DNA聚合酶的概述
DNA聚合酶(DNA polymerase)是 细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具备模板、 引物、dNTP 等的情况下)及其相辅的活性。 真核细胞有5种DNA聚合酶,分别为DNA聚合酶α(定位于胞核,参与复制引发,不具有5'-3'外切酶活性及3'-5'外切酶活性,有5'-3'聚合酶活性),β(定位于核内,参与高保真度复制,不具有5'-3'外切酶活性,其中疑似存在5'-3'聚合活性,不具3'-5'外切酶活性),γ(定位于 线粒体,参与线粒体复制,均具有5'-3'外切酶活性、5'-3'聚合活性及3'-5'外切酶活性),δ(定位核,参与延长子链及错配修复......阅读全文
DNA聚合酶的用途和缺陷
用途聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物,3’末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。缺点无3’→5’阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环
什么是DNA聚合酶I?
DNA聚合酶I的二级结构以螺旋为主,可划分为A至R共18个螺旋肽段。螺旋肽段之间由非螺旋结构连接。其中H区与I区之间的无规则结构较长,有50个氨基酸残基,I螺旋与O螺旋之间由较大的空隙,可以容纳DNA链,而50个氨基酸的无规结构,就像一个盖子那样与I、O螺旋区共同把DNA链包围起来,使其向一个方
DNA聚合酶有什么作用
DNA聚合酶(DNA polymerase)是细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板,从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具备模板、引物、dNTP等的情况下)及其相辅的活性。DNA聚合酶的共同特点是:⑴需要提
DNA聚合酶有什么作用
DNA作为遗传物质的基本特点就是能够准确地进行自我复制。在合成DNA时,决定其结构特异性的遗传信息来自其本身,必须由原来存在的DNA分子为模板来合成新的DNA分子。这种以自身DNA为模板,以脱氧核苷酸为底物催化合成新的DNA的酶称为DNA聚合酶。在微生物、植物和动物中都发现有这种酶,而且原核细胞和真
什么是高温DNA聚合酶?
DNA聚合酶也称耐高温DNA聚合酶。1988年,Saiki从嗜热水生真菌Thermus aquatics YT-1株中分离得到,该菌株于1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离出。
Taq-DNA-聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号:EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶,可在74℃复制DNA,在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下,以DNA为模板,延伸引物,合成双链DNA。这个酶只有
T4DNA聚合酶的用途
(1)利用取代合成反应制备探针(2)标记具有平末端的或具有3’-隐蔽末端的DNA片段利用较强的3 ′→ 5 ′外切酶活性和 5′→3′聚合活性(3)用于DNA序列分析
Tth-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Tth DNA聚合酶英文名称Tth DNA polymerase定 义编号:EC 2.7.7.7。存在于嗜热细菌(Thermus thermophilus) 的耐热DNA聚合酶,有逆转录活性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
Pfu-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Pfu DNA聚合酶英文名称Pfu DNA polymerase定 义存在于嗜热古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐热DNA聚合酶,兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
Mlu-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Mlu DNA聚合酶英文名称Mlu DNA polymerase定 义来自藤黄微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
Tth-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Tth DNA聚合酶英文名称Tth DNA polymerase定 义编号:EC 2.7.7.7。存在于嗜热细菌(Thermus thermophilus) 的耐热DNA聚合酶,有逆转录活性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
DNA聚合酶的特性、用途和缺点
特性良好的热稳定性;70℃ 2h,残留90%活性;93℃ 2h,残留60%活性;94℃ 2h,残留40%活性。5'→3'聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性;5'→3'外切酶活性;无3'→5'外切酶活性。用途聚合酶链反应(polymerase chai
关于DNA聚合酶I的功能简介
1)通过核苷酸聚合反应,使DNA链沿5’→3’方向延长(DNA聚合酶活性) 2)催化由3’端水解DNA链(3’→ 5’核酸外切酶活性,用于切除错配的碱基) 3)催化由5’端水解DNA链(5’→ 3’核酸外切酶活性,用于切除引物) 4)催化由3’端使DNA链发生焦磷酸解 5)催化无机焦磷酸
Taq-DNA-聚合酶的基本信息
中文名称Taq DNA 聚合酶英文名称Taq DNA polymerase定 义编号:EC 2.7.7.7。存在于水生嗜热菌(Thermus aquaticus)的嗜热DNA聚合酶,可在74℃复制DNA,在95℃仍具有酶活力。该酶可在离体条件下,以DNA为模板,延伸引物,合成双链DNA。这个酶只有
关于DNA聚合酶I的基本介绍
