双向免疫扩散试验的实验方法

1.将已溶化的1%琼脂盐水管放56~60℃水浴箱中平衡温度备用。2.将载玻片置于水平桌面上,倾注已溶化琼脂3.5~4ml,使成厚度约1.5mm琼脂板。 3.凝固后,将打孔模板置于琼脂板下,然后用打孔器打孔,根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次实验采用三角型,即每一个三角型的三个孔为一组。(因本次实验所制备的琼脂板均以载玻片为底板故根据其大小只能采用三角型同时每一琼脂板也只能制成两组。否则,如采用方阵型或梅花型则因琼脂板边缘琼脂厚度不够而使周边各孔所加抗原或抗体量不足或溢出,如制成三角型三组,因各孔相距过近相互渗透扩散而难于正确判定结果)。4.用微量加样器加抗体各10μl。各组所余两孔各按抗原1、2为一组,3、4为二组,5、6为三组,分别各加入10μl。注意每加一样品均需更换加样器塑料吸头,以防止交叉现象影响实验结果。5.作好记录,放湿盒中,置37℃温箱,24小时后观察结果。......阅读全文

双向免疫扩散试验的实验方法

1.将已溶化的1%琼脂盐水管放56~60℃水浴箱中平衡温度备用。2.将载玻片置于水平桌面上,倾注已溶化琼脂3.5~4ml,使成厚度约1.5mm琼脂板。 3.凝固后,将打孔模板置于琼脂板下,然后用打孔器打孔,根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次实验采用三角型,即每一个三角型的三个孔为一组。(

双向免疫扩散试验的方法介绍

  1.将已溶化的1%琼脂盐水管放56~60℃水浴箱中平衡温度备用。  2.将载玻片置于水平桌面上,倾注已溶化琼脂3.5~4ml,使成厚度约1.5mm琼脂板。 3.凝固后,将打孔模板置于琼脂板下,然后用打孔器打孔,根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次实验采用三角型,即每一个三角型的三个孔为

双向免疫扩散试验的方法原理

双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间浓度比例,而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原抗体存在多种系统时,可呈现多条沉淀线以至交叉反应。

双向免疫扩散试验的方法介绍

1.将已溶化的1%琼脂盐水管放56~60℃水浴箱中平衡温度备用。2.将载玻片置于水平桌面上,倾注已溶化琼脂3.5~4ml,使成厚度约1.5mm琼脂板。 3.凝固后,将打孔模板置于琼脂板下,然后用打孔器打孔,根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次实验采用三角型,即每一个三角型的三个孔为一组。(

双向免疫扩散试验的方法介绍

中文名称双向免疫扩散试验英文名称double immunodiffusion test定  义一种分析鉴定抗原、抗体纯度和抗原特异性的试验。即抗原和抗体分子在凝胶板上扩散,二者相遇并达到最适比例时形成沉淀线。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

双向免疫扩散试验的实验结果分析

(1)融合性沉淀弧,说明两孔中抗原相同,为同一性反应。(2)两沉淀线独自形成并形成交叉,说明两孔中的抗原完全不同,为非同一性反应。(3)融合性沉淀弧出现支线,或同时有另一条或两条沉淀线,说明两孔中抗原有相同部分又有不同部分,此为部分同一性反应。

双向免疫扩散实验

抗原、抗体在凝胶中扩散,并进行沉淀反应,叫做免疫扩散反应(immunodiffusion)。将抗原与其相应抗体放在凝胶(如琼脂)平板中的邻近孔内,使它们互相扩散,当扩散到两者浓度比例合适的部位相遇时,即出现乳白色的沉淀线,称为双向免疫扩散试验。此方法是由 Ouchterlony 所提出,因此又称 O

双向免疫扩散实验

实验方法原理 双向免疫扩散试验不仅可对抗原或抗体进行定性鉴定和测定效价,还可对抗原或抗体进行纯度分析和同时对两种不同来源的抗原或抗体进行比较,分析其所含成分的异同。若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统,就能产生相应数量的分离的沉淀线(图 1)。因此,利用此法可进行抗原或抗体的纯度分析。图 1 双

