分离42和55之间的蛋白用多少浓度的胶比较好
一般凝胶浓度低是容易出现条带模糊的情况。个人手法是:用好点的材料制备凝胶来进行分析。10%的浓度可以用来分离这两种蛋白,将电泳电压在后半程调高可改善条带清晰度。也可以调高分离胶浓度至12%,但差别会较10%的更小。是在不行可以考虑用梯度胶分。“用好点的材料”是说的丙烯酰胺和甲叉。“将电泳电压在后半程调高改善条带扩散”,分离胶用135V,缩短电泳时间。两种浓度的差别也不是太大。为了扩大差别,可以通过预染marker来控制电泳时间,将小分子的蛋白跑出去,用更多的凝胶长度来加大两者的差别。不过电泳时间延长对条带清晰程度会有影响。样品的pH也会对条带的清晰程度有影响,以前做分子量和差不多大的酵母样时,条带就有些模糊。其实有时只要能将两者区分开,不一定非要追求最佳分离效果。......阅读全文
蛋白质胰蛋白酶磷酸肽图谱制定实验——固相蛋白消化
试剂、试剂盒甲醇PVP-360(溶于乙酸)50 mmol L 碳酸氢铵pH 8.0仪器、耗材PVDF 膜/硝酸纤维素膜保鲜膜/聚酯薄膜实验步骤1. 用 SDS-PAGE 凝胶电泳分离 32P 标记的样品,用标准的湿式或半干式蛋白质转移方法将蛋白质转移到 PVDF 或硝酸纤维素膜上。2. 将膜晾干并用
完全蛋白质、不完全蛋白质及半完全蛋白质的概念
完全蛋白质所含必需氨基酸种类齐全,数量充足,相互之问比例也适当,不但能够维持成人的健康,也能够促进人体的生长发育,如乳中的酪蛋白、蛋类中的卵白蛋白、大豆球蛋白、小麦中的麦符蛋白等。 半完全蛋白质所含各种必需氨基酸种类齐全,但各种氨基酸含量多少不匀,互相之间比例不合适。在膳食中作为唯一的蛋白质来源时,
邻位连接技术PLA在蛋白蛋白相互作用,蛋白磷酸化修饰..
邻位连接技术PLA在蛋白-蛋白相互作用,蛋白磷酸化修饰的应用摘要 邻位连接技术(proximityligationassay,PLA),是新研发的一项高灵敏度的蛋白质体外分析技术。该方法利用一对邻位探针(proximityprobes)对靶分子进行双识别,通过连接反应产生可扩增的检测信号,以实时PC
蛋白质溶液中加入丙酮来沉淀蛋白会导致蛋白质变性吗
蛋白质溶液中加入丙酮来沉淀蛋白,这不会导致蛋白质变性蛋白质沉淀的定义:蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation),变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀。蛋白质沉淀的方法:盐析法 ——多用于各种蛋白质和酶的分离纯
蛋白共沉淀检测实验_备择-用GST融合蛋白
实验材料全细胞抽提物试剂、试剂盒谷胱甘肽-琼脂糖或者谷胱甘肽-琼脂糖浆抗体免疫共沉淀缓冲液氯化钠蛋白 A G-琼脂糖浆2 × 样品缓冲液(用于 SDS-PAGE 胶)仪器、耗材20 ml 注射器和 18-G 针头汉密尔顿注射器实验步骤1. 按照蛋白 A/G-琼脂糖浆所述的方式准备两份样本(见「用蛋白
硫氧还原蛋白融合蛋白的表达和纯化实验
实验材料 融合蛋白试剂、试剂盒 氨苄青霉素甘油色氨酸仪器、耗材 电泳仪培养箱摇床试管实验步骤 1. 将编码目的序列的DNA片段克隆于pTRXFUS或hpTRXFUS质粒上的trxA基因3‘末端,构建符合读框的融合基因,或者于pALtrxA-781的单一Rsr 2位点上插入短肽编码序列。2. 用含
肌红蛋白尿属于哪种蛋白尿?
