酶液的浓缩方法和步骤
提取的酶液为减少纯化操作容积,通常先进行浓缩。工业上可用真空减压浓缩、薄膜浓缩、冷冻浓缩和逆向渗透作用进行浓缩。对于少量酶液下述方法浓缩更合适:用葡聚糖凝胶(分子筛)浓缩:取相当于酶液量1/5的干葡聚糖凝胶G15或G25,分次加入酶液中,搅拌30 min,使凝胶吸水膨胀,进行吸滤。经重复数次操作即可在短时间内把酶液浓缩至所需的体积。也可将酶液装于透析袋内,埋入干凝胶中,袋内酶液也可得到浓缩。用聚乙二醇浓缩:将稀酶液装入透析袋内,袋外复以聚乙二醇,袋内水份被袋外的聚乙二醇所吸收,在短时间内可以达到浓缩的目的,得到所需的浓酶液。用超滤法浓缩:超滤技术在其可筛分范围内分离酶分子时不发生“相态”变化,可以避免酶蛋白变性,且分离度快,所以愈来愈被广泛采用。各种不同孔径的超滤膜,适用于实验室规模及一定工业规模的酶液浓缩。如国产二醋酸纤维素制成10~200埃孔径的超滤膜,用于实验室规模固氮酶液的脱盐和浓缩,效果良好。......阅读全文
卡尔费休测定方法的步骤和特点
卡尔费休水分测定仪(微量水分全自动测定仪)是一种全新研制的微量水分测定分析仪器,采用卡尔-菲休库仑滴定法,能可靠地对液体、气体、固体样品进行微量水分的测定。卡尔费休容量法也叫滴定法,每测一次样品需要进行以下5个步骤:1.先向滴定池中注入一部分试剂;2.滴定一部分卡尔费休试剂,使其平衡;3.注入被测样
卡尔费休测定方法的步骤和特点
卡尔费休水分测定仪(微量水分全自动测定仪)是一种全新研制的微量水分测定分析仪器,采用卡尔-菲休库仑滴定法,能可靠地对液体、气体、固体样品进行微量水分的测定。卡尔费休容量法也叫滴定法,每测一次样品需要进行以下5个步骤:1.先向滴定池中注入一部分试剂;2.滴定一部分卡尔费休试剂,使其平衡;3.注入被测样
反转录酶的合成步骤
1、使用前每个组份轻轻混匀,然后2000rpm离心20s2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管,依次加入2~5μgRNAnμL3、65℃保温5min,然后冰浴5min;4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份RNase抑制剂(40u/μL)0.5μL10×M-MLVReactionBuff
血浆凝固酶实验的步骤
(1)首先取一盒海博生物冻干兔血浆,按瓶盖上箭头方向掀开并撕下铝箔盖 (2)用镊子打开西林瓶胶塞。 (3)用移液枪吸取0.8ml新鲜的BHI肉汤培养物,加入西林瓶中。 “新鲜”即为,培养物从培养箱取出后,立即进行试验。以保证培养物酶活力良好。避免出现因取出一段时间后,因酶活力降低而引起的假
免疫酶技术的操作步骤
(1) 用微量移液器分别加待检血清、阳性对照、阴性对照各100μl于1、2、3孔中,370C水浴箱温育30min。(2) 用PBS液洗板3次,每次3min,甩干。(3) 每孔加入酶结合物2滴,370C水浴箱温育30min。(4) 用PBS液洗板3次,每次3min,甩干(5) 每孔分别加入显色A液、B
酶活性分析法检定蛋白质的方法步骤
表现出來的酶GUS可以水解其基质衍生物pNPG,所产生的黄色生成物p-nitrophenol,可供活性测定 (Jefferson et al, 1986);仪器用具:ELISA光度计 (Dynatech);微量滴定盘 (microtiter plate, Nunc F96 Maxisorb 4424
蛋白质的浓缩技术方法
(一)浓缩胶浓缩法 浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比浓缩胶应用方便,直接加入被
真空浓缩仪的操作方法
真空浓缩仪主要用于浓缩液体或干燥样品,利用真空时溶剂可在低温中沸腾蒸发的原理达到快速浓缩的目的。由冷阱、泵、冷凝分离器、电磁阀、外置真空系统等部分组成。 操作前 1.操作时的环境温度应保持在 15-35 ℃之间 2.打开电源,浓缩仪盖子解锁,显示屏显示上次运行的参数 3.安装
蛋白质的浓缩技术方法
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术。(一)透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂
蛋白质的浓缩技术方法
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术。(一)透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用zui广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸
气体样品的动态预浓缩方法
见《色谱》2001年1期P71. 气体样品的动态预浓缩方法 苗 虹, 关亚风, 王涵文, 朱道乾 (中国科学院大连化学物理研究
蛋白质的浓缩技术方法
(一)浓缩胶浓缩法浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比浓缩胶应用方便,直接加入被浓缩
蛋白质的浓缩技术方法
(一)浓缩胶浓缩法 浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物,具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物质,如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等,适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后,蛋白质的回收率可达80%~90%。比浓缩胶应用方便,直接加入被
液液分离,液固分离采用的设备原理和方法?
