RTPCR的操作难点及注意事项
1.优质RNA的获取 2.特异性引物设计 3.TaqMan探针的设计和荧光标记物选择 4.标准曲线分析 一般，DNA样品的定量标准品为基因组DNA&质粒，RNA样品的定量标准品为Total RNA&cDNA&体外转录RNA。绘制标准曲线的标准品梯度的选择一般为5——6个梯度，标准品的稀释倍数通常为10。 5.熔解曲线分析 SYBR Green I 法进行检测时，可根据熔解曲线确认PCR产物的特异性。曲线横坐标是温度，纵坐标是荧光强度的变化值（不是强度本身）。其原理是依据温度从60度升至90度时，荧光强度的变化值。当温度达到PCR产物的Tm（双链DNA分子解链一半时的温度）时，荧光强度变化最大（峰值）。 6.绝对定量......阅读全文
RTPCR的操作难点及注意事项
1.优质RNA的获取 2.特异性引物设计 3.TaqMan探针的设计和荧光标记物选择 4.标准曲线分析 一般，DNA样品的定量标准品为基因组DNA&质粒，RNA样品的定量标准品为Total RNA&cDNA&体外转录RNA。绘制标准曲线的标准品梯度的选择一般为5——6个梯度
RTPCR实验操作的注意事项
在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是
逆转录RTPCR实验操作程序及注意事项
实验操作过程中必须带口罩、手套，实验室尽量避免人员干扰。RT-PCR的试剂都应在冰上融化，等完全融化后再取；用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存；试剂应按顺序加，加完后再混匀离心。加入试剂前在管壁上做好标记，避免加错试剂；加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变，避免重复和漏加；不同试剂和样品要更换吸
面筋仪的操作难点说明
面粉中的面筋数量和质量是评价面粉品质的重要指标，而且面筋质量通常与面制品营养品质密切相关。因此面粉厂要加工出好的面粉，就必须先从用户的需求入手，保证面粉制品的品质，而控制手段就是面筋仪这类专业仪器。面筋仪在面粉厂中的使用，最重要的一个作用就是进行面筋力测定，它可以替代过去的感觉判断，实现更加精准的定
RTPCR需要多大的细胞量及操作步骤
理论上50个cell就可以，但是实际操作中我只看到过牛人从100个cell里面提出来过（用LCM逮的），自己提弄过1000cell的。没有用kit。不同点是用BCP代替氯仿，并且加糖原助沉淀，具体的好处不是很清楚，但是BCP用量小，而且在cell少的情况下，使用糖原可以尽量的降低误操作。由于细胞的大
RTPCR－实验原理及注意事项
一、实验方法原理逆转录-聚合酶链反应 （Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR） 的原理是：提取组织或细胞中的总 RNA，以其中的 mRNA 作为模板，采用 Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 cDN
RtPCR实验准备及与操作步骤2
六、需购置的Rt-PCR材料：（生工. Tel. 2236106.）Taq酶（含MgCl2 Buffer） 200u 70.00dNTP: 1支oligo(dT)15: 1 OD 40.00 promegaM-MLV: 1支 250.00 promega (Buffer)RNasin: 1支 110
RtPCR实验准备及与操作步骤1
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP 管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）1个125m
RtPCR实验准备及与操作步骤3
注：1、RNA若用于核酸转移应溶解于样本缓冲液中，否则DEPC溶解2、细胞组织加TRIzol匀浆后，可在-60℃放置至少一个月（甚至可一年以上）3、RNA在75%乙醇中，2-8℃至少可保存一周，-20℃至少可保存一年 两步法RT-PCR （第一步：逆转录反应） 试剂 浓度 体积 终浓度
RTPCR技术的操作步骤
1、从RNA（或mRNA）反转录合成cDNA第一链：2、于95℃加热5～10min，灭活反转录酶，使RNA—cDNA杂交体变性，然后迅速冰浴冷却：3、PCR扩增：方法基本同PCR。cDNA第一链合成方法：20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液，2ul；四种dNTP（10 mmol/L）2ul；RN
RTPCR的注意事项
一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用lv 仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被lv 仿腐蚀，故不能使用）。3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2
RTPCR技术的注意事项
1、合成cDNA的引物：合成cDNA引物时，通常采用随机六核苷酸引物能够有效地指导从RNA有效地合成第一链cDNA：2、避免RNA酶的污染：在合成cDNA第一链时，应使用RNA酶抑制剂，进行RT-PCR时，用于合成cDNA第一链的RNA不会对PCR有影响，因此没有必要用碱或RNA酶处理；3、不同来源
植物组织RNA提取的难点及对策
植物组织RNA提取的难点及对策 从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究
RTPCR原理与实验操作步骤1
一、知识背景：1、基因表达：DNA RNA Protein单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA（每个mRNA存活4d，可以合成105个丝心蛋白） 共合成109个丝心蛋白 。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。2、PCR技术(ol