溢出性蛋白尿指血液循环中,出现了大量以中、小相对分子质量为主的异常蛋白质,如游离血红蛋白、肌红蛋白、溶菌酶等增多,经肾小球滤出后,原尿中的含量超过了肾小管重吸收最大能力,而大量出现在尿液中形成的蛋白尿。
纤维蛋白溶解系统的纤维蛋白溶解机制
(1)纤溶酶原激活途径:PLG可通过三条途径被激活为PL,分别为内激活途径、外激活途径和外源激活途径。(2)纤维蛋白(原)降解机制:PL不仅降解纤维蛋白,而且可以降解纤维蛋白原。PL降解纤维蛋白原产生X片段、Y片段及D、E片段。降解纤维蛋白则产生x'、Y'、D-D、E'片段。
硫氧还原蛋白融合蛋白的表达和纯化实验
基本方案 实验材料 融合蛋白 试剂、试剂盒
什么是蛋白酶?及蛋白酶的用途
蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称。按其降解多肽的方式分成内肽酶和端肽酶两类。前者可把大分子量的多肽链从中间切断,形成分子量较小的朊和胨;后者又可分为羧肽酶和氨肽酶,它们分别从多肽的游离羧基末端或游离氨基末端逐一将肽链水解生成氨基酸。
特定蛋白分析仪/特种蛋白分析仪
CRP检测的作用: 1.快速鉴别细菌或病毒感染 2.评估疾病的活动性 3.观察确认抗生素疗效,以及药物的剂量 4.预后价值 仪器特点: 1.采用激光速率散射比浊法,检测速度快,准确性高,重复性好 2.使用方便,不需定标 3.3分钟内可出全定量结果。
磷酸化蛋白组学需要多少蛋白
蛋白质磷酸化发挥作用的途径:(信号传导)2. 真核细胞蛋白质磷酸化位点一般位于(丝氨酸)、(苏氨酸)、(赖氨酸)3. 蛋白激酶在细胞信号转导途径主要作用:(调节细胞活性)、(放大传导信号)4. 目前常用的磷酸肽富集方式(TiO2)、(IMAC)5. 磷酸化蛋白组定性分析包括(单一磷酸化位点鉴定)、(
尿蛋白定性试验为蛋白尿的过筛试验
(1)试带法:利用pH指示剂的蛋白误差原理。本法对清蛋白较敏感,对球蛋白的敏感性仅为清蛋白的1/100~1/50,且可漏检本周蛋白。尿液pH值增高也可产生假阳性。本法快速、简便、易于标准化,适于健康普查或临床筛检。 (2)加热乙酸法:为传统的经典方法。加热煮沸使蛋白变性、凝固,然后加酸使尿液p
蛋白质免疫印迹悬浮细胞蛋白提取简介
1)所需器材:制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管(最好高温高压处理)、两个大冰盒、长满细胞的培养瓶、10ml离心管、手套、移液枪、吸头(最好高温高压处理)、滤纸、保存于4℃冰箱的PBS(最好高温高压处理)、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟(PMSF,一种蛋白酶抑制剂,剧毒)、离心机、烧杯、4×SD
蛋白质谱测定蛋白质的基础原理
蛋白质是一条或者多条肽链以特殊方式组合而成的生物大分子,大多数蛋白质会自然折叠为一个特定的三维结构。蛋白质的结构层次可以分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构:一级结构:组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。二级结构:依靠不同氨基酸之间的C=O和N-H基团间的氢键形成的稳定结构,主要为α螺旋和β折叠
抗hpv生物蛋白隐形膜和蛋白敷料的区别
抗HPV生物蛋白隐形膜 抗HPV生物蛋白敷料是由美国纽约血液中心基础研究、分子设计,复旦大学医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室研发出的一款抗HPV病毒制剂,最终经国内知名的三甲教学医院山西医科大学临床研究检测。世界卫生部已确定HPV病毒是引起宫颈癌的唯一因素。产品获得国家级发明ZL,目前是国内唯
IVD原料1∣C反应蛋白与超敏C反应蛋白
C 反应蛋白的发现、结构C反应蛋白(C reactive protein,CRP)是一种急性时相反应蛋白,它参与体内多种生理及病理过程,同时发挥抗炎及促炎双重作用。CRP对于感染及多种结缔组织病的鉴别、判断疾病严重程度或活动性等有重要意义。因测定敏感度的提高,超敏C反应蛋白(hypersensi
蛋白质分离和分析——凝胶蛋白质染色
实验步骤 基 本 方 案 1 考马斯亮蓝染色检测范围为〇.3〜lMg 每蛋白质条带。材 料(带 V 项 目 见 附 录 1)聚丙烯酰胺凝胶(单 元 12. 3)考马斯亮蓝、银染用固定液考马斯亮蓝染液甲醇/乙酸脱色液7 % (V /V ) 水乙酸Whatman 3M M 滤 纸(可选)干 胶 仪(可选
特定蛋白分析仪/特种蛋白分析仪
