真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿，培养3天至30%~50%汇片。 2. 对每个待转染培养皿，用乙醇沉淀4 μg 待转染的质粒DNA，在组织培养橱中晾干沉淀，重悬于40 μl TBS中。3. 吸去培养液，用10 ml 1×PBS洗涤培养皿，再用4 ml 完全DMEM-10NS洗1次。 4. 将DNA缓慢地（同时不断晃动试管）加入80 μl 预热的10 mg/ml DEAE-葡聚糖/TBS中。用200 μl 的移液器逐滴加120 μl DNA/DEAE-葡聚糖至每个培养皿中，使其均匀地覆盖整个培养皿表面，轻轻旋动使之均匀一致，直到获得一致的红颜色。在加湿的CO2培养箱中培养4 h（对某些类型的细胞可短一些）。5. 从......阅读全文
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
基本方案 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿，培养3天至30%~50%汇片。 2. 对每个待转染培养皿，用乙醇沉淀4 μg 待转染的质粒DNA，在组织培养橱中晾干沉淀，重悬于40 μl
真核细胞利用DEAE葡聚糖的转染实验
用小鼠L型成纤维细胞来进行条件优比的，但只需稍做修改即可适用于几乎任何细胞。根据所研究的细胞类型进行方法优化十分关键。实验材料DNA试剂、试剂盒TBSDMEM葡聚糖DMSOPBS仪器、耗材培养箱离心管实验步骤1. 接种约5×105小鼠L型成纤维细胞/10 cm培养皿，培养3天至30%~50%汇片。
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
在此介绍经典 DEAE-葡聚糖转染方法的两种形式。第一种（主要方案）细胞短时间接触髙浓度 DEAE-葡聚糖，转染效率较髙，但对细胞的毒性较大。第二种 (备选方案：DEAE-葡聚糖介导的转染：增强细胞存活力）细胞长时间接触较低浓度的 DEAE-葡聚糖，转染效率较低，但细胞存活率较高。本实验来源于分子克
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 二磷酸氯喹 DEAE-葡聚糖磷酸盐缓冲液 含葡萄糖
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
在此介绍经典 DEAE-葡聚糖转染方法的两种形式。第一种（主要方案）细胞短时间接触髙浓度 DEAE-葡聚糖，转染效率较髙，但对细胞的毒性较大。第二种 (备选方案：DEAE-葡聚糖介导的转染：增强细胞存活力）细胞长时间接触较低浓度的 DEAE-葡聚糖，转染效率较低，但细胞存活率较高。本实验来源于分子克
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 二磷酸氯喹DEAE-葡聚糖磷酸盐缓冲液含葡萄糖的 Tris-缓冲盐溶液质粒 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。二磷酸氯喹（100 mmol/L)溶解 60 mg
DEAE葡聚糖转染试剂的功能特点
DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。
化学转染法DEAE葡聚糖法应用
DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。
真核细胞转染实验
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。实验材料真核细胞试剂、试剂盒脂质体 转染液仪器、耗材CO2孵箱 离心管 6孔板
真核细胞转染实验
真核细胞的转染 实验材料 真核细胞 试剂、试剂盒 脂质体 转染液
真核细胞的转染实验步骤
1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml完全培养基，置CO2孵箱中37℃培养过夜。 2. 待细胞长到50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液： i. 溶液A：将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中，静置5min ii. 溶液B：将2-25?l Lipo
电穿孔转染真核细胞实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材 电穿孔仪器电击池实验步骤 1. 在完全培养液中培养特转染细胞至对数生长晚期，4℃ 640 g 离心5 min，收集细胞。 2. 将细胞沉淀用其半量体积的预冷电穿孔缓冲液重悬洗涤，4℃ 640 g 离心5 min。3. 对于稳
真核细胞的转染实验步骤
1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml完全培养基，置CO2孵箱中37℃培养过夜。2. 待细胞长到50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液： i. 溶液A：将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中，静置5minii. 溶液B：将2-25?l Lipofec
