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RTPCR技术的定义

RT-PCR,反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription )和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。......阅读全文

RT-PCR技术的定义

RT-PCR,反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)是将RNA的反转录(reverse transcription )和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。

RT-PCR技术的定义和检测方法

   1.定义:是以RNA为模板,联合逆转录反应(reverse transcription,RT)与PCR,可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA 模板。 RNA扩增包括两个步骤:在单引物的介导下和逆转录酶的催化下,合成RNA的互补cDNA;加热后cDNA与RNA链解离,然后与另一引

什么是RT-PCR,RT-PCR的定义与检测方法?

1.定义:是以RNA为模板,联合逆转录反应(reverse transcription,RT)与PCR,可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤: 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下,合成RNA的互补cDNA;加热后cDNA与RNA链解离,然后与另一引物退火

RT-PCR的定义与检测方法

1.定义:是以RNA为模板,联合逆转录反应(reverse transcription,RT)与PCR,可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤: 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下,合成RNA的互补cDNA;加热后cDNA与RNA链解离,然后与另一引物退火

RT-PCR技术的简介

RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用,从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。RT—PCR

RT-PCR技术的简介

  RT -PCR首先经反转录酶的作用以RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RN

RT-PCR技术简介和RT-PCR引物的选择

RT-PCR简介RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD

RT-PCR技术-2

三:操作1:反转录反应按下表准备反应液样品 体积 终浓度5×反应缓冲液 10μl 1×dNTP混合液 1μl 0.2mM下游引物 50pmol* 1μm上游引物 50pmol* 1μm25mM MgSO4 2μL 1mMAMV反转录酶 1μl 0.1μ/μlTflDNA聚合酶 1μl 0.1μ/μl

RT-PCR技术-1

目前已有多种方法用来研究有关细胞和组织中,基因表达产物方面的内容,这些方法主要有Northern印迹、RNase保护分析法、原位杂交、点印迹、S1核酸酶分析法及反转录与PCR扩增串联的RT-PCR技术等。在这些方法中RT-PCR技术具敏感度高和应用范围广的特点,该技术提供给研究人员有效的进行测定转录

RT-PCR技术的影响因素

(一)组织或细胞样本不是每种组织或细胞都表达所有的基因,即某些基因的mRNA不存在于某些组织或细胞中。因此,确定所选用的材料中是否含有需扩增的目标mRNA模板是实验成败的关键。(二)引物合成cDNA第一条链时,引物可用随机6聚核苷酸,或下游引物,或poly(dT),其中以6聚核苷酸的随机引物效果最好