RNA复制的转录与逆转录的过程介绍
转录是以DNA为模板合成RNA的过程,经过转录DNA分子中的贮存信息传递到RNA分子中,再由mRNA做为模板合成蛋白质分子。逆转录也是从RNA的一个特定位置开始的,以RNA分子中的一条链为模板,在逆转录酶的作用下,以四种脱氧核苷酸为原料,合成方向仍是5'→3',完成cDNA的合成。 大肠杆菌的RNA聚合酶由五个亚基构成,α2ββ'构成核心酶,再加上σ因子是全酶。RNA聚合酶识别并特异结合的DNA一段区域叫做启动子,启动子的序列中一10区和一35区很保守,决定了启动子的强度是转录正确起点的关键,真核生物中位于--20的TATA盒和--70--110区域的元件是控制真核生物RNA的转录的关键。真核生物的RNA聚合酶有Ⅰ、Ⅱ、ⅢTMtn几种,它们分别催化rRNA、mRNAt、tRNA Usn RNA、tRNA、以及线粒体RNA的合成。转录作用停止于DNA模板的终止信号,蛋白质ρ因子可识别此信号,终止区常常......阅读全文
逆转录病毒的结构特征介绍
（1）所有的反转录病毒都有一个结构特征,即粗大的球形颗粒,大小为 80~100 nm。并有完好的突起的外膜。 （2）反转录病毒颗粒的化学成分几乎是一样的,RNA 占 2%,蛋白质占 60%~70%,其中 5%~ 7% 是复杂的糖蛋白,脂类为 30%~40%,碳水化合物为 1%~2%。 （3）
关于逆转录病毒的传播介绍
反转录病毒在自然界的传播分为水平传播和垂直传播。水平传播是通过个体接触而传播,例如猫白血病病毒的传播。垂直传播即由上一代向下一代的传递,病原体长期在机体内潜伏,不表现出任何特征,也不引起疾病的任何症状。只有在特殊条件的影响下,病毒才活跃起来,对宿主而言,就有可能诱发肿瘤的发生发展,以至死亡。这种
逆转录－PCR的概念
逆转录 PCR（Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR）是一种以 RNA 为样本，RNA链被逆转录成为互补 DNA（cDNA），再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。
逆转录PCR的定义
逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
逆转录PCR的实验
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125
关于RNA的自我复制的介绍
进一步的研究还发现一些RNA病毒如R17、f2、MS2等,可以以RNA为模板直接复制新的RNA。这些病毒都属于最简单的类型。例如,MS2的RNA只含有大约350个核苷酸,仅编码三种蛋白质：外壳蛋白,附着蛋白（attachment protein,其功能主要是使病毒能附着于寄主细胞并进入其内部）、
RNA的自我复制的方法介绍
进一步的研究还发现一些RNA病毒如R17、f2、MS2等，可以以RNA为模板直接复制新的RNA。这些病毒都属于最简单的类型。例如，MS2的RNA只含有大约350个核苷酸，仅编码三种蛋白质：外壳蛋白，附着蛋白（attachment protein，其功能主要是使病毒能附着于寄主细胞并进入其内部）、RN
真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录的区别
真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录过程在总体上基本相同，但是，其过程要复杂得多，主要有以下几点不同： 1、真核生物RNA的转录有的是在细胞核内进行的，而蛋白质的合成则是在细胞质内进行的。且真核生物线粒体和叶绿体的遗传信息系统被称为真核细胞的第二遗传信息系统，或核外基因及其表达体系。这是
关于DNA复制过程的冈崎片段与半不连续复制的介绍
因为DNA的两条链是反向平行的，所以在复制叉附近解开的DNA链，一条为5’—〉3’方向，另一条为3’—〉5’方向，两个模板极性是不同。所有已知DNA聚合酶合成方向均为5’—〉3’方向，不为3’—〉5’方向，所以无法解释DNA的两条链同时进行复制的问题。解释DNA两条链各自模板合成子链等速复制现象
转录的过程介绍
在转录过程中，DNA模板被转录方向是从3′端向5′端；RNA链的合成方向是从5′端向3′端。RNA的合成一般分两步，第一步合成原始转录产物（过程包括转录的启动、延伸和终止）；第二步转录产物的后加工，使无生物活性的原始转录产物转变成有生物功能的成熟RNA。但原核生物mRNA的原始转录产物一般不需后加工
双链RNA病毒的复制介绍
双链RNA病毒有两个特点，一是它的基因组为10-12条双链RNA分子；二是它有双层衣壳，而没有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中，在该聚合酶的作用下病毒基因组转录正链RNA，它们自髓核逸出。它们既能作为mRNA，又能作为病毒基因组的模板。MRNA翻译结构蛋白，装配内层衣壳后，正链RN
逆转录PCR概念及方法介绍
逆转录 PCRRT-PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一种 RNA 逆转录和 PCR 结合起来建立的 RNA 的聚合酶链反应。RT-PCR 使 RNA 检测的敏感性提高了几个数量级[较 Northern 印迹杂交敏感(3～6)×103倍],也使一些极微量 R
RNA的自我复制
进一步的研究还发现一些RNA病毒如R17、f2、MS2等，可以以RNA为模板直接复制新的RNA。这些病毒都属于最简单的类型。例如，MS2的RNA只含有大约350个核苷酸，仅编码三种蛋白质：外壳蛋白，附着蛋白（attachment protein，其功能主要是使病毒能附着于寄主细胞并进入其内部）、RN
关于AMV逆转录酶的基本介绍
