什么是DNA连接酶?
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD* 的DNA 连接酶。 DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链3‘-OH末端和,另一DNA链的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。......阅读全文
什么是DNA连接酶?
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖N
什么是DNA连接酶?有哪些种类?
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD
DNA连接酶是怎样发现的?
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必
DNA连接酶(DNA-ligase)介绍
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA
T4DNA连接酶是如何工作的?
识别DNA末端:T4 DNA连接酶首先识别准备连接的DNA片段的末端。这些末端通常是通过限制性内切酶切割产生的,具有互补的单链尾巴(称为黏性末端)或通过其他方式制备的平滑末端。 结合DNA:酶与这些DNA末端结合,形成一个酶-DNA复合物。 催化反应:在存在ATP或NAD+作为辅因子的情况下
DNA连接酶简介
DNA 连接酶是生物体内重要的酶,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起着重要的作用。DNA连接酶分为两大类:一类是利用ATP 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA 连接酶,另一类是利用烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候,以核苷酸为原料,DNA的一条链为模板,合成RNA的酶RNA连接酶是可以识别特定RNA序列,将两端RNA链接起来的酶
RNA连接酶与DNA连接酶的区别
真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.真核细胞RNA前体形成成熟的功能RNA分子时,需要经过剪切和连接过程.RNA连接酶可能在此过程中起连接作用.RNA连接酶与DNA连接酶的区别RNA聚合酶是在转录的时候,以核苷酸为原料,DNA的
DNA连接酶的缺点
无3’→5’阅读校正功能,在PCR扩增过程可引起错配,30次循环错配率约0.25%。措施:选择高保真Taq酶,如Pfu。原因:Pfu具有3’→5’外切酶活性。注意:Pfu扩增产物为平末端。
DNA连接酶的特性
良好的热稳定性;70℃ 2h,残留90%活性;93℃ 2h,残留60%活性;94℃ 2h,残留40%活性。5’→3’聚合酶活性,对dATP有优先聚合活性;5’→3’外切酶活性;无3’→5’外切酶活性。
DNA连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
DNA-连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。
DNA连接酶的用途
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物,3’末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基,而这个碱基几乎总是A,因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性,故可用T载体克隆。
DNA-连接酶的分类
T4DNA连接酶T4DNA连接酶是ATP依赖的DNA连接酶,催化两条DNA双链上相邻的5′磷酸基和3′羟基之间形成磷酸二酯键。可接双链DNA的平末端、相容黏末端及其中的单链切口,在分子生物学中有广泛的应用。T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条6
DNA连接酶的性质
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数
DNA-连接酶的性质
大肠杆菌的DNA连接酶是一条分子量为75Ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感,可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性,可以催化酶与NAD(而不是ATP)反应形成酶-AMP中间物,但不能继续将AMP转移到DNA上促进磷酸二酯键的形成。DNA连接酶在大肠杆菌细胞中约有300个分子,和DNA聚合酶Ⅰ的分子数
DNA连接酶作用特点
1. 连接的两条链必须分别具有自由3’-OH和5’-P,而且这两个基团彼此相邻;2. 在羟基和磷酸基团间形成磷酸二酯键是一种耗能过程。E.coli DNA连接酶 -连接具互补碱基黏性末端(最初研究表明),现在研究可连接平末端;需NAD+辅助因子,活性低,不常用。T 4DNA连接酶-连接具互补碱基黏性
DNA连接酶及其应用
(一)DNA连接酶的发现环形DNA分子的发现使科学家相信一定有一种能连接这种切口的酶存在。首个DNA连接酶(ligase)——大肠杆菌DNA连接酶,是1967年发现的,是大肠杆菌基因编码。1970年,发现了T4DNA连接酶,由大肠杆菌T4噬菌体基因编码的。(二) DNA连接酶作用特点1. 连接的两条
什么是DNA测序?