电穿孔转染真核细胞实验
电穿孔转染哺乳动物细胞 植物原生质体细胞 实验材料 哺乳动物细胞
DEAE葡聚糖凝胶的概念
中文名称DEAE-葡聚糖凝胶英文名称diethylaminoethyl dextran gel;DEAE-dextran gel定 义亲水性交联葡聚糖离子交换剂。是以交联葡聚糖G25或G50为基质，通过化学方法引入电荷基团二乙氨乙基，制成外形呈珠状的弱碱型阴离子交换剂，此类交换剂对核酸和蛋白质有较
DEAE葡聚糖法的概念
DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。
脂质体介导的真核细胞转染实验
脂质体介导短暂表达 脂质体进行稳定转染 哺乳动物细胞的选择标记 实验材料 哺乳动物细胞
脂质体介导的真核细胞转染实验
实验材料 哺乳动物细胞试剂、试剂盒 质粒DNA完全培养基氯化铯DMEM仪器、耗材 培养皿培养箱聚苯乙烯管实验步骤 1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO2培养箱中 培养过夜，直至细胞80%汇片。（如果用100 mm 培养皿代替六孔扳，则培养细胞至80%汇片
磷酸钙介导的真核细胞转染实验——高效转染法
实验材料真核细胞试剂、试剂盒完全培养液TEBES仪器、耗材培养箱平板实验步骤1. 转染前一天接种呈指数生长的细胞，密度为5×105/10 cm 平板。加10 ml 完全培养液，在开始转染时细胞数应＜106/平板，以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μ
关于化学转染的方法介绍
1.DEAE-葡聚糖法 DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。 2.磷酸钙法 磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得
磷酸钙介导的真核细胞转染实验
磷酸钙法 高效转染法 实验材料 真核细胞 试剂、试剂盒
磷酸钙介导的真核细胞转染实验
实验材料 真核细胞试剂、试剂盒 CaCl2HEPES缓冲液氯化铯PBS仪器、耗材 培养箱锥形管离心管实验步骤 1. 在转染前一天将细胞分入10 cm 组织培养平板中。当被转染的细胞是贴壁细胞，倍增时间为18~24 h时，一般按1：15从长满的培养皿中分细胞效果较好，转染的当天，细胞应在培养
脂质体介导的真核细胞转染实验——脂质体进行稳定转染
实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒DMEM仪器、耗材培养箱离心管实验步骤1. 接种细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤1）长至50%汇片。 2. 制备DNA/脂质体混合物，转染细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤2和3）。3. 每孔细胞加入1 ml DMEM-20完全培养液，37℃ 培养箱培养48
DEAE葡聚糖凝胶的概念和用途
中文名称DEAE-葡聚糖凝胶英文名称diethylaminoethyl dextran gel;DEAE-dextran gel定 义亲水性交联葡聚糖离子交换剂。是以交联葡聚糖G25或G50为基质，通过化学方法引入电荷基团二乙氨乙基，制成外形呈珠状的弱碱型阴离子交换剂，此类交换剂对核酸和蛋白质有较
电穿孔转染真核细胞实验——电穿孔转染哺乳动物细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材电穿孔仪器电击池实验步骤1. 在完全
DEAE葡聚糖凝胶的主要用途
中文名称DEAE-葡聚糖凝胶英文名称diethylaminoethyl dextran gel;DEAE-dextran gel定 义亲水性交联葡聚糖离子交换剂。是以交联葡聚糖G25或G50为基质，通过化学方法引入电荷基团二乙氨乙基，制成外形呈珠状的弱碱型阴离子交换剂，此类交换剂对核酸和蛋白质有较
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 CaCl2氯喹Giemsa 染液甘油HEPES 盐缓冲液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠TE质粒 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿（60 mm) 或 12 孔板实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。CaCl
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 CaCl2 氯喹 Giemsa 染液
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
本方法中介绍的磷酸钙介导的质粒 DNA 转染贴壁细胞是对 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改进。Jordan 等大大优化了磷酸钙介导的中国仓鼠卵巢细胞与人胚肾 293 细胞的转染方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数