amv逆转录酶分离自禽类成髓细胞瘤病毒，其方法由houts等人的方法改进而来。分离得到的酶是分子量为157kd的αβ全酶。amv逆转录酶经高度纯化，完全无核酸酶污染。amv逆转录酶可用于cdna合成，也可用于rna和dna的双脱氧测序。amv逆转录酶以总rnd或polya+rnd为模板，具有以r
关于逆转录酶的合成步骤介绍
1、使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s 2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL 3、65℃保温5min，然后冰浴5min； 4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份 RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL 10×M-MLV
关于逆转录酶的医学发展介绍
细胞的衰老和老化被认为和染色体末端由重复的DNA（TTAGGG）序列所组成的端粒序列的丢失相关。随着细胞的每次分裂，端粒会丢失50～200bp，当端粒缩短到一定程度就不再保护染色体免受重组或降解，细胞分裂的控制点就此得到信号而产生作用，可使细胞分裂停止并进入老化过程致细胞死亡。端粒长度的维持即重
病毒－RNA复制的几种方式的介绍
（ 1）含正链RNA(+)的病毒(例如,噬菌体Q)：(+)RNA充当mRNA,合成蛋白质。以(+)RNA为模板进行复制合成(-)RNA,再以(-)RNA为模板合成(+)RNA组装成病毒颗粒。 （ 2）含负链RNA(-)的病毒(例如狂犬病毒)：由(-)RNA合成(+)RNA,再由(+)RNA合成
关于逆转录PCR的简介
逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
逆转录PCR的实验步骤
一、实验器具与材料： 1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖
逆转录PCR的技术简介
由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补DNA。RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术
逆转录病毒的特点
1）病毒为球形，直径100~120纳米，衣壳20面体立体对称，有包膜；2）基因组为二倍体（唯一基因组非单倍体的病毒），两个相同+ssRNA；3）含有逆转录酶和整合酶；4）复制通过DNA中间体，并与宿主细胞的染色体整合（唯一会主动整合的病毒）；5）具有gag、pol、env编码基因，以及长末端重复序列
逆转录PCR的实验步骤
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125m
逆转录病毒的分类
逆转录病毒亚科该亚科中常见的病毒肿瘤病毒亚科 （禽类）rous肉瘤病毒（RSV），rous 相关病毒（RAV），其他鸡肉瘤病毒,禽白血病病毒（ALV）（哺乳类）鼠肉瘤病毒（MSV），鼠白血病毒（MLV），鼠内源性病毒，猪肉瘤病毒，牛白血病病毒，猪白血病病毒，鼠乳腺瘤病毒（灵长类）灵长类肉瘤病毒，猴
分子杂交CDNA探针的技术特点及应用介绍
cDNA（complementary DNA）是指互补于mRNA的DNA分子。cDNA是由RNA经一种称为逆转录酶（reversetranscriptase）的DNA聚合酶催化产生的，这种逆录酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒时发现的。该酶以RNA为模板，根据碱基配对原则，按照RNA的核
关于逆转录病毒感染的内容介绍
反转录病毒的感染能否实现，取决于细胞的特性，细胞的分裂时相以及与病毒有关的受体是否存在。而病毒的感受性则由细胞基因所决定。只有在许多条件都具备时，肿瘤因子才能感染细胞。首先，病毒吸附在细胞表面。在这一过程中，细胞受体及膜蛋白起主导作用，细胞没有相应的受体就不会被病毒感染。在敏感的细胞里，吸附的病
关于逆转录PCR的三种循环介绍
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； ③
关于逆转录酶的使用说明介绍
M-MLV反转录酶比AMV反转录酶缺乏连续性，因此要获得像AMV反转录酶反应中产生同样量的cDNA就要求使用较多单位的M-MLV反转录酶。用1微克的mRNA起始合成第一条链的cDNA，要用8单位的M-MLV反转录酶才相当于1单位的AMV反转录酶的作用。该酶很容易被亚精胺(Spermidine)所
关于逆转录酶的注意事项介绍
在进行RT反应之前，应考虑以下几个方面： 1、RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA，高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中，要特别防止RNase的污染，同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。R
关于逆转录病毒载体的优点介绍
（1）逆转录病毒结构基因gag、env和pol的缺失不影响其他部分的活性； （2）包装好的假病毒颗粒易于分离制备； （3）逆转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细胞； （4）前病毒通过LTR高效整合至靶细胞基因组中，有利于外源基因在靶细胞中的永久表达。
关于逆转录酶的质量控制介绍
1.切口酶：在与200单位酶37oC保温60分钟后，超螺旋质粒保留在90%以上。 2.DNase测定：200单位酶与50ng3H-DNA37oC保温60分钟，分解出的放射性低于1%。 3.RNase测定：200单位酶与50ng3H-RNA37oC保温60分钟，分解出的放射性低于3%。 4.