关于DNA探针的基本内容介绍

DNA探针是以病原微生物DNA或RNA的特异性片段为模板,人工合成的带有放射性或生物素标记的单链DNA片段,可用来快速检测病原体。DNA探针将一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或荧光染料等标记后制成的探针。可与固定在硝酸纤维素膜的DNA或RNA进行互补结合,经放射自显影或其他检测手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。 DNA探针是最常用的核酸探针,指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多,有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的,如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。以细菌为例,分子杂交技术用于细菌的分类和菌种鉴定比之G+C百分比值要准确的多,是细菌分类学的一个发展方向。加之分子杂交技术的高敏感性,分子杂交在临床微生物诊断上具有......阅读全文

关于乙醇的基本内容介绍

  乙醇(ethanol)是一种有机化合物,结构简式为CH3CH2OH或C2H5OH,分子式为C2H6O,俗称酒精。  乙醇在常温常压下是一种易挥发的无色透明液体,低毒性,纯液体不可直接饮用。乙醇的水溶液具有酒香的气味,并略带刺激性,味甘。乙醇易燃,其蒸气能与空气形成爆炸性混合物。乙醇能与水以任意比

关于乳糖的基本内容介绍

  乳糖是人类和哺乳动物乳汁中特有的碳水化合物,是由葡萄糖和半乳糖组成的双糖,分子式为C12H22O11。在婴幼儿生长发育过程中,乳糖不仅可以提供能量,还参与大脑的发育进程。  乳糖主要用于制造婴儿食品和配制药物,例如制药片、药粉时用作稀释剂。

关于果胶的基本内容介绍

  果胶是一种多糖,其组成有同质多糖和杂多糖两种类型。它们多存在于植物细胞壁和细胞内层,大量存在于柑橘、柠檬、柚子等果皮中。呈白色至黄色粉状,相对分子质量约20000~400000,无味。在酸性溶液中较在碱性溶液中稳定,通常按其酯化度分为高酯果胶及低酯果胶。高酯果胶在可溶性糖含量≥60%、pH=2.

关于肉瘤的基本内容介绍

  来源于间叶组织(包括结缔组织和肌肉)的恶性肿瘤称为“肉瘤”,多发生于皮肤、皮下、骨膜及长骨两端。骨肉瘤以青年人为多,好发于四肢长骨之两端,尤以股骨下端、胫骨上端及肱骨上端最多见。骨肉瘤发展迅速,病程短,开始在皮质内生长,可逐渐向骨髓腔发展,有时向外突破骨膜,侵入周围软组织,易引起病理性骨折,常见

关于黄疸的基本内容介绍

  黄疸是常见症状与体征,其发生是由于胆红素代谢障碍而引起血清内胆红素浓度升高所致。临床上表现为巩膜、黏膜、皮肤及其他组织被染成黄色。因巩膜含有较多的弹性硬蛋白,与胆红素有较强的亲和力,故黄疸患者巩膜黄染常先于黏膜、皮肤而首先被察觉。当血清总胆红素在17.1~34.2μmol/L,而肉眼看不出黄疸时

关于透析的基本内容介绍

  自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。  透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大

关于醛固酮的基本内容介绍

  醛固酮(Aldosterone)是一种增进肾脏对于离子及水分子再吸收作用的类固醇类激素(盐皮质激素家族),化学式为C21H28O5,主要作用于肾脏,是增进肾脏对于离子及水分再吸收作用的一种激素。  醛固酮(aldosterone),分子式为C21H28O5,是肾上腺皮质激素的一种。 具有代表性的

关于贫血的基本内容介绍

  贫血(anemia)是指人体外周血红细胞容量减少,低于正常范围下限的一种常见的临床症状。由于红细胞容量测定较复杂,临床上常以血红蛋白(Hb)浓度来代替。我国血液病学家认为在我国海平面地区,成年男性Hb

关于肽的基本内容介绍

  肽(peptide)是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物,它也是蛋白质水解的中间产物。  一般肽中含有的氨基酸的数目为二到九,根据肽中氨基酸的数量的不同,肽有多种不同的称呼:分别叫二肽、三肽、四肽、五肽等。由三个或三个以上氨基酸分子组成的肽叫多肽,它们的分子量低于10,000Da,能透过半

关于羧酸的基本内容介绍

  羧酸的官能团是羧基,除甲酸外,都是由烃基和羧基两部分组成。根据烃基的结构不同,分为脂肪酸和芳香酸。  羧基与脂肪烃基相连结者,称为脂肪酸;脂肪酸又根据烃基的不饱和度分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸。若脂肪烃基中不含有不饱和键,则称为饱和脂肪酸;若脂肪烃基中含有不饱和键,则称为不饱和脂肪酸。羧基与芳香

关于α螺旋的基本内容介绍

  α-螺旋(α-helix)是蛋白质二级结构的主要形式之一。指多肽链主链围绕中心轴呈有规律的螺旋式上升,每3.6 个氨基酸残基螺旋上升一圈,向上平移0.54nm,故螺距为0.54nm,两个氨基酸残基之间的距离为0.15nm。螺旋的方向为右手螺旋。氨基酸侧链R基团伸向螺旋外侧,每个肽键的肽键的羰基氧

