋 白 质 定 位 、稳 定 性 、信 号 转 导 、细 胞 黏 附 和 蛋 白 质 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 经 发 现 在 肿 瘤 恶
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验5
六、CID、ECD和 ETD的对比基于质谱的蛋白质组学分析依赖于气相中肽段在低碰撞能量下断裂, 在质量谱图中形成峰。进而通过峰图确定肽段序列，再推断出相关蛋白质。完成肽段断裂最主要的方法就是碰撞诱导解离（collision induced dissociation，C I D ) ( S w a n
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（五）
六、CID、ECD和 ETD的对比 基于质谱的蛋白质组学分析依赖于气相中肽段在低碰撞能量下断裂, 在质量谱图中形成峰。进而通过峰图确定肽段序列，再推断出相关蛋白质。完成肽段断裂最主要的方法就是碰撞诱导解离（collision induced dissociation，C I
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（五）
六、CID、ECD和 ETD的对比基于质谱的蛋白质组学分析依赖于气相中肽段在低碰撞能量下断裂, 在质量谱图中形成峰。进而通过峰图确定肽段序列，再推断出相关蛋白质。完成肽段断裂最主要的方法就是碰撞诱导解离（collision induced dissociation，C I D ) ( S w
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（二）
二、用 于 鉴 定 P T M 的富 集 技 术2.1 磷酸化丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的可逆磷酸化也许是研究最为深人的 PT M 。蛋白质磷酸化信号网络介导细胞对与不同的应激因子、生长因子、细胞因子以及细胞间相互作用作出响应。憐酸化还影响多种细胞进程，如增殖、凋亡 、迁移 、转录和蛋白
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（一）
一、引言蛋 白 质 翻 译 后 修 饰 (P T M ) 在 细 胞 生 物 调 节 中 发 挥 着 基 本 作 用 。 P T M 是 m R N A 翻译 后 蛋 白 质 的 酶 促 共 价 化 学 修 饰 。蛋 白 质 化 学 修 饰 非 常 重 要 ，因 为 它 们 会 潜 在 地