镍柱纯化蛋白没有挂柱是什么原因
可能有多种原因导致 蛋白不挂柱子。例如：因为 His标签被包到了蛋白三维结构里面。镍介质无法接触His 标签；纯化工艺不利于结合作用发挥，例如咪唑；蛋白不稳定，标签掉落。......阅读全文
镍柱纯化蛋白没有挂柱是什么原因
可能有多种原因导致 蛋白不挂柱子。例如：因为 His标签被包到了蛋白三维结构里面。镍介质无法接触His 标签；纯化工艺不利于结合作用发挥，例如咪唑；蛋白不稳定，标签掉落。
镍柱纯化蛋白没有挂柱是什么原因
可能有多种原因导致 蛋白不挂柱子。例如：因为 His标签被包到了蛋白三维结构里面。镍介质无法接触His 标签；纯化工艺不利于结合作用发挥，例如咪唑；蛋白不稳定，标签掉落。
镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗
ni柱中的氯化镍可以与有his（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗
财大气粗到只用一次的话，就不用去除了。如果和我做学生时一样，一定要去除哦。先用纯化buffer，再用无菌水，再用20%乙醇。
镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗
ni柱中的氯化镍可以与有his（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤是什么
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤是什么
步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加个恒流泵，但是一定不能太快，太快挂柱效果差，当然你也可以选择循环
镍柱纯化蛋白不挂住怎么办
有his标签么？要不就是beads的事？是你自己装的柱么？多长时间了？还有可能是你的蛋白构象变了，可能把his部分裹在里边了，找找别的条件，或者换NC端。
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀
蛋白浓度过高的时候，会发生聚集而沉淀。有些不易溶蛋白随着镍柱的富集作用就会沉淀。由于不知道你实验目的，简单认为你要纯化表达的蛋白，解决方法：1. 换更强亲水肽段载体pet50（从酶切链接开始做），但是这样会在表达出来蛋白中增加非目的蛋白成分2. 不要用最佳浓度咪唑洗脱，用稍差一些的，这样洗脱出来蛋白
带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题
1.蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性，其次和保存条件优化有关；2.尽量避免蛋白的反复冻融，这会对蛋白的结构和活性造成破坏；像你说到的第二天就要用，根本没必要放在-70℃低温，一般来讲，尽量安排好实验周期，在3天内用完蛋白（4℃保存）是理想条件；3.如果不得不保存，要分装，留下马上就用的
带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题
蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性，其次和保存条件优化有关；尽量避免蛋白的反复冻融，这会对蛋白的结构和活性造成破坏；像你说到的第二天就要用，根本没必要放在-70℃低温，一般来讲，尽量安排好实验周期，在3天内用完蛋白（4℃保存）是理想条件；如果不得不保存，要分装，留下马上就用的放在4℃，其
为什么镍柱纯化洗脱下来的酶透析后就没有活性了
不用的好,你失去活性你可以监测一下提取,纯化,酶...那些时髦但不一定好用,常用的有透析复性,稀释复性...(包括洗脱液的选择和谁先被洗脱下来等),
蛋白纯化反相柱的选择
HP-RPC的选择首先要看蛋白质的分子量，20kDa左右的一般用C4或C8，再小一点的可以用C18，太大的蛋白并不适于反相分离。C18通用性最好，但是有时候保留过强可能会导致收率较低。如果目的蛋白不是很针对，可以考虑通用性最强的C18柱。一般来说，4.6mm的内径比较常见，250mm长的柱子比150
蛋白过镍柱纯化的过程中咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中－咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中－咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中－咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
镍柱纯化后的蛋白，上下翻转混匀时易聚沉
镍柱纯化后纯度不错，但是很不稳定。为了防止蛋白浓缩前就沉在浓缩管中，我会在15ml管中预混合几管蛋白，如果小心操作，用移液枪吹吸混匀，最高可以浓缩到5mg/ml左右；如果上下翻转混匀，就会在管中迅速沉淀，伴有大量泡沫（絮状沉淀会挂在气泡上）而吹吸混合几乎不产生泡沫。
镍柱纯化蛋白过程中流速过快或过慢有什么影响
因为NI柱靠金属螯合层析--NI与6个或者更多的咪唑环结合而把蛋白结合下来的，这种结合里相对较弱，一般来讲，在过柱子的过程中有很多NI只与组氨酸标签中的一部分咪唑环结合，所以在这种情况下如果流速过快会阻碍他们进一步的结合，另外，流速过快大大缩短了NI与咪唑环结合的时间，减低了结合几率,所以用镍柱纯化
基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
。。。等待高人回答txstbbm(站内联系TA)可能情况：1，ORF不完整或者不是预期的ORF，His没表达出来2，His被空间结构所掩盖，建议变性后再过柱cloudy3197(站内联系TA)同一ls，可能跟蛋白空间结构有关，变性后再上柱。2. 柱子是新的还是以前用过的,旧的应该很好的处理一下,3.
蛋白过镍柱纯化的过程中咪唑是哪部用的
步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加个恒流泵，但是一定不能太快，太快挂柱效果差，当然你也可以选择循环
色谱柱柱效降低极快是什么原因
不会有太大问题的，放心吧。因为色谱系统是一个流路系统，你关闭泵后仅仅是关闭了动力输入，但是废液还是在不停的向柱后排出，直至色谱柱前端压力降至0为止。所以不管你压力是否降到0，色谱柱仍然在向后排液来降低压力，不会有压力一直保存在柱内的情况。不过压力没降就关闭泵确实不是一个好习惯，因为色谱柱内的固定相填
色谱柱柱效降低极快是什么原因
因为色谱系统是一个流路系统，你关闭泵后仅仅是关闭了动力输入，但是废液还是在不停的向柱后排出，直至色谱柱前端压力降至0为止。所以不管你压力是否降到0，色谱柱仍然在向后排液来降低压力，不会有压力一直保存在柱内的情况。不过压力没降就关闭泵确实不是一个好习惯，因为色谱柱内的固定相填充是有排列顺序和方向的，这
色谱柱柱效降低极快是什么原因
不会有太大问题的，放心吧。因为色谱系统是一个流路系统，你关闭泵后仅仅是关闭了动力输入，但是废液还是在不停的向柱后排出，直至色谱柱前端压力降至0为止。所以不管你压力是否降到0，色谱柱仍然在向后排液来降低压力，不会有压力一直保存在柱内的情况。不过压力没降就关闭泵确实不是一个好习惯，因为色谱柱内的固定相填
色谱柱柱效降低极快是什么原因
不会有太大问题的，放心吧。因为色谱系统是一个流路系统，你关闭泵后仅仅是关闭了动力输入，但是废液还是在不停的向柱后排出，直至色谱柱前端压力降至0为止。所以不管你压力是否降到0，色谱柱仍然在向后排液来降低压力，不会有压力一直保存在柱内的情况。不过压力没降就关闭泵确实不是一个好习惯，因为色谱柱内的固定相填
镍柱上的咪唑
为什么咪唑可以把镍柱上的组氨酸蛋白洗脱下来?(1) 发布时间：2018-11-09 蛋白纯化 分子筛。 随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的
液相色谱柱柱压持续升高是什么原因
压力升高基本是由于系统管路堵塞导致的，可以先把柱子卸掉，换上双通，测试下系统压力，如果压力正常，则说明是柱子的问题，需要对柱子进行冲洗或者反冲；如果压力还是偏高，则需要逐段管路来排查，找到堵塞的管路再对其进行反冲或者更换。