DEAE葡聚糖凝胶的概念
中文名称DEAE-葡聚糖凝胶英文名称diethylaminoethyl dextran gel;DEAE-dextran gel定 义亲水性交联葡聚糖离子交换剂。是以交联葡聚糖G25或G50为基质,通过化学方法引入电荷基团二乙氨乙基,制成外形呈珠状的弱碱型阴离子交换剂,此类交换剂对核酸和蛋白质有较高的结合容量,且流速比无定形纤维素离子交换剂快。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)......阅读全文
DEAE葡聚糖凝胶的概念
中文名称DEAE-葡聚糖凝胶英文名称diethylaminoethyl dextran gel;DEAE-dextran gel定 义亲水性交联葡聚糖离子交换剂。是以交联葡聚糖G25或G50为基质,通过化学方法引入电荷基团二乙氨乙基,制成外形呈珠状的弱碱型阴离子交换剂,此类交换剂对核酸和蛋白质有较
DEAE葡聚糖凝胶的概念和用途
中文名称DEAE-葡聚糖凝胶英文名称diethylaminoethyl dextran gel;DEAE-dextran gel定 义亲水性交联葡聚糖离子交换剂。是以交联葡聚糖G25或G50为基质,通过化学方法引入电荷基团二乙氨乙基,制成外形呈珠状的弱碱型阴离子交换剂,此类交换剂对核酸和蛋白质有较
DEAE葡聚糖法的概念
DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一,DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取,用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究,但用于稳定转染却不是十分可靠。
DEAE葡聚糖凝胶的主要用途
中文名称DEAE-葡聚糖凝胶英文名称diethylaminoethyl dextran gel;DEAE-dextran gel定 义亲水性交联葡聚糖离子交换剂。是以交联葡聚糖G25或G50为基质,通过化学方法引入电荷基团二乙氨乙基,制成外形呈珠状的弱碱型阴离子交换剂,此类交换剂对核酸和蛋白质有较
DEAE葡聚糖转染试剂的功能特点
DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一,DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取,用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究,但用于稳定转染却不是十分可靠。
化学转染法DEAE葡聚糖法应用
DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一,DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取,用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究,但用于稳定转染却不是十分可靠。
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
用小鼠L型成纤维细胞来进行条件优比的,但只需稍做修改即可适用于几乎任何细胞。根据所研究的细胞类型进行方法优化十分关键。实验材料DNA试剂、试剂盒TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS仪器、耗材培养箱离心管实验步骤1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿,培养3天至30%~50%汇片。
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿,培养3天至30%~50%汇片。 2. 对每个待转染培养皿,用乙醇沉淀4 μg 待转染的质粒DNA,在组织培养橱中晾干沉淀,重悬于40 μl
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
基本方案 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 二磷酸氯喹DEAE-葡聚糖磷酸盐缓冲液含葡萄糖的 Tris-缓冲盐溶液质粒 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。二磷酸氯喹(100 mmol/L)溶解 60 mg
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 二磷酸氯喹 DEAE-葡聚糖磷酸盐缓冲液 含葡萄糖
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
在此介绍经典 DEAE-葡聚糖转染方法的两种形式。第一种(主要方案)细胞短时间接触髙浓度 DEAE-葡聚糖,转染效率较髙,但对细胞的毒性较大。第二种 (备选方案:DEAE-葡聚糖介导的转染:增强细胞存活力)细胞长时间接触较低浓度的 DEAE-葡聚糖,转染效率较低,但细胞存活率较高。本实验来源于分子克
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
在此介绍经典 DEAE-葡聚糖转染方法的两种形式。第一种(主要方案)细胞短时间接触髙浓度 DEAE-葡聚糖,转染效率较髙,但对细胞的毒性较大。第二种 (备选方案:DEAE-葡聚糖介导的转染:增强细胞存活力)细胞长时间接触较低浓度的 DEAE-葡聚糖,转染效率较低,但细胞存活率较高。本实验来源于分子克
葡聚糖凝胶的用途
利用分子筛作用,进行多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定。 交联葡聚糖的商品名为Sephndex,不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。
葡聚糖凝胶的简介
葡聚糖凝胶指的是由一定平均相对分子质量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚桥形式相互交联而成,具有立体网状结构,应用面广的一类凝胶,国外商品名为Sephadex。交联度的大小,可通过控制交联剂(一般为环氧氯丙烷) 和葡聚糖的配比以及反应条件来控制。
葡聚糖凝胶的简介
葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶液中溶胀。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度,因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。 葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗
葡聚糖凝胶的储运特性
1、未使用,室温保存即可。 2、使用后保存方法如下:凝胶层析的载体不会与被分离的物质发生任何作用,因此凝胶柱在层析分离后稍加平衡即可进行下一次的分离操作。但使用多次后,由于床体积变小,流动速率降低或杂质污染等原因,使分离效果受到影响。此时对凝胶柱需进行再生处理,其方法是:先用水反复进行逆向冲洗
葡聚糖凝胶的方法分类
1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干; 2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后; 3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗至
葡聚糖凝胶的储运特性
1、未使用,室温保存即可。 2、使用后保存方法如下:凝胶层析的载体不会与被分离的物质发生任何作用,因此凝胶柱在层析分离后稍加平衡即可进行下一次的分离操作。但使用多次后,由于床体积变小,流动速率降低或杂质污染等原因,使分离效果受到影响。此时对凝胶柱需进行再生处理,其方法是:先用水反复进行逆向冲洗
什么是葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶指的是由一定平均相对分子质量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚桥形式相互交联而成,具有立体网状结构,应用面广的一类凝胶,国外商品名为Sephadex。交联度的大小,可通过控制交联剂(一般为环氧氯丙烷) 和葡聚糖的配比以及反应条件来控制。
葡聚糖凝胶柱使用
做葡聚糖凝胶层析分离蛋白肽过程中,填充一般柱子需要2/3以上,灌时先加2-3毫升相应的缓冲液,然后,用玻棒轻轻绞匀再灌,不能产生气泡,也不能使它干掉,以免产生龟裂影响实验结果.
葡聚糖的概念和作用
葡聚糖是指以葡萄糖为单糖组成的同型多糖,葡萄糖单元之间以糖苷键连接。其中根据糖苷键的类型又可分为alpha-葡聚糖和beta-葡聚糖。alpha-葡聚糖中研究及使用较多的为dextran ,又称右旋糖酐。为一种多糖。存在于某些微生物在生长过程中分泌的粘液中。随着微生物种类和生长条件的不同,其结构也有
葡聚糖凝胶的产品用途介绍
产品用途 利用分子筛作用,进行多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定。 交联葡聚糖的商品名为Sephndex,不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。 简介 葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶,含有大量的羟基,很容易在水中和电解质溶液中溶胀。G型的葡聚糖凝
葡聚糖凝胶层析(分子排阻层析或凝胶过滤)
【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。2.学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。 【实验原理】 凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤,是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术,这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。层析的固定相载体是凝胶颗粒,目前应
关于葡聚糖凝胶的方法分类介绍
1、乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干; 2、无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后; 3、盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗至
葡聚糖凝胶的理化性质介绍
化学稳定性 葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的,在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶,因而应避免使用。 物理稳定性 葡聚糖凝胶并不熔融,可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它
简述交联葡聚糖凝胶的制备过程
葡聚糖凝胶微珠表面形态存在粒子凝集和表面粗糙两种不良情况。粒子凝集的原因是分散剂聚醋酸乙烯酯(PVAc)在碱性条件下水解导致亲水性增强,以及交联反应的中间产物具有絮凝作用。另外,交联后粒子粘度增大也可导致凝集。葡聚糖微珠表面粗糙是由于后处理时PVAc的微小附着物没有从微珠表面完全除去而造成的。作
关于交联葡聚糖凝胶的基本介绍
SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephadex,不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克,同样G-200为每克干胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、
葡聚糖凝胶层析脱盐(Desalination)(2)
五. 操作步骤层析柱的准备(1) 清洗:每组取一支层析柱,用清水冲洗干净。(若玻璃柱较脏,应卸去塑料装置,先入洗液中浸泡2小时。)(2) 安装与检查:检查出口装置中尼龙绸或烧结滤板是否完好干净。安装层析柱,让其垂直固定于滴定台架上。对准出口处,放一只250mL烧杯。向层析柱内灌洗脱剂,打开出口螺旋夹
葡聚糖凝胶层析脱盐(Desalination)(1)
一. 目的学习凝胶层析的工作原理和操作方法掌握利用葡聚糖凝胶层析进行蛋白质脱盐的技术二. 原理凝胶层析又称凝胶过滤或排阻层析。凝胶过滤的主要装置是填充有层析介质的层析柱。1. 层析介质的特点(1)遇水为不溶解的固相; (2)是化学惰性物质;(3)离子基团含量少; (4)颗粒大小和网眼均匀;(5)机械