分子印迹技术的概况
Southern在1975年首先提出了分子印渍的概念。他将琼脂糖凝胶电泳分离的 DNA片段在凝胶中进行变性使其成为单链,然后将一张硝酸纤维素(nitrocellulose, NC)膜放在凝胶上,上面放上吸水纸巾,利用毛细管作用原理使凝胶中的DNA片段转移到 NC膜上,使之成为固相化分子。载有DNA单链分子的 NC膜就可以在杂交液与另一种带有标记的 DNA或RNA分子(即探针)进行杂交,具有互补序列的RNA或DNA结合到存在于NC膜的 DNA分子上,经放射自显影或其他检测技术就可以显现出杂交分子的区带。由于这种技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹,因此称为“blotting”,译为“印迹技术”。 生物大分子印迹技术发展极为迅速,己广泛用于 DNA、RNA、蛋白质的检测。通常人们将DNA印迹技术称为Southern blotting,将RNA印迹技术称为Northern blotting,将蛋白质印迹技术称为Western bl......阅读全文
配体印迹法的技术用途
中文名称配体印迹法英文名称ligand blotting定 义受体或配体经电泳或层析等方法分离后,转移到适宜的薄膜上,再与相应的配体或受体结合,是检测配体与受体相互作用的技术。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
DNA印迹法的技术原理
这种方法最初是由Southern于1975年建立的。方法中DNA转移的方式和复印的过程一样,比较准确地保持了特异DNA顺序在电泳图谱中的位置,也可将变性的凝胶负压干燥后与特定的DNA探针进行原位杂交。它把电泳分离和杂交结合起来,不但能检测出特异的DNA序列片段,而且能进行定位和测定分子量。即先以电泳
什么是western印迹技术
蛋白质经单向电泳后分离后被转移到硝酸纤维滤膜上,然后用放射性或酶标记的特异抗体来检测相应抗原的存在。蛋白质印迹技术是1975年Southern建立了Southern印迹法后,人们用类似的方法对蛋白质进行印迹分析,称为Western印迹法。Western印迹法是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺
快速溶剂萃取技术的概况
快速溶剂萃取技术的概况快速溶剂萃取技术以溶质在不一样有机溶剂中的不一样溶解性为根据,根据迅速溶剂萃取仪与合适的有机溶剂,在高溫、髙压自然环境下,迅速、合理提纯试品中的有机化合物。溶质受高溫度及髙压强的危害,向正反面方位开展,使解吸与融解驱动力速率、有机溶剂熔点均大大提高,自此剖析物可从栽培基质中
热启动PCR技术的概况和特点
1.概述:尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃,聚合酶在室温仍然有活性。因此,在进行PCR反应配制过程中,以及在热循环刚开始,保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。热启动就是PCR仪达到变性温度再加入Taq DNA聚合酶,从而抑制一种基本成分延迟DNA合成。2.应用:如site-di
国内技术发展的概况及需求
1、酶的发展现状 酶作为生物催化剂是生物技术产业化的重要一环,它广泛应用于轻工、化工、医药卫生、食品、环保等行业,酶制剂生产已成为21世纪的新兴产业之一。我国从20世纪60年代开始注意酶工程研究和酶制剂的开发,近年来,国际酶制剂行业发展迅速,这与广泛采用基因工程、蛋白质工程及其他新技术有关。国内
免疫印迹的技术优势
免疫印迹法是一项分析抗原、抗体的技术。它具有下列优点:1、 湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作;2 、固定化的生物大分子可均一的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔;3、 免疫印迹分析只需少量试剂;4、 孵育、洗涤的时间明显减短;5、可同时制作多个拷贝, 用于多种分析和鉴定;6、结果以图谱形
电印迹法的技术方法介绍
中文名称电印迹法英文名称electroblotting定 义将经凝胶电泳分离的蛋白质、DNA或RNA条带通过电泳按原位转移到另外的固体支持物上形成印迹的方法。此法比靠毛细管作用的印迹法效率高,速度快。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
Southern印迹法的技术方法介绍
Southern印迹法(Southern Blot)是将基因组 DNA经限制性内切酶酶解、琼脂糖凝胶电泳分离,使DNA片段按分子量大小排列在琼脂糖凝胶上。经碱处理凝胶使DNA变性(使双链DNA变成单链),通过具有一定盐离子浓度溶液的毛细管作用,将凝胶中变性的单链DNA片段原位地吸印到硝酸纤维素滤膜或
液相色谱仪液体样品预处理技术分子印迹法概念及作用
分子印迹属于超分子研究范畴。它是指制备对某一特定分子(模板分子或印迹分子)具有选择性的聚合物的过程。通常可描述为制造识别“分子钥匙”的人工“锁”技术。如在非共价型印迹中以感兴趣的目标分子充当模板,该分子通过氢键、静电作用、疏水作用等非共价键作用,对可聚合的功能单体进行组装,加入交联剂聚合,然后除去印
分子印迹固相萃取技术在海洋有机污染物分离检测应用
分子印迹技术(Molecular Imprinting Technique, MIT)是一种制备高分子聚合物的新兴技术,合成的高聚物被称为分子印迹聚合物(Molecularly ImprintedPolymer, MIP),具有选择性高、稳定性好、耐酸碱、可重复使用等优点,已经在环境监测、食品安全、
二维分子印迹固相萃取技术纯化石榴皮单宁
分子印迹是一种根据给定模板制备具有特异选择性材料的新兴技术,目前广泛应用于各种目标物的富集与分离,其中包括天然药物中有效组分和活性组分的分离纯化。然而,分子印迹具有一定的技术局限性,阻碍了其进一步应用,主要包括3方面:分子印迹填料的选择性较为单一,往往不能满足复杂体系的分离需求;非共价型分子印迹的非
免疫印迹技术(Immunoblotting-technique)
免疫印迹技术又称蛋白质印迹(Western blotting)是一种借助抗原鉴定特异性抗体的有效方法,该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。本实验以检测可提取性核抗原(ENA)抗体为例。【实验原理】先将ENA混合抗原经SDS-PAGE电泳,使各种抗原成分根据分子量不
outhern印迹及基因组DNA杂交技术实验——Southern-印迹