双向免疫扩散试验的原理

双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间浓度比例,而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原抗体存在多种系统时,可呈现多条沉淀线以至交叉反应。

双向免疫扩散试验的定义

中文名称双向免疫扩散试验英文名称double immunodiffusion test定  义一种分析鉴定抗原、抗体纯度和抗原特异性的试验。即抗原和抗体分子在凝胶板上扩散,二者相遇并达到最适比例时形成沉淀线。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫学检测和诊断(三级学科)

双向免疫扩散试验所需材料

生理盐水1%琼脂管(每管约4ml) 载玻片打孔器及打孔模板 微量加样器及塑料吸头抗体及抗原1、2、3、4、5、6。 湿盒

双向免疫扩散试验的结果分析

(1)融合性沉淀弧,说明两孔中抗原相同,为同一性反应。(2)两沉淀线独自形成并形成交叉,说明两孔中的抗原完全不同,为非同一性反应。(3)融合性沉淀弧出现支线,或同时有另一条或两条沉淀线,说明两孔中抗原有相同部分又有不同部分,此为部分同一性反应。

双向免疫扩散试验的原理简介

  双向免疫扩散试验(double immunodiffusion test)是一种分析鉴定抗原、抗体纯度和抗原特异性的试验,即抗原和抗体分子在凝胶板上扩散,二者相遇并达到最适比例时形成沉淀线。  双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。  沉淀线的特征与位

双向免疫扩散法测定抗血清效价实验—双向免疫扩散法

双向免疫扩散法可用于:(1)诊断疾病;(2)测定抗体的效价。实验方法原理将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板中的相邻小孔中,使两者互相扩散,当扩散到它们的浓度达当量点时(浓度相当)形成沉淀线。如果抗原-抗体的浓度合适时,沉淀线在两孔的中间。如抗体过量,沉淀线靠近抗原孔。如抗原过量,沉淀线靠近抗体孔。此

关于双向免疫扩散试验的结果说明

  (1)融合性沉淀弧,说明两孔中抗原相同,为同一性反应。  (2)两沉淀线独自形成并形成交叉,说明两孔中的抗原完全不同,为非同一性反应。  (3)融合性沉淀弧出现支线,或同时有另一条或两条沉淀线,说明两孔中抗原有相同部分  又有不同部分,此为部分同一性反应。

双向免疫扩散与单向免疫扩散的区别

双向免疫扩散是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散,彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间比例,而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原、抗体存在多个系统时,可呈现多条沉淀线乃至交叉反应。依据沉淀线的形态、条数、清晰度及位置可了解抗原或抗体的若

双向免疫扩散的临床应用

1)血清学诊断2)免疫化学分析:沉淀线位置主要与抗原、抗体两者浓度比例有关,沉淀线靠近抗原空,提示抗体含量高;靠近抗体空,提示抗原含量多。分子量大扩散慢,扩散圈小,形成的沉淀线弯向分子量大的一边。如二者分子量相对,则形成直线。3)抗体效价滴定:固定抗原浓度,稀释抗体;或抗原抗体双方做不同稀释,经自由

双向免疫扩散的临床应用

1)血清学诊断2)免疫化学分析:沉淀线位置主要与抗原、抗体两者浓度比例有关,沉淀线靠近抗原空,提示抗体含量高;靠近抗体空,提示抗原含量多。分子量大扩散慢,扩散圈小,形成的沉淀线弯向分子量大的一边。如二者分子量相对,则形成直线。3)抗体效价滴定:固定抗原浓度,稀释抗体;或抗原抗体双方做不同稀释,经自由

双向免疫扩散基本原理

双向免疫扩散(Double immunodiffusion)基本原理:指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散,彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。