液液分离,应该是两种互不相溶的(如氯仿和水溶液)就用分液漏斗,静置分层后分离即可。原理是两种溶液不相溶和密度不同,复就会出现分层现象。 液固分离,简单的就是用适当的滤器过滤,分别收集处理。另外就是使用离心机,原理分子或颗粒的重量不同。 常用的分离方法 分离方法开始主要用于制化工行业中
MassPREP自动酶切仪操作步骤和注意事项
MassPREP自动酶切仪操作步骤一 开机前检查:1 检查仪器台面(DECK)上所有的实验材料(Labware)。2 检查SystemWater 水桶的水位。3 检查恒温循环水浴(Chiller)水箱的水位,并定期更换或填充Chiller 中的循环水。4 倒掉废液桶中的废液。二 开机步骤:打开Chi
慢病毒怎么纯化和浓缩
慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬
移液管润洗的详细步骤和注意事项
移液管润洗步骤:1、先用自来水淋洗后,用铬酸洗涤液浸泡,操作方法如下:(1)用右手拿移液管上端合适位置,食指靠近管上口,中指和无名指张开握住移液管外侧,拇指在中指和无名指中间位置握在移液管内侧,小指自然放松;(2)左手拿洗耳球,尖口向下,排出球内空气,将吸耳球尖口插入或紧接在移液管上口,注意不能漏气
酶联免疫法的检测方法双抗体夹心法的步骤
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下: 一、将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。 二、加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 三、加酶标抗体:使固相免疫复
总烃和非甲烷烃测定方法的操作步骤和计算方法
采样用 100ml 注射器抽取现场空气,冲洗注射器3~4次,采气样100ml,密封注射器,样品应在12h之内测定。步骤1、色谱条件柱温:80℃;检测器温度:120℃;气化室温度:120℃。载气:氮气流量 70ml/min:燃气:氢气流量 70~75ml/min;助燃气:空气流量 900~1000ml
Southern-blot实验方法和操作步骤
第一天 (restriction enzyme digestion)1.取待測的genomic DNA,用二次水稀釋10倍(30μl的DNA 加270μlddH2O→ 300μl)2.換算genomic DNA濃度(OD260),再換算取10μg所需的體積。3.取10μg DNA,用限制酵素EcoR
分子标记方法:AFLP原理和操作步骤
AFLP原理:AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘
氟钛酸铵制备方法和步骤
现有的氟钛酸铵制备方法中,采用的原材料通常比较复杂,成本较高,而且制备方法较为复杂。尤华丽[1]提供一种氟钛酸铵的制备方法,旨在使得其制备方法简单,且原料简单易得,成本较低。该制备方法包括以下步骤:将钛酸酯类与有机溶剂进行混合,得到第一溶液;将氟化铵和水进行混合,得到第二溶液;将所述第一溶液和所述第
血细胞分离培养方法和步骤1
以前认为红细胞、粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等血细胞都属终末分化细胞,很难在体外培养生长或仅能短期培养而不能传代,近年来由于细胞培养技术的发展,已有血细胞培养成功的报道,正常血细胞在体外培养生长时间短,只有白血病细胞,血友病细胞、淋巴瘤细胞可培养成功并建立细胞系,但多半为EB病毒等致瘤病毒引起的转化细
细胞融合主要方法和操作步骤
两个或两个以上的细胞合并成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合,也称细胞杂交,在自然情况下的受精过程即属这种现象。诱导细胞融合的主要方法有:病毒诱导融合,化学融合剂诱导融合和电融合。1. 病毒诱导融合:有许多种类的病毒能介导细胞融合,最常用的是灭活的仙台病毒(HVJ),为RNA病毒。病毒诱导细胞
血细胞分离培养方法和步骤2
收集浑浊带分离获得的淋巴细胞,用无钙、镁离子的PBS洗3次后,再用培养基洗1次后计数,分瓶培养。此法分离获得淋巴细胞纯度高。分离液的制备:9% Ficoll(20℃下相对密度约1.020)24份与33.4%泛影葡胺(用泛影钠或Conray400也可,在20℃下相对密度约1.200)10份混合后,
酶免疫测定的概念和方法
酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA),是将酶催化作用的高效性与抗原抗体反应的特异性相结合的一种微量分析技术。酶标记抗原抗体后形成的酶标记物,既保留抗原或抗体的免疫活性,又保留酶的催化活性。当酶标记物与待测样品中相应的抗原或抗体相互作用时,可形成酶标记抗原抗体复合物。利用复合物上
抗体酶的特点和制备方法
抗体酶具有典型的酶反应特性;与配体(底物)结合的专一性,包括立体专一性,抗体酶催化反应的专一性可以达到甚至超过天然酶的专一性;具有高效催化性,一般抗体酶催化反应速度比非催化反应快104~108倍,有的反应速度已接近于天然酶促反应速度;抗体酶还具有与天然酶相近的米氏方程动力学及pH依赖性等。将抗体转变
氨酶高的原因和治疗方法
①肝脏本身的疾患,特别是各型病毒型肝炎、肝硬变、肝脓肿、肝结核、肝癌、脂肪肝等,均可引起不同程度的转氨酶升高。②除肝脏外,体内其它脏器组织如心、肾、肺、脑、睾丸、肌肉也都含有此酶。③因为转氨酶是从胆管排泄的,因此如果有胆管、胆囊及胰腺疾患,胆管阻塞,也可使转氨酶升高。④药源性或中毒性肝损害。⑤正常妊
赶酸浓缩仪的应用和特点
我国环境问题日趋严重,也越来越受到大众的广泛关注。但是环境是一个极其复杂的系统,环境样品千差万别。每种样品包含了几十甚至几百种组分,同时各组分的浓度不但很低,相互之间的影响也很大。所以环境样品通常需要进行预处理后才可以进行各种仪器分析,否则,非但得不到可靠的数据,而且还会污染测试系统,影响仪器的性能
真空离心浓缩仪的应用和原理
真空离心浓缩仪是一种常用的蒸发仪器,应用于DNA/RNA、核苷、蛋白、药物、代谢物、酶或类似样品的浓缩合成物的溶剂去除。用户对于真空离心浓缩仪产品知识需要掌握,下面恒诺仪器就来具体介绍一下真空离心浓缩仪工作原理及特点,希望可以帮助到大家。真空离心浓缩仪工作原理 综合利用离心力、加热和外