蛋白过镍柱纯化的原理和步骤是什么
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加个恒流泵，但是一定不能太快，太快挂柱效果差，当然你也可以选择循环挂柱，就是恒流泵的一头接你装蛋白的烧杯，从柱子中留下来的液体还用同一个烧杯接回去。挂完之后，按理想来讲，你的蛋白在Ni柱中与Ni就结合了，杂蛋白多数在烧杯里，留下来了，当然肯定有少量杂蛋白也挂上了，这时候你要梯度洗脱，拿咪唑和你的buffer配，一般从0 20mM 40mM。。。。100mM这样洗脱（当你不知道你的蛋白大概在什么时候出来的时候）我指的是咪唑的终浓度。咪唑加入之后，会和蛋白争夺与Ni的结合位点，杂蛋白、你的目的蛋白，会在不同的浓度被洗脱下来，洗完之......阅读全文
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱binding有白色沉淀怎么办
蛋白结合在镍柱上后，镍柱就会由蓝色变为白色，那些白色沉淀其实就是镍柱，洗脱后就变回白色了。
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤是什么
步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加个恒流泵，但是一定不能太快，太快挂柱效果差，当然你也可以选择循环
蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀
蛋白浓度过高的时候，会发生聚集而沉淀。有些不易溶蛋白随着镍柱的富集作用就会沉淀。由于不知道你实验目的，简单认为你要纯化表达的蛋白，解决方法：1. 换更强亲水肽段载体pet50（从酶切链接开始做），但是这样会在表达出来蛋白中增加非目的蛋白成分2. 不要用最佳浓度咪唑洗脱，用稍差一些的，这样洗脱出来蛋白
蛋白过镍柱纯化的原理和步骤是什么
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中咪唑是哪部用的
步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太慢，可以加个恒流泵，但是一定不能太快，太快挂柱效果差，当然你也可以选择循环
蛋白过镍柱纯化的过程中－咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中－咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中－咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
蛋白过镍柱纯化的过程中咪唑是哪部用的
Ni柱中的氯化镍可以与有HIs（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择Ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗
ni柱中的氯化镍可以与有his（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗
财大气粗到只用一次的话，就不用去除了。如果和我做学生时一样，一定要去除哦。先用纯化buffer，再用无菌水，再用20%乙醇。
镍柱纯化蛋白后，镍柱上的咪唑用除去吗
ni柱中的氯化镍可以与有his（组蛋白）标签的蛋白结合，也可以与咪唑结合。步骤是：过柱子前可以选择ni柱重生，也就是往柱子里倒氯化镍，一个柱长体积就行了，然后平衡柱子，拿你自己的buffer，给蛋白提供最适的环境，我一般平衡4个柱长，然后蛋白上样，你可以让他自己挂，这样挂柱子的效果好一些，如果流速太
镍柱纯化蛋白没有挂柱是什么原因
可能有多种原因导致 蛋白不挂柱子。例如：因为 His标签被包到了蛋白三维结构里面。镍介质无法接触His 标签；纯化工艺不利于结合作用发挥，例如咪唑；蛋白不稳定，标签掉落。
镍柱纯化蛋白没有挂柱是什么原因
可能有多种原因导致 蛋白不挂柱子。例如：因为 His标签被包到了蛋白三维结构里面。镍介质无法接触His 标签；纯化工艺不利于结合作用发挥，例如咪唑；蛋白不稳定，标签掉落。
镍柱纯化蛋白不挂住怎么办
有his标签么？要不就是beads的事？是你自己装的柱么？多长时间了？还有可能是你的蛋白构象变了，可能把his部分裹在里边了，找找别的条件，或者换NC端。
带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题
蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性，其次和保存条件优化有关；尽量避免蛋白的反复冻融，这会对蛋白的结构和活性造成破坏；像你说到的第二天就要用，根本没必要放在-70℃低温，一般来讲，尽量安排好实验周期，在3天内用完蛋白（4℃保存）是理想条件；如果不得不保存，要分装，留下马上就用的放在4℃，其
带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题
1.蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性，其次和保存条件优化有关；2.尽量避免蛋白的反复冻融，这会对蛋白的结构和活性造成破坏；像你说到的第二天就要用，根本没必要放在-70℃低温，一般来讲，尽量安排好实验周期，在3天内用完蛋白（4℃保存）是理想条件；3.如果不得不保存，要分装，留下马上就用的
镍柱上的咪唑
为什么咪唑可以把镍柱上的组氨酸蛋白洗脱下来?(1) 发布时间：2018-11-09 蛋白纯化 分子筛。 随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的
过柱子操作问题——装柱
柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气
过柱的经验之谈
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。柱子可以分为：加压，常压，减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱
过柱的柱子的尺寸
应该是粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然
基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
。。。等待高人回答txstbbm(站内联系TA)可能情况：1，ORF不完整或者不是预期的ORF，His没表达出来2，His被空间结构所掩盖，建议变性后再过柱cloudy3197(站内联系TA)同一ls，可能跟蛋白空间结构有关，变性后再上柱。2. 柱子是新的还是以前用过的,旧的应该很好的处理一下,3.
镍柱纯化后的蛋白，上下翻转混匀时易聚沉
镍柱纯化后纯度不错，但是很不稳定。为了防止蛋白浓缩前就沉在浓缩管中，我会在15ml管中预混合几管蛋白，如果小心操作，用移液枪吹吸混匀，最高可以浓缩到5mg/ml左右；如果上下翻转混匀，就会在管中迅速沉淀，伴有大量泡沫（絮状沉淀会挂在气泡上）而吹吸混合几乎不产生泡沫。
镍柱纯化蛋白过程中流速过快或过慢有什么影响
因为NI柱靠金属螯合层析--NI与6个或者更多的咪唑环结合而把蛋白结合下来的，这种结合里相对较弱，一般来讲，在过柱子的过程中有很多NI只与组氨酸标签中的一部分咪唑环结合，所以在这种情况下如果流速过快会阻碍他们进一步的结合，另外，流速过快大大缩短了NI与咪唑环结合的时间，减低了结合几率,所以用镍柱纯化
TLC柱层析过柱的技巧
过柱的技巧柱层析按过柱时的压力可以分为： 加压， 常压， 减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度， 减少产品收集的时间， 但是会减低柱子的塔板数。 所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的， 但是时间也最长， 例如一些天然化合物的分离，有时一个柱子过几个月也有可能。减压柱能够减少硅胶的使用量，但是由于
过柱的实验方法和技巧
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。 一：柱子可以分为：加压，常压，减压 1.压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板
过柱的实验方法和技巧
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。 一：柱子可以分为：加压，常压，减压1.压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候