DNA测序(DNA sequencing,或译DNA定序)是指分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)与鸟嘌呤(G)的排列方式。快速的DNA测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。在基础生物学研究中,和在众多的应用领域,如诊断,生物技术,法医生物学,
什么是变性DNA?
中文名称变性DNA英文名称denatured DNA定 义由于物理(如过热)或化学(如加入尿素)等因素的影响,使之失去生物活性的DNA分子。不再具有致密的、双链的螺旋结构,而成为松散的和单链的结构。去除变性因素,DNA一般可以复性。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
什么是DNA解链?
解旋也叫解链,指在一定的物理条件或相关酶类的催化作用下,维系DNA双链结构的氢键发生断裂使DNA双螺旋结构局部解体的现象。或者说,DNA分子复制时,在解旋酶的作用下,解开扭成螺旋的两条长链,然后断开双螺旋上的碱基对的氢键,使DNA分子成为单链的过程叫解旋.
什么是“DNA探针”?
DNA探针(DNA probe)是最常用的核酸探针,为长度在几十到几百甚至上千碱基对的单链或双链DNA,用特殊示踪剂(如同位素、酶或有色基团)进行标记;在适当的pH值、温度和离子强度下,DNA探针利用分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性,能与待测样本中互补的非标记单链DNA或RNA以氢键结合
什么是自在DNA?
中文名称自在DNA英文名称selfish DNA定 义除能复制自身外,不具有其他功能的DNA片段。泛指间隔DNA及卫星DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
什么是DNA芯片?
DNA芯片又叫做基因芯片(gene chip)或基因微阵列(microarray),寡核酸芯片,或DNA微阵列,它是通过微阵列技术将高密度DNA片段阵列以一定的排列方式使其附着在玻璃、尼龙等材料上面。由于常用计算机硅芯片作为固相支持物,所以称为DNA芯片。
什么是DNA重排?
DNA重排(DNA rearrangement)这种调节主要是根据DNA片段在基因组中位置的变化,即从一个位置变换到另一个位置,从而改变基因的活性。最熟知的两个例子是酵母交配型的控制和抗体基因的重排。
什么是DNA变性?
DNA变性,是指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂,碱基间的堆积力遭到破坏,双链变成单链,使核酸的天然构象和性质发生改变,但不涉及其一级结构的改变。凡能破坏双螺旋稳定的因素(如加热、极端的pH、有机试剂如甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等)均可引起核酸分子变性。变性后的DNA常发生一些理化及生物学性质的改变:
什么是DNA解旋酶?
DNA解旋酶(DNA helicase)通常为流体蛋白环,通过ATP水解产生的能量由解旋酶装载器装载到DNA单链上(单链穿过环中央),有3‘--5’或5‘--3’方向极性,该极性就是它结合的单链的极性。它像DNA聚合酶一样具有延伸性。与解旋酶装载器结合,装载到单链DNA上之前,DNA解旋酶是没有活性
可以DNA结合的酶DNA连接酶
DNA连接酶:是能够使用来自ATP或NAD的化学能将先前切割或断裂的DNA链聚集在一起的酶。连接酶在DNA滞后链复制中特别重要,因为它们将冈崎碎片组合成DNA链。连接酶在DNA修复和基因重组中也发挥重要作用。
T4DNA连接酶的化学结构是什么?
T4DNA连接酶的化学结构属于酶类,其具体细节需要参考专业的生物化学资料或科学文献。 T4DNA连接酶是一种由大肠杆菌产生的牛胸腺DNA连接酶,它在分子生物学实验中用于DNA片段的连接。根据现有信息,DNA连接酶催化反应所需的能量来源主要来自于DNA连接酶催化反应所需的能量来源主要来自于NAD+
简述DNA连接酶的用途
DNA连接酶主要用于基因工程,将由限制性核酸内切酶“剪”出的粘性末端重新组合,故也称“基因针线”。 人教版高中生物选修3中提到的E·coliDNA连接酶,来源于大肠杆菌,可用于连接粘性末端;T4DNA连接酶,来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率低。