关于油脂的基本内容介绍

  油脂(Fat)即甘油三酯或称之为脂酰甘油(triacylglycerol),是油和脂肪的统称。一般将常温下呈液态的油脂称为油,而将其呈固态时称为脂肪。  脂肪是由甘油和脂肪酸脱水合成而形成的。脂肪酸的羧基中的—OH 与甘油羟基中的—H 结合而失去一分子水,于是甘油与脂肪酸之间形成酯键,变成了脂肪

DNA探针的标记实验

核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。核酸探针根据核酸的性质,可分为DNA和RNA探针;根据标记物不同,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀

DNA探针的标记实验

实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测,必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记,这条链就称为核酸探针。因此,核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。

DNA片段探针的应用实验

实验材料 DNA试剂、试剂盒 杂交液洗膜液仪器、耗材 注射器超声仪水浴锅实验步骤 1.  用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中,加入足够的杂交液,密封后42℃预杂交1 h。 2.  往带螺盖的试管中,加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA,煮沸1

DNA探针的技术优势

①DNA探针多克隆在质粒载体中,制备方法简便;②DNA探针相对RNA探针(RNA probe)而言不易降解,一般能有效抑制DNA酶活性;③DNA探针的标记方法较成熟,可用同位素或非同位素标记,有多种方法可供选择。

DNA探针的种类及其特点

核酸探针按性质划分可分为基因组 DNA 探针、cDNA 探针、RNA 探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类。作为诊断试剂,较常使用的是基因组 DNA 探针和 cDNA 探针。其中,前者的应用最为广泛,它的制备可通过酶切或聚合酶链反应(PCR)从基因组中获得特异的 DNA 后将其克隆到质粒或噬菌体载体中

DNA探针检测法的原理

原理:碱基互补配对。。探针:DNA单链-化学连接的标记基团探针和目标DNA(经过加热,分成单链)混合,探针结合的目标DNA就会被标记

DNA片段探针的应用实验

甲酰胺法 水溶液中杂交             实验材料 DNA 试剂、试剂盒

DNA探针的标记实验

探针标记法             实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测,必须将杂交链中的一

关于基因探针的标记介绍

  为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交,有必要对探针加以标记,以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素-亲合素系统  、地高辛配体等作为标记物的方法。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。

关于基因探针的标记介绍

  为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交,有必要对探针加以标记,以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。但近年来已发展了一些用非同位素如生物素-亲合素系统、地高辛配体等作为标记物的方法。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。最常

关于基因探针的来源介绍

  DNA探针根据其来源有3种:一种来自基因组中有关的基因本身,称为基因组探针(genomic probe);另一种是从相应的基因转录获得了mRNA,再通过逆转录得到的探针,称为cDNA探针(cDNA probe)。与基因组探针不同的是,cDNA探针不含有内含子序列。此外,还可在体外人工合成碱基数不

关于探针标记方法的介绍

  ①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´;端核苷酸,同时在3´;端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分

DNA探针原位杂交

  1、4—6微米切片,用防脱片胶(多聚赖氨酸)处理过的玻片贴附  2、56—60℃烤片2—16h  3、新鲜二甲苯脱蜡,10minX2(趁热脱蜡)  4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空气干燥  5、加入50μl蛋白酶K工作液(蛋白酶K用蒸馏水稀释,浓度为25μg/ml),37℃消化1

关于cDNA探针的意义的介绍

  逆转录现在已成为一项重要的分子生物学技术,广泛用于基因的克隆和表达。从逆转录病毒中提取的逆转录酶已商品化,最常用的有AMV逆转录酶。利用真核Mrna3’末端存在一段聚腺苷酸尾,可以合成一段寡聚胸苷酸(oligo(dT))用作引物,在逆转录酶催化下合成互补于mRNA的cRNA链,然后再用RNase

缺口平移法为例介绍DNA探针的标记方法

缺口平移法是最常用的探针标记法,反应体系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三种三磷酸脱氧核糖核苷酸、一种同位素标记的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP)。首先用适当浓度的DNA酶I在探针DNA双链分子上随机切开若

DNA双螺旋结构的基本内容

  DNA双螺旋结构的提出开始便开启了分子生物学时代,使遗传的研究深入到分子层次,“生命之谜”被打开,人们清楚地了解遗传信息的构成和传递的途径。1953年,沃森和克里克发现了DNA双螺旋的结构,开启了分子生物学时代,使遗传的研究深入到分子层次,“生命之谜”被打开,人们清楚地了解遗传信息的构成和传递的

关于空气检测的基本内容介绍

  广义的空气检测是指对空气的组成成分的检测。狭义的空气检测,主要是从应用的角度,重点研究的是室内空气检测。它是指室内指装饰材料、家具等含有的对人体有害的物质,释放到家居、办公环境中造成的装修污染,来检测空气质量。国家2006年颁布实施的《民用建筑工程室内环境污染控制规范》列出五种主要污染物:甲醛、

关于基因诊断的基本内容介绍

  某些受精卵(种质)或母体受到环境或遗传等的影响,引起的下一代基因组发生了有害改变,产生了(体质)疾病,为了有针对性的解决和预防,故需要通过实验室的基因诊断、基因分析才能得到确认。又称DNA诊断或分子诊断。用目前人类对基因组的认识和分子遗传学数据,检查分子结构水平和表达水平,对普通遗传病或家族遗传