RTPCR原理与实验操作步骤3
八、PCR产物电泳先将1-10μl左右PCR产物，加已点在纸上的溴酸兰，反复吸打混匀后进行电泳，一般电流为10mA，电源100V，电泳30分钟，紫外灯下观察，满意的结果扫描打印。九、几个注意点：1、逆转录的关键步骤是立即冰水浴？2、Rt时，先打开PCR预热30分钟。3、RNA抽提前，打开离心机预冷。
RTPCR原理与实验操作步骤2
二、实验器具的处理与准备1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，蒙锡纸烤干备用（DEPC水泡）
原位PCR和原位RTPCR操作规程
（一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤 1）预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10m
原位PCR和原位RTPCR操作规程
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。一、仪器设备英国Thermo Hybaid原位PCR仪。二、操作流程1、原位PCR步骤（1）预处理
RTPCR技术的进行过程及方法
RT-PCR可以用一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在反转录RT-PCR可以用一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在反转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。在一步法
采血操作及送检的注意事项
采血操作步骤让病人坐直或平躺，保持合适的体位，利于护士操作为宜且充分暴露采血部位。让病人衣着应宽松，袖口不宜过紧，以免采血后血管仍然充血引起出血或皮下血肿。记得要叮嘱患者“按压针眼处5-10分钟”，避免血肿引起医患纠纷。避免在患皮肤病、皮肤损伤的部位或有瘢痕的部位抽血，以免引起感染。注意事项严格无菌
定量RTPCR－（Quantitative－RTPCR）
Application: Quantitative RT-PCR is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expres
气浮操作及注意事项
操作及注意事项 1、开机前，应先启动配药装置与溶气装置，待进入正常运行状态时，直接启动原水泵（为减少处理负荷，可用原水作溶气用水），同时进入槽体即可。但必须保持溶气恒定压力0.3—05 Mpa，以保证单位体积溶气水所能浮起的悬浮粒子的zui大绝对量。 2、定时排污：沉淀物要每2—3小时排放一次，不得
IHC原理、操作及注意事项
免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的一项技术。IHC的实验流程和方法总体不难，但做出漂亮的染色结果却不容易，
质谱仪操作说明及注意事项
质谱操作说明及注意事项质谱操作说明及日常使用注意事项：1.开机1)打开主电源，打开旁路泵电源，打开毛细管加热装置(CPS)。2)观察压力显示面板，用▲▼箭头调节黑条显示位置，使其调到Turbo Back 选项，按两次进入键(〇)，开启涡轮分子泵和背景泵;按返回键(〓)回到主面板。观察Turbo进度，
PCR－操作流程及注意事项
1. 试剂准备阶段 试剂准备是 PCR 操作的第一个流程，需要在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行，用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。所有的 PCR 体系都应该在 -20℃ 保存，除了 ddH2O 之外，其余的试剂组份需完全融化之后再加入，以免影响浓度。配制反应体系应在快
拉力试验机夹具好坏的判断标准及难点
对拉力试验机夹具好坏的判定很难界定，由于夹具结构的特殊性,对一种夹具,有时我们很难确定它到底更适合那种试样，通常从以下三点来判断1、夹具是否使用方便、安全。2、夹持是否可靠，不能有打滑现象。3、做试验过程中，试样断点好。数据离散性小。（即试样不断钳口、钳口内、平行段或标距外）而有几种类型的材料，有与
核酸污染处理的难点
1.移液器移液器内部被污染很难去除，可以通过清洗或者另换一套移液器。2.生物安全柜移除内部所有物品，用DNA去除剂擦拭表面后，打开柜门连续运行。3.核酸提取仪内部用DNA去除剂擦拭内表面后，打开提取仪门或外罩，静置。如果能及时发现污染，通常情况不会太严重，采取上述措施实验室空置几天污染会消除。但是如
旋转蒸发仪的操作及注意事项
旋转蒸发仪又叫旋转蒸发器它主要是由：马达、蒸馏瓶、加热锅、冷凝管等部分组成的实验室常用设备。下面来看下它的操作 一、操作规程 1.用胶管与冷凝水连接，用真空胶管与真空泵相联。 2.先将水注入加热槽。可用纯水，自来水要放置1-2天再用。 3.调正主机角度：只要松开主机和立柱连结螺钉。
离心机的操作及注意事项
离心机的操作及注意事项如下：1、离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配并要求有良好的接地线。2、开机前应检查机腔有无异物掉入。3、样品应预先平衡使用离心机微量离心时，离心套管与样品应同时平衡。4、挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免侵蚀机腔或造成事故。5、每
离心机的操作及注意事项
离心机的操作及注意事项如下：离心机的操作步骤：1、离心前用天平保证离心管的平衡。2、打开电源歼关，离心机自检后，开启盖门。3、选择所需转头，用扳手安装转头，松紧适当。4、装载离心管后，拧好转头盖，按下离心机门盖。5、设定好转速、时间和温度后，按下启动按钮开始离心。6、离心结束后，开启门盖，拧开转头盖