DNA聚合酶I(DNA-pol I),分子量109kD,为单肽链组成,400分子数/细胞,是原核生物的DNA聚合酶,由于发现最早命名为DNA聚合酶I,其他原核生物的DNA聚合酶,按发现的先后顺序分别命名为DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶Ⅴ。
Vent-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Vent DNA聚合酶英文名称Vent DNA polymerase定 义编号:EC 2.7.7.7。从极端嗜热细菌(Thermococcus litoralis)中提纯的耐热DNA聚合酶,有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR产物为平端。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(
Vent-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Vent DNA聚合酶英文名称Vent DNA polymerase定 义编号:EC 2.7.7.7。从极端嗜热细菌(Thermococcus litoralis)中提纯的耐热DNA聚合酶,有3′→5′外切酶活性。用此酶催化的PCR产物为平端。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(
大肠杆菌DNA聚合酶的介绍
大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNApolⅠ)这是1956年由ArthurKornberg首先发现的DNA聚合酶,又称Kornber酶。此酶研究得清楚而且代表了其他DNA聚合酶的基本特点。 ⑴理化性质:纯化的DNApolⅠ由一条 多肽链组成,约含1000个 氨基酸残基,
Mlu-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Mlu DNA聚合酶英文名称Mlu DNA polymerase定 义来自藤黄微球菌(Micrococcus luteus)的DNA聚合酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
耐高温DNA聚合酶的相关介绍
特性 良好的热稳定性; 70℃ 2h,残留90%活性; 93℃ 2h,残留60%活性; 94℃ 2h,残留40%活性。 5’→3’聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性; 5’→3’外切酶活性; 无3’→5’外切酶活性。 用途 聚合酶链反应(polymerase chain re
Pfu-DNA聚合酶的基本信息
中文名称Pfu DNA聚合酶英文名称Pfu DNA polymerase定 义存在于嗜热古菌(Pyrococcus furiosus) 的耐热DNA聚合酶,兼具5′→3′DNA聚合酶活性及3′→5′外切酶活性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
DNA聚合酶与复制的保真性
DNA复制的保真性是遗传信息稳定传代的保证。生物体至少有3种机制实现保真性:①遵守严格的碱基配对规律;②5’—3’聚合酶活性中心对底物的选择,使核苷酸的错配率仅为10-4~10-5;③3’—5’外切酶活性中心在复制出错时的即时校对,使错配率降至10-6~10-8。
DNA聚合酶及DNA连接酶的功能和区别
DNA聚合酶,以已有的核酸序列作为模板,将4种脱氧核苷酸(A、T、G、C)按照模板的碱基排列顺序,以“碱基互补原则”依次连接,聚合成为一条新的DNA链。 DNA连接酶,是将DNA片段上的缺刻连接起来的酶。 一、DNA聚合酶 (一)DNA聚合酶I DNA聚合酶I(DNA pol
关于聚合酶链反应的概述
PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点。 PCR技术最早由美国Cetus公司人类遗传研究室Kary Mullis及同事于1985年发现并研制成功的;最早的应用报道是Saiki等1985年将PCR技术应用于β-
聚合酶链反应构建重组DNA
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE无水乙醇DNA聚合酶CTP仪器、耗材 电泳仪离心机PCR仪实验步骤 1. 制备模板DNA,如DNA不是经氯化铯梯度纯化的,100℃煮沸10 min 以灭活核酸酶。 2. 制备寡核苷酸引物,若PCR产物要进行平端克隆,就应该对引物的5’端羟基进行磷酸化处理。 图一
T4-DNA聚合酶实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材 水浴锅实验步骤 一、50 μl 反应体积:(1)50 mmol/l Tris·Cl,pH8.0(2)5 mmol/l MgCl2(3)5mmol/l DTT(4)100 μmol/l 4dNTP混合液(5
T4-DNA聚合酶实验
T4 DNA聚合酶 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
PCR技术(三):Taq-DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌,能在70~75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的.(一)酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 94KDa.其比
DNA聚合酶作用部位及功能
DNA聚合酶作用部位是磷酸二酯键。1、聚合作用:在引物RNA-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令,即A与T,C与G的配对原则,逐步逐个、连续地将dNTP加到延伸中的DNA分子3'-OH末端,逐步合成延长中的子链DNA。这是DNA聚合酶的主要作用;2、3’→5’'外切酶活
T4-DNA聚合酶实验
T4 DNA 聚合酶具依赖人为模板的聚合酶活性,同时具有对单链、双链DNA的3’到5’端的外切酶活性,缺少5’到3’端的外切酶活性。实验材料DNA试剂、试剂盒Trish·CldNTPMgCl2BSADTT仪器、耗材水浴锅实验步骤一、50 μl 反应体积:(1)50 mmol/l Tris·Cl,p