怎样培养噬菌体
将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时。2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。3. 将混合液接种至含10 ml新鲜液体培养基的试管中,于适当温度下振荡培养约8~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。4. 将培养液移入离心管中,以10,000 rpm (5,000 g)离心10分钟,以沉淀寄主细菌。5. 将上清液移至新管中,以0.22μm孔径之过滤器(filter)去除残余菌体,即得不含寄主细菌之噬菌体原液。但因噬菌体原液呈透明状,无法以肉眼直接判断其增殖效果,故应测定其效价以确认增殖培养之成效。......阅读全文
噬菌体的核酸特点
ss RNA:噬菌体中所含的核酸是单链RNA。ds RNA:噬菌体中所含的核酸是双链RNA。ss DNA:噬菌体中所含的核酸是单链DNA。ds DNA:噬菌体中所含的核酸是双链DNA。
温和噬菌体的定义
噬菌体侵入宿主细胞后,噬菌体的DNA只整合在宿主的核染色体上,并可长期随宿主DNA的复制而进行同步复制,一般情况下不进行增殖,不引起宿主细胞裂解的噬菌体,称温和噬菌体或溶源噬菌体。
λ噬菌体DNA提取方法
成功走出第一步:DNA提取 λ噬菌体是最早使用的克隆载体 ,λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子,它在宿主细胞有两种生活途径,其一是裂解生长,环状DNA分子在细胞内多次复制,合成大量噬菌体基因产物,装配成噬菌体颗粒,裂解宿主菌再进行下一次感染;其二是溶源性生长,即感染细胞
噬菌体的繁殖特点
1.毒性噬菌体指在宿主菌体内复制增殖,产生许多子代噬菌体,并最终裂解细菌。毒性噬菌体的增殖方式是复制,其增殖过程经历吸附穿入、生物合成和成熟释放3个阶段。进入菌细胞内的噬菌体核酸首先经早期转录产生早期蛋白质,并复制子代核酸,再进行晚期转录产生噬菌体的结构蛋白。子代噬菌体达到一定数量时,由于噬菌体合成
噬菌体的侵染过程
一个典型的噬菌体的侵染细菌的过程,可以分为三个阶段:感染阶段、增殖阶段和成熟阶段。感染阶段:噬菌体侵染寄主细胞的第一步是“吸附”,即噬菌体的尾部附着在细菌的细胞壁上,然后进行“侵入”。噬菌体先通过溶菌酶的作用在细菌的细胞壁上打开一个缺口,尾鞘像肌动球蛋白的作用一样收缩,露出尾轴,伸入细胞壁内,如同注
Lambda(噬菌体)DNA-Miniprep
David HarryInstitute of Forest GeneticsUSDA Forest ServicePacific Southwest Research StationAugust 26, 1993Background :There are many published method
噬菌体的临床应用
(1)细菌的鉴定与分型噬菌体的作用具有高度特异性。一种噬菌体只能裂解一种或与该种相近的细菌,故可用于细菌的鉴定和分型。目前已利用噬菌体将金黄色葡萄球菌分为四个群数百个型,这种用噬菌体分型的方法,在流行病学调查上,对追查和分析这些细菌性感染的传染源很有帮助。(2)检测标本中的细菌应用噬菌体效价增长试验
噬菌体都有哪些种类
蛋白质结构 无尾部结构的二十面体:这种噬菌体为一个二十面体,外表由规律排列的蛋白亚单位——衣壳组成,核酸则被包裹在内部。 有尾部结构的二十面体:这种噬菌体除了一个二十面体的头部外,还有由一个中空的针状结构及外鞘组成的尾部,以及尾丝和尾针组成的基部。 线状体:这种噬菌体呈线状,没有明显的头部
噬菌体展示技术简介
噬菌体展示技术是一种将外源肽或蛋白基因与噬菌体特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。该技术实现了表型与基因型的统一。随着噬菌体展示技术的进一步发展,其优越性被越来越多的实验室所认识,使得该技术的使用范围不断扩展,也使该技术得以不断的完善和发展。
噬菌体侵染细菌实验
原理:噬菌体T2有一个蛋白质的外壳,DNA裹在其中。当噬菌体T2感染大肠杆菌时,它的尾部吸附在菌体上。然后,菌体内形成大量噬菌体,菌体裂解后,释放出几十个乃至几百个与原来感染细菌一样的噬菌体T2。材料:大肠杆菌,LB培养基,恒温箱,T2噬菌体过程:第一阶段(感染阶段 ) 噬菌体侵染寄主细胞的第一步是
烈性噬菌体的简介
噬菌体的繁殖一般分为5个阶段,即吸附、侵入、增殖(复制与生物合成)、成熟(装配)和裂解(释放)。凡在短时间内能连续完成以上5个阶段而实现其增殖的噬菌体,称为烈性噬菌体(virulent phage),反之则称为温和噬菌体(temperate phage)。
λ噬菌体DNA的制备
实验概要本实验介绍了λ噬菌体DNA的制备、操作步骤和注意事项。实验原理λ噬菌体是最早使用的克隆载体,λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子,它在宿主细胞有两种生活途径:其一是裂解生长,环状DNA 分子在细胞内多次复制,合成大量噬菌体基因产物,装配成噬菌体颗粒,裂解宿主菌再进行下一次
噬菌体生物性状
噬菌体的体积小,其形态有蝌蚪形、微球形和细杆形,以蝌蚪形多见。噬菌体是由核酸和蛋白质构成。蛋白质起着保护核酸的作用,并决定噬菌体的外形和表面特征。其核酸只有一种类型,即DNA或RNA,双链或单链,环状或线状。
