关于细胞克隆的准备工作介绍
准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试。......阅读全文
关于克隆实验的基本内容介绍
克隆实验中克隆是英文"clone"或"cloning"的音译,而英文"clone"则起源于希腊文"Klone",原意是指幼苗或嫩枝,以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物,如扦插和嫁接。在大陆译为“无性繁殖”在台湾与港澳一般意译为复制或转殖或群殖。中文也有更加确切的词表达克隆,“无性繁殖”、“无性系
关于单克隆抗体技术的介绍
一种免疫学技术,将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞进行细胞融合, 获得既能产生抗体, 又能无限增殖的杂种细胞,并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。 单克隆抗体技术(monoclonal antibody t
关于T载体克隆的显色反应介绍
LacZ基因是大肠杆菌乳糖操纵子中的一个基因,可以编码β—半乳糖核苷酶。β—半乳糖核苷酶是由4个亚基组成的四聚体,可催化乳糖的水解.用X-Gal为底物进行染色时,呈蓝色。 一些特定的质粒(比如pUC/pBS等),常带有β—半乳糖核苷酶的调控序列和β—半乳糖核苷酶N端146个氨基酸(α肽段)的编
关于单克隆抗体的基本介绍
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。 用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群,
关于多克隆抗体的免疫方法介绍
可以采用以下各种方法之一进行免疫。 (1)淋巴结注射法: ①在兔的两后足跖部皮下(或皮内)注射活卡介苗 50mg(每侧约0.30ml) 。7~10 天后,兔跖及腘肌淋巴结肿大; ②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1
关于单克隆抗体的定义介绍
单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的,杂交瘤细胞是由一个经抗原激活后的B细胞与一个骨髓瘤细胞融合形成。单克隆抗体优点:纯度高,灵敏度高,特异性强,交叉反应少,制备的成本低。缺点:对技术有一定的要求,而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位 [1] 。
关于多克隆抗体免疫动物的介绍
供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类,常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定,也与抗原的性质有关。如要获得大量的抗体,多采用大动物;如要是获得直接标记诊断的抗体,则直接采用本动物;如要获得间接的标记诊断用抗体,则必须用异源动物制备抗体;如果难以获得的抗原
关于多克隆抗体的抗体鉴定介绍
抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼
关于单克隆抗体的内容介绍
解决多克隆抗体特异性不高的理想方法是制备识别单一表位特异性的抗体。如果能获得仅针对单一表位的浆细胞克隆,并使其在体外扩增分泌抗体,就有可能获得单一表位特异性的抗体。然而,浆细胞在体外的寿命较短,难以培养。为克服这一缺点,Kohler和Milstein将可产生特异性抗体但短寿的B细胞与不产生抗体但
关于多克隆抗体的结果判定介绍
1.抗 Ig 的效价测定 琼脂扩散效价达 1﹕16 或 1﹕32 者为合格。 2.纯度鉴定 采用琼扩法。中间孔加抗 Ig 血清,外周孔加 Ig 和标准品 Ig。在抗 Ig 与 I抗原上那部分可以引起机体产生抗体的分子结构,叫做抗原决定簇。一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇,因而使机体产生好
用克隆环分离细胞克隆
实验方法原理 将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料 胰蛋白酶试剂、试剂盒 硅油仪器、耗材 克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤 1. 观察细胞克隆,用毡制粗头笔
用克隆环分离细胞克隆
实验方法原理将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料胰蛋白酶试剂、试剂盒硅油仪器、耗材克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤1. 观察细胞克隆,用毡制粗头笔或 Nik
用克隆环分离细胞克隆
实验方法原理将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料胰蛋白酶 试剂、试剂盒
用克隆环分离细胞克隆
实验方法原理 将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。 实验材料
关于锂电池组装前的准备工作介绍
一、在做好组装式的7.4V锂离子电池组之前,必须先依据必须锂电池组的企业产品外形尺寸及所需的电机负载容量等做好计算,随后依据企业产品所需的容量计算出所必须做好组装式的的锂电池组的容量,随后依据公式计算去选购锂电池。 二、先将锂电池做好规整的摆放,随后安全使用材料将每一串的锂电池做好稳固。在稳固
关于肺及纵隔MRI检查技术的准备工作介绍
1.认真核对磁共振成像(MRI)检查申请单,了解病情,明确检查目的和要求。对检查目的要求不清的申请单,应与临床申请医生核准确认。 2.确认病人没有禁忌证。并嘱病人认真阅读检查注意事项,按要求准备。 3.进入检查室之前,应除去病人身上携带的一切金属物品、磁性物质及电子器件。 4.告诉病人所需
关于淋巴结穿刺活检术的准备工作介绍
1.患者准备 (1)穿刺前查出凝血时间、血小板计数、凝血酶原时原时间。 (2)术前禁食4~6h。咳嗽者口服镇咳剂,精神过于紧张者服镇静药。 (3)盆腔淋巴结穿刺活检前需充盈膀胱,口服造影剂显示肠道。作CT增强扫描以区分淋巴结和血管、肠道。 2.器械和药物准备 穿刺活检包,包括消毒手术洞巾
细胞克隆染色
做克隆形成率的染色非常非常简单,因为克隆产生的细胞集落非常清晰,大的甚至肉眼可辩.对染色方法只有一个基本要求,染细胞不染培养容器就可以了.非常多的染料可以用作此用途.像是一楼所说的结晶紫也可以.