CRP检测的作用: 1.快速鉴别细菌或病毒感染 2.评估疾病的活动性 3.观察确认抗生素疗效,以及药物的剂量 4.预后价值 仪器特点: 1.采用激光速率散射比浊法,检测速度快,准确性高,重复性好 2.使用方便,不需定标 3.3分钟内可出全定量结果。
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验
肌球蛋白的纯化DEAE纯化肌肉肌球蛋白实验材料冷冻肌肉 试剂、试剂盒肌球蛋白抽提溶液
pIII蛋白展示和pVIII蛋白展示的不同之处
丝状噬菌体展示系统一般是在包膜蛋白pIII或pVIII的N端融合外源多肽。每个病毒子含5个拷贝的pIII蛋白,这五个蛋白都可以融合短肽而不影响噬菌体的感染力。而对主要包膜蛋白pVIII来说,每个病毒子含~2700个拷贝之多,其中约10%能有效地融合外源多肽或蛋白。这样,以pIII融合子方式表达的多肽
蛋白质谱测定蛋白质的基础原理
蛋白质是一条或者多条肽链以特殊方式组合而成的生物大分子,大多数蛋白质会自然折叠为一个特定的三维结构。蛋白质的结构层次可以分为一级结构、二级结构、三级结构和四级结构: 一级结构:组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。 二级结构:依靠不同氨基酸之间的C=O和N-H基团间的氢键形成的稳定结构,主要为α
简述周期蛋白依赖性蛋白激酶的结构
在结构上,Cdks有三个重要的功能域。第一个功能域是ATP的结合部位和该酶的活性部分;第二功能域是调节亚基(Cyclin)的结合部位;第三功能域是P13suc1的结合部位(P13suc1能抑制激酶活性,阻止细胞进入或退出M期)。各种Cdk在细胞周期内特定的时间被激活,通过磷酸化底物,驱使细胞完成
关于酪蛋白多肽的组成成分—酪蛋白的介绍
酪蛋白是哺乳动物乳汁包括牛奶,羊奶和人奶中的主要蛋白质。牛奶的蛋白质,主要以酪蛋白(Casein)为主,人奶以白蛋白为主。酪蛋白是一种大型、坚硬、致密、极困难消化分解的凝乳(curds)。 牛乳蛋白对人体有过敏不良后果。已有生产工艺,通过将牛乳蛋白彻底酶解为多肽和氨基酸以解决这一问题。但是近来
比较组蛋白与非组蛋白的特点及其作用
组蛋白:特点:进化上的极端保守性;无组织特异性;肽链上氨基酸分布的不对称性;组蛋白的修饰作用。作用:1,核小体组蛋白,帮助DNA卷曲形成核小体的稳定结构2,H1组蛋白,在构成核小体时期连接作用,赋予染色体极性3,对染色体DNA的包装起着重要作用非组蛋白:特点:非组蛋白是一类酸性蛋白质,富含天冬氨酸和
重组人血白蛋白将替代血源人血白蛋白
记者日前从华北制药了解到:目前,重组人血白蛋白已经在该公司吨级生产线上完成最后的分装。其中蛋白含量高于99%,无任何外源性病毒风险,这不仅可以替代血源人血白蛋白,更是对血源人血白蛋白质量、安全的超越。重组人血白蛋白成功产业化,将极大缓解我国人血白蛋白市场极度短缺的局面。 据介绍,重组人血白
不同食物中蛋白的蛋白质含量有多少
富含高蛋白的食物有大豆,蛋白质含量大约在35%左右,而且都是吸收、利用率很高的优质蛋白质。瘦肉也是富含蛋白质的食物,蛋白质含量大约为15%~25%左右,不同的肉类蛋白质含量有所不同,但含量都很丰富。而说到蛋白质含量最高的还是蛋白粉,因为一般的蛋白粉蛋白质含量都在70%~80%左右,好一点的蛋白粉蛋白
蛋白酶水解蛋白质的作用原理
蛋白酶按水解底物的部位可分为内肽酶以及外肽酶,前者水解蛋白质中间部分的肽键,后者则自蛋白质的氨基或羧基末端逐步降解氨基酸残基。蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称。按其水解多肽的方式,可以将其分为内肽酶和外肽酶两类。内肽酶将蛋白质分子内部切断,形成分子量较小的䏡和胨。外肽酶从蛋白质分子的游离氨基(氨
明胶、胶原蛋白和水解胶原蛋白的不同之处
明胶、胶原蛋白和水解胶原蛋白并不相同。明胶是胶原在高温作用下的变性产物,其组成复杂,相对分子质量分布宽,由于高温造成胶原蛋白变性,胶原分子的3股螺旋结构被破坏,但可能有部分α链的螺旋链还存在,因此一定浓度的明胶溶液能成凝胶状。在食品工业、摄影和制药业中被广泛应用。据报道,全世界每年生产的明胶产品
比较组蛋白与非组蛋白的特点及其作用
组蛋白:特点:进化上的极端保守性;无组织特异性;肽链上氨基酸分布的不对称性;组蛋白的修饰作用。作用:1,核小体组蛋白,帮助DNA卷曲形成核小体的稳定结构2,H1组蛋白,在构成核小体时期连接作用,赋予染色体极性3,对染色体DNA的包装起着重要作用非组蛋白:特点:非组蛋白是一类酸性蛋白质,富含天冬氨酸和