噬菌体侵染细菌实验
这种说法有点偏颇。1、当噬菌体的DNA用32磷标记后,它吸附到大肠杆菌表面,然后把DNA注入到大肠杆菌里面,利用其中的原料复制子代的DNA。离心后,较轻的噬菌体悬浮在上清液中,大肠杆菌及一些较重的颗粒沉淀在底部,由于噬菌体中含有32磷的DNA都注入到大肠杆菌里面,所以上清液放射性很低,底部的沉淀物放
M13-噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技
M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用 实验材料 羧苄青霉素 氯霉素 大肠杆菌 CJ2
一种靶向控制噬菌体来对抗细菌的方法:噬菌体疗法
有人的地方就有江湖?微观世界其实也一样残酷。研究人员发现:假单胞菌会利用自己产生的信号分子,选择性操纵竞争菌株中的噬菌体来击败敌人。这个结果或许提示了一种靶向控制噬菌体来对抗细菌的方法:噬菌体疗法。 噬菌体仍然是人类微生物群中一个相对未知的组成部分。然而,它们可以在细菌的生命周期中发挥强大
用噬菌体ElISA快速鉴定噬菌体展示蛋白的结合亲和性
单价噬菌体展示系统能使一个单独的蛋白质(或多肽)分子呈递在噬菌体颗粒表面,这样的蛋白质与野生型pⅢ衣壳蛋白相连,作为融合蛋白在辅助噬菌体感染的大肠杆菌细胞中,由噬菌粒载体翻译表达出来。这种展示系统能实现单价展示,是由于这种融合蛋白极少替代来自辅助噬菌体基因组的野生型pⅢ蛋白。这种展示可以是高度可变的
噬菌体展示技术的应用
噬菌体展示可用于蛋白质-蛋白质相互作用的研究。
温和噬菌体的化学组成
头部衣壳内含有噬菌体的遗传物质即DNA或RNA,尾部有能识别宿主菌细胞表面的特殊受体,与噬菌体的吸附功能有关。
噬菌体文库的扩增实验
基本方案 实验材料 噬菌体 试剂、试剂盒
温和噬菌体的形态介绍
个体微小,结构简单,只含有一种核酸DNA或RNA,只能在活的细胞内以复制方式进行增殖。
噬菌体文库的扩增实验
文库一旦包装就应该尽快进行扩增,它可以大大增加文库的拷贝数,但在扩增时由于克隆的生长速率不同,文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。文库一旦包装就应该尽快进行扩增,它可以大大增加文库的拷贝数,但
噬菌体肽文库的定义
中文名称噬菌体肽文库英文名称phage peptide library定 义将编码多肽的外源基因插入含噬菌体外壳蛋白基因的载体,构建得到能与外壳蛋白融合表达多肽的基因文库。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
gⅥcDNA融合噬菌体ELISA
gⅥ-cDNA融合噬菌体ELISA [器材和试剂] 通用设备及试剂以及以下的设备和试剂: ● 链霉素包被的微量浓度测定板(Pierce) ● T和 2mol/L ● 生物素抗原选择出的(BAS)噬菌体和(或)免疫亲和选择出的(1AS)噬菌体
噬菌体克隆的纯化实验
噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称,作为病毒的一种,噬菌体具有病毒特有的一些特性:个体微小;不具有完整细胞结构;只含有单一核酸。噬菌体基因组含有许多个基因,但所有已知的噬菌体都是在细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身
噬菌体展示技术的原理
噬菌体展示技术其基本原理是:将编码多肽的外源DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后,以融合蛋白的形式呈现在噬菌体的表面,被展示的多肽或蛋白可保持相对的空间结构和生物活性,展示在噬菌体的表面。导入了各种各样外源基因的一群噬菌体,就构成一个展示各种各样外源肽的噬菌体展示库。当用一个蛋白质去筛查一个噬
温和噬菌体的影响因素
决定噬菌体状态的因素很多,除细菌与噬菌体本身的遗传特性外,其中最重要的包括温度、宿主生理状况、菌种及每个细菌所接受的噬菌体数目等。例如用紫外线照射或丝裂霉素C处理,或提高温度,都可诱发溶源性细菌中的原噬菌体转变成烈性噬菌体而导致宿主细胞裂解。但是,从分子水平来看,是因为各种外因,引起了噬菌体CI蛋白
用人血清进行噬菌体ElISA
用人血清进行噬菌体ElISA [器材和试剂] ● 包被缓冲液 ● T ● T[,1%TritonX—100,3% A(Sigma)] ● 兔抗人Fc—特异性IgG(Pierce):用包 被缓冲液稀释为5.0ug/ml① ● HRP标记的抗噬
什么是噬菌体展示技术?
噬菌体展示技术是一种将外源肽或蛋白基因与噬菌体特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。该技术实现了表型与基因型的统一。随着噬菌体展示技术的进一步发展,其优越性被越来越多的实验室所认识,使得该技术的使用范围不断扩展,也使该技术得以不断的完善和发展。
噬菌体展示技术的定义
噬菌体展示技术是一种将外源肽或蛋白基因与噬菌体特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。该技术实现了表型与基因型的统一。随着噬菌体展示技术的进一步发展,其优越性被越来越多的实验室所认识,使得该技术的使用范围不断扩展,也使该技术得以不断的完善和发展。