酶联免疫吸附测定方法介绍

双抗体夹心法双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:一、将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。二、加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。三、加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。四、加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。根据同样原理,将大分子抗体分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属......阅读全文

酶联免疫吸附测定方法介绍

双抗体夹心法双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:一、将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。二、加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。三、加酶标抗体:使固

酶联免疫吸附测定的目的和方法介绍

酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA或ELASA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定(ELISA)为免疫学中的经典实验,本词条从定义、基本原理、分类

酶联免疫吸附测定的分类方法

  1、夹心法  夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为:  将具有专一性的抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体;  加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结;  洗去多余待测检体;  洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一

PCR酶联免疫吸附测定的方法特点

中文名称PCR酶联免疫吸附测定英文名称PCRELISA定  义在PCR扩增反应液中加入抗原标记的核苷酸(如地高辛精标记的脱氧尿三磷)使其参入PCR产物,经变性后与特定的能够固定化的寡核苷酸探针杂交,然后用连接了酶的抗体去检测杂交分子的一种聚合酶链反应与酶联免疫吸附测定结合的技术。可用于PCR产物的保

肽酶联免疫吸附测定的方法特点

中文名称肽-酶联免疫吸附测定英文名称peptideELISA定  义以肽为包被抗原的酶联免疫吸附测定。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

关于酶联免疫吸附测定的发展介绍

  亲和素是一种糖蛋白,一分子亲和素可以与四个生物素小分子发生专一亲和作用,类似抗原与抗体亲和。它们之间的作用力是已知最强的非共价作用。80年代后,随着生物素-亲合素系统(BAS)作用被发现,这一亲和作用被结合应用到ELISA技术上,大大提高了后者反应的灵敏性与专一性。生物素很易与蛋白质(如抗体等)

酶联免疫吸附测定方法的注意事项

⒈ 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。⒉ 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:⑴ 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯

酶联免疫吸附测定法的试剂介绍

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体②酶标记的抗原或抗体③酶作用的底物(显色剂)。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

酶联免疫吸附测定标记用酶介绍

用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。过氧化物酶过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量最高,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由

酶联免疫吸附测定的方法类型和操作步骤

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出

酶联免疫吸附测定的方法类型和操作步骤

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本,干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子(或受体)的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出

酶联免疫吸附测定

1 试剂的准备 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。2 标本的采取和保存可用作ELISA测定

关于酶联免疫吸附测定法的试剂介绍

  在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。酶联免疫吸附测定法中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的酶联免疫吸附测定法试剂盒包含以下各组分:  ⑴已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);  ⑵酶标记的抗原或抗体(结合物);  ⑶酶的底物;  ⑷阴性对照品和阳性对照品(定性测定中

斑点酶联免疫吸附测定(DELISA)材料和方法

(以快速诊断口蹄疫为例) 斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少

酶联免疫吸附测定(ELISA)

基本原理    1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量测定的文章,使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是:①使抗原

斑点酶联免疫吸附测定

实验概要斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少,节省材料,不需特殊仪

斑点酶联免疫吸附测定

实验概要斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少,节省材料,不需特殊仪

斑点酶联免疫吸附测定

实验概要斑点酶联免疫吸附测定法(DotELISA,DELISA)是以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。DELISA不仅保留了常规ELISA的优点,而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不牢等不足,所以具有敏感性高,特异性强,被检样品用量少,节省材料,不需特殊仪

酶联免疫吸附测定的原理

  原理是抗原与抗体之间的特异性结合。酶联免疫吸附是在固相载体上包被好能与目的抗原特异性结合的抗体,当检测样本中含有目的抗原时,其会与固相载体上的抗体相结合,并加入和链接化学发光酶,通过冲洗去掉其他非目的抗原,加入显色底物与之反应,此时吸光度越大也就是颜色越深的就说样本中明目的抗原越多,没有颜色反应

酶联免疫吸附测定的原理

  酶联免疫吸附测定基本原理:抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面;测定时,将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物;反应终止时,固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例;经洗涤去除反

酶联免疫吸附测定的简介

  酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定(ELISA)为免疫学中的经典实验,本词条从定义、基本原理、分类方法、操作

酶联免疫吸附测定的原理

原理是抗原与抗体之间的特异性结合。酶联免疫吸附是在固相载体上包被好能与目的抗原特异性结合的抗体,当检测样本中含有目的抗原时,其会与固相载体上的抗体相结合,并加入和链接化学发光酶,通过冲洗去掉其他非目的抗原,加入显色底物与之反应,此时吸光度越大也就是颜色越深的就说样本中明目的抗原越多,没有颜色反应的就

关于酶联免疫吸附测定法标记用酶的介绍

  用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。  1、酶联免疫吸附测定法标记用酶—过氧化物酶  过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量最高,从

关于酶联免疫吸附测定法的注意事项介绍

  1、正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。  2、在酶联免疫吸附测定法中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:  (1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体

猪尿中克伦特罗检测方法—酶联免疫吸附测定法

  猪尿中克伦特罗检测方法—酶联免疫吸附测定法   前言   克伦特罗为β—肾上腺素受体激动药,是一种用于人治疗哮喘、支气管痉挛的药物。研究发现在饲料中添加克伦特罗可促进动物生长、提高瘦肉率,特别是改进脂肪型动物的肉与脂肪的比例,猪饲用后生长速度快,体型好,且瘦肉多、脂肪少,被当作“瘦肉精”而成

猪尿中克伦特罗检测方法—酶联免疫吸附测定法

前言克伦特罗为β—肾上腺素受体激动药,是一种用于人治疗哮喘、支气管痉挛的药物。研究发现在饲料中添加克伦特罗可促进动物生长、提高瘦肉率,特别是改进脂肪型动物的肉与脂肪的比例,猪饲用后生长速度快,体型好,且瘦肉多、脂肪少,被当作“瘦肉精”而成为一些饲料生产企业和养猪户的“秘密武器”。但是克伦特罗进入猪体

关于酶联免疫吸附测定法的基本原理介绍

  ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。  ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原

介绍一下酶联免疫吸附测定法的优缺点

酶联免疫吸附测定法(ELISA)具有以下优点:优点:高灵敏度:能够检测到非常低浓度的目标物质,通常可达 pg/mL 甚至 fg/mL 级别。特异性强:使用特异性的抗体,对目标抗原具有高度的选择性,能有效区分相似的分子。操作相对简便:不需要复杂的仪器设备,经过一定培训的人员即可操作。高通量:可以同时处

酶联免疫吸附测定法测定亲和素的介绍

  亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合。维生素H,分子量244.31,存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物,生物素-羟基琥珀亚胺酯(biotin-hydroxysuccinimide,BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小

酶联免疫吸附测定(ELISA)操作要点

1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