琼脂免疫扩散试验方法

  材料与试剂  1、琼脂粉  2、平皿  3、打孔器  4、生理盐水或其他缓冲液,可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。  操作方法  1、称取一定量的琼脂粉,按1%左右(0.8%~1.5%)的比例加入生理盐水或缓冲液,水浴煮沸融化20min。  2、将融化的琼脂倒入平皿内,使厚度2mm~3mm。自然冷

双向免疫扩散法测定抗血清效价

实验方法原理 将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板中的相邻小孔中,使两者互相扩散,当扩散到它们的浓度达当量点时(浓度相当)形成沉淀线。如果抗原-抗体的浓度合适时,沉淀线在两孔的中间。如抗体过量,沉淀线靠近抗原孔。如抗原过量,沉淀线靠近抗体孔。此技术可以测定抗血清的效价。此外,根据沉淀融合的情况,还可以

单向免疫扩散实验

实验方法原理 在含有特异抗体的琼脂板中打孔,并在孔中加入定量的抗原,当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合,即形成白色沉淀环,其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线,即可用以定量检测未知标本的抗原浓度(mg/ml 或U/ml)。实验材料 马抗人 IgG 血清试剂、试剂

双向电泳实验——ISODALT-方法

实验方法原理双向电泳(two-dimensional electrophoresis)是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照pI分离),然后再进行SDS-PAGE(按照分子大小),经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒尿素去污剂仪器、耗材

双向电泳实验——IPGDALT-方法

试剂、试剂盒尿素去污剂还原剂载体两性电解质仪器、耗材IPG 凝胶实验步骤一、第一向1. 固相 pH 梯度凝胶或凝胶条的准备固相 pH 梯度凝胶的灌注及聚合方法请参阅 固相 pH 梯度等电聚焦 有关章节,如需要可切成 3~5 mm 宽的胶条在 -20℃ 保存一年。为避免繁琐和复杂的灌胶和切胶条程序和保

免疫扩散的实验的注意事项

1、玻片要清洁,边缘无破损。2、浇制琼脂板时要均匀、无气泡。3、孔要打得圆整光滑,边缘不要破裂。4、 加样时应尽量避免气泡或加到孔外,以保证结果的准确性。5、 注意微量进样器每加一个样品之后,就得清洗。

蛋白质的双向电泳实验方法

第一向(等电点聚焦,IEF)1)凝胶条的准备1.以帽凝胶端(2个校准环:4mm和10mm)朝下,将4根玻璃管插入两个凝胶灌注装置的每个托架中,这样玻璃管恰好站在两个分隔室之一的“充填船”上。从玻璃管顶端到玻璃管底端拉入PP线(小心,线不易移动),否则以后将不能用它们将胶溶液拉上来。2.溶解分离胶溶液

双向电泳实验

试剂、试剂盒 尿素去污剂仪器、耗材 聚丙烯酰胺凝胶实验步骤 一、第一向1. 等电聚焦凝胶的准备双向电泳通常用聚丙烯酰胺凝胶作介质,但需含有 8 mol/L 尿素、0.5%~2% 非离子或两性离子去污剂。为了增加样品的可溶性,可加 0.5% CHAPS。在第一向电泳中,最重要的是用载体两性电解

双向电泳实验

ISO-DALT 方法 IPG-DALT 方法             实验方法原理 双向电泳(two-dimensional electrophoresis)是等电聚焦电

双向琼脂扩散实验

一、原理双向琼脂扩散实验,是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散,当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时,就会形成抗原抗体复合物的沉淀。二、操作步骤1.取一块干净的玻璃板,用少量75%乙醇冲洗,晾干后置于水平台,将1%琼脂糖融化,56℃水浴中保温。2.将琼脂糖铺于玻璃板上,

凝胶内沉淀试验:双向扩散试验

双向扩散试验:在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散,在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线,根据沉淀线的位置、形状以及对比关系,可对抗原或抗体作出定性分析。双向扩散试验也分为试管法和平板法。1、试管法:在含有抗原的溶液和含有抗体琼脂中间,加一层普通琼脂,让下层抗体和上层抗原向中间自由扩散,在抗原、抗体浓度最