实验方法原理硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强,当电泳后凝胶经过DNA变性处理,覆以上述滤膜,再于其上方压上多层干燥的吸水纸,借助它对深盐溶液的上吸作用,凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的,即DNA片段的位置保持不变。转移结束后,经过80℃烘烤的DNA,将原位地固定于膜上。实
分子印迹氧肟酸树脂合成羟肟酸高分子的介绍
分子印迹是一项具备特异识别功能的新兴技术,以其高选择性的独特优点吸引了各国研究人员的注意,已成为吸附树脂制备的重要发展方向之一。以La(Ⅲ)、Ce(Ⅲ)、Nd(Ⅲ)等为印迹离子,以丙烯基氧肟酸为单体进行本体聚合,成功制备了对印迹离子具有良好吸附选择性的分子印迹氧肟酸树脂。
Touchdown-PCR技术的概况和特点
1、定义:又称降落PCR.即选定一个温度范围,如50-35℃,每降1-2 ℃进行1-2个循环,然后在50度下进行15个循环。2.原理:随着退火温度的降低,特异性逐步降低,但特异性条带在温度较高时已经扩增出来,其浓度远远超过非特异性条带,随着退火温度的降低,特异性条带优先被扩增。 3.选择初始复
分子印迹聚合物的基本原理介绍
分子印迹技术是在仿生科学和模拟自然界中酶与底物及受体与抗体作用的基础之上发展来的一项技术。分子印迹是通过以下方法实现的:(1)使印迹分子与功能单体(functional monomer)之间通过共价键(covalent)或Π和非共价键(non-covalent)结合,形成主客体配合物(Host-
菌落免疫印迹法的技术用途
中文名称菌落免疫印迹法英文名称colony immunoblotting定 义对吸印转移到滤膜上的菌落作免疫学分析鉴定的技术。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
免疫印迹技术的检查过程
(1) 蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。 (2) 电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。 (3) 转移:(半干式转移) ① 电泳结束后
免疫印迹技术的注意事项
不适宜人群:无 检查时禁忌:无 检查时禁忌:(1) 一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。 (2) 显色液必须新鲜配置使用,最后加入H2O2。 (3) DAB有致癌的潜在可能,操作时要小心仔细。
斑点印迹法的技术方法介绍
中文名称斑点印迹法英文名称dot blotting定 义将点状样品吸印到特定的膜上进行检测的方法。如用硝酸纤维素膜吸印固体培养基上的菌落或噬斑,在膜上原位裂菌或裂解噬菌体后,与特定的标记探针杂交,从而直接从转化的DNA文库或噬菌体文库中筛选所需要的克隆;将不同稀释度的蛋白质吸附在膜上进行显色反应,
免疫印迹技术和免疫斑点技术
免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳与固相免疫结合,首先通过蛋白质电泳技术将需要区分的蛋白质转移至固相载体如NC膜等上,再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子质量,常用于检测多种病毒抗体或抗原。免疫印迹技术又称Western印迹法,它将凝胶电泳
非标记检测(分子互作)市场概况-年增速8.3%
非标记检测(Lable-free detect,LFD)市场主要由仪器和消耗品构成,仪器技术包括:SPR表面等离子体共振,BLI生物层干涉测量,ITC等温滴定量热,DSC差示扫描量热法和其它非标记检测技术。其应用包括:结合动力学,结合热力学,内源性受体检测,活性样品确定,先导物生成和其它应用,最终用
新分子印迹聚合物展现临床诊断前景
光刻硼亲和分子印迹法的原理(A)及步骤(B) 非印迹聚合物(A)和分子印迹聚合物(右)对模板分子的识别作用及裸眼检测 抗体是生命科学研究、疾病治疗和诊断中的重要生物分子,但抗体存在着价格昂贵、稳定性差和与抗原结合后不易洗脱等缺点。因此,价廉、稳定和洗脱方便的抗体的替代品不仅具有重要的科学意义
Southern印迹技术原理和操作步骤
实验原理:Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物(如硝酸纤维素膜、尼龙膜)上,使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段,进行琼脂糖凝胶电泳,各片段因分子量不同而彼此分开,然后经碱处理凝胶,使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将
蛋白质免疫印迹技术
实验概要免疫印迹是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳来检测样品或提取物中某种特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝胶紧贴着膜放置,在电流的作用下蛋白质从凝胶迁移到膜上并且被固定,常用的膜是硝酸纤维素或 PVDF(聚偏乙烯氟化物)。膜是凝胶蛋白质的复制品,然后可以与抗体结合后进行染色。实验步骤1. 样品准备1) 抽
Northern印迹的制备和Northern印迹
Northern印迹的制备 预备: 1.按下述步骤,每泳道加10~20μg总RNA或 0.5~1μgpoly(A)+RNA进行甲醛/ 琼脂糖凝胶电泳,将凝胶放在紫外线透照仪上,旁边置一标尺进行拍照。 a. 总RNA(10~20μg)用下列溶液在65℃温育5min:
蛋白质印迹法的技术分类
Western Blot显色的方法主要有以下几种:i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理
蛋白质印迹法的技术原理
与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似,但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附
免疫印迹法的技术特点和应用
免疫印迹法 (Western Blot) 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点,是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法,如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。免疫印迹法 (immunob