逆转录RTPCR常见问题分析
RT-PCR常见问题（一）RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因解决方案RNA被降解在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA。使用良好的无污染技术分离RNA。在将组织从动物体取出后立刻处理。RNA中包含逆转录抑制剂通过乙醇沉淀RNA除去抑制剂。用70%（体积分数）乙醇对RNA沉淀进行清洗。可以加入糖元（0.25μg/μL到0.4μg/μL）以帮助小量样品RNA的恢复。逆转录抑制剂包括：SDS，EDTA，甘油，焦磷酸钠，亚精胺，甲酰胺和胍盐。将对照RNA同样品混合，同对照RNA反应比较产量以检验抑制剂。用于合成cDNA第一链合成的引物没有很好退火确定退火温度适合您的引物。对于随机六聚体，建议在反应温度保温之前先在25℃保温10min。对于基因特异性引物（GSP），可以试一下其他GSP，或换用oligo（dT）或随机六聚体确定GSP是反义序列。起始RNA量不够增加RNA量。RNA模板二级结构......阅读全文
逆转录RTPCR常见问题分析
RT-PCR常见问题（一）RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因解决方案RNA被降解在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA。使用良好的无污染技术分离RNA。在将组织从动物体取出后立刻处理。RNA中包含逆转录抑制剂通过乙醇沉淀RNA除去抑制剂。用70%（体积
逆转录PCR(RTPCR)
实验四 逆转录PCR (RT-PCR )【实验目的】1．了解用逆转录PCR 法获取目的基因的原理。2．学习和掌握逆转录PCR 的技术和方法。【实验原理】聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，是一个指数增长的
RTPCR常见问题分析及其解决方案
常见问题可能原因建议解决方案少量或没有RT-PCR产物RNA被降解分离无污染，高质量的RNA；提取RNA的材料要尽量新鲜，防止RNA降解；RT反应前，在变性胶上分析RNA的完整性；RNA提取后，应储存在100％甲酰胺中， 如果使用RNase抑制剂，加热时小于45℃；pH小于8.0，否则抑制剂会释放所
逆转录PCR(RTPCR)扩增基因特异片段
逆转录PCR(RT-PCR)扩增基因特异片段 一、实验原理RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中R
逆转录RTPCR实验仪器及条件
实验器具的准备：RT-PCR所用的500μl和200μl薄壁EP管、移液器吸嘴最好用进口的，因为进口EP管、移液器吸嘴已经去除了RNasin，也已经灭菌处理过，可以直接用。实验前用干净的镊子夹取出EP管、移液器吸嘴插好备用，注意镊子不要碰到EP管内壁和吸嘴的尖部。如果用国产500μl和200μlEP
RTPCR、QPCR、Realtime－PCR、realtime－RTPCR你真的区分的开吗？
多少同学能将 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR区分开？有多少同学还在犯晕？今儿这贴，师兄就带你区分区分，拨开那扇 PCR 迷雾。什么是 RT-PCR？RT-PCR就是逆转录 PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR(reverse transcr
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
逆转录-聚合酶链反应 （Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）可以：(1）分析基因的转录产物；（2）获取目的基因；（3）合成cDNA探针；（4）构建RNA高效转录系统。实验方法原理逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Tran
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
实验方法原理 提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，从而获得目的基因或检测基因表达。
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
实验方法原理逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）
实验方法原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板
逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）
实验概要提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因
逆转录RTPCR实验操作程序及注意事项
实验操作过程中必须带口罩、手套，实验室尽量避免人员干扰。RT-PCR的试剂都应在冰上融化，等完全融化后再取；用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存；试剂应按顺序加，加完后再混匀离心。加入试剂前在管壁上做好标记，避免加错试剂；加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变，避免重复和漏加；不同试剂和样品要更换吸
RTPCR常见问题及解决方案
RT-PCR常见问题及解决方案
逆转录聚合酶链反应（RTPCR，rtpcr）注意事项
注意事项1．在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在总RNA的提取过程中，注意避免mRNA的断裂； 2． 为了防止非特异性扩增，必须设阴性对照； 3．内参的设定：主要为了用于靶RNA的定量。常用的内参有G3PD（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）、β-Actin（β-肌动蛋白）等。其目的在于避免
逆转录PCR两步法（RTPCR）试剂盒使用说明
主要用途逆转录PCR两步法（RT-PCR）试剂是一种旨在通过逆转录酶（reverse transcriptase）的作用把RNA逆转录成cDNA后，采用体外扩增DNA的方法（PCR法），进行分析RNA构造的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于RNA分析、cDNA克隆
逆转录PCR两步法（RTPCR）试剂盒产品说明书
逆转录PCR两步法（RT-PCR）试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 逆转录PCR两步法（RT-PCR）试剂是一种旨在通过逆转录酶（reverse transcriptase）的作用把RNA逆转录成cDNA后，采用体外扩增DNA的方法（PCR法），进行分析RNA构造的权威而