关于多克隆抗体的抗体制备介绍
多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤: 1、制备抗原。 2、选择实验动物。 3、动物免疫。 4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。 5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。 6、纯化出抗体。 7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。 具体操作与制备原理参见中国免疫学实验网。 (
关于单克隆抗体药物的展望介绍
单克隆抗体药物在生物技术制药中占有重要地位,并逐渐成为生物医药领域发展的主要方向。从全球市场来看,抗体药物成了国际制药业争夺的焦点,并购成为国际制药业巨头快速切入抗体产业的捷径。此外,目前市场上75%的抗体药物将于2015年ZL到期,这也给我国生物制药公司提供了介入抗体药物的时机。单抗药物治疗主
关于T载体克隆的基本信息介绍
重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。 DNA连接酶有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能,而且T4噬菌体DNA连接酶
关于单克隆抗体的抗原准备介绍
抗原,是指能够刺激机体产生(特异性)免疫应答,并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合,发生免疫效应(特异性反应)的物质。 抗原的基本特性有两种, 一是诱导免疫应答的能力,也就是免疫原性, 二是与免疫应答的产物发生反应,也就是抗原性。 很多物质都可以成为抗原,抗原的具体分类可以参见
关于人工染色体克隆载体的介绍
人工染色体克隆载体实际上是一种穿梭克隆载体,含有质粒克隆载体所必备的第一受体(大肠杆菌)源质粒复制起始位点,还含有第二受体(如酵母菌)染色体DNA着丝点、端粒和复制起始位点的序列,以及合适的选择标记基因。这样的克隆载体在第一受体细胞内可以按质粒复制形式进行高拷贝复制,在体外与目的DNA片段重组后
关于多克隆位点的应用介绍
多克隆位点,是指载体上含有的一个人工合成的DNA片段,其上含有多个单一酶切位点,是外源DNA的插入部位,具备条件:是载体中的一段碱基序列,由数个酶切位点组成,这些位点在载体上都是单一位点。 多克隆位点(multiple cloning site, MCS),是包含多个(最多20个)限制性酶切位
关于-单克隆抗体药物的分类介绍
单抗药物一般分为:治疗疾病(尤其是肿瘤)的单抗药剂、抗肿瘤单抗偶联物、治疗其他疾病的单抗。单抗药剂针对的靶点通常为细胞表面的疾病相关抗原或特定的受体。如:最早被美国FDA批准用于治疗肿瘤的单抗药物利妥昔单抗;抗肿瘤单抗偶联物,或称免疫偶联物(Immunoconjugate)由单抗与有治疗作用的物
关于单克隆抗体的制备过程介绍
1.免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用二
简述细胞培养的准备工作
准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试,具体内容可参阅有关文献。
细胞培养前的准备工作
细胞培养技术是生物技术中*核心,*基础的技术。所以这也是每个科研技术人员必须会的一项技能!那么在培养细胞实验之前您知道需要做哪些准备工作么?今天为大家整理了一些相关资料,下面分享给大家!实验人员的无菌准备:1.肥皂洗手。 2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋 3.用75%酒精棉球擦净双手。 无
细胞克隆的冻存及复苏的相关介绍
为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管
悬浮细胞克隆的分离
实验方法原理 用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。 仪器、耗材 生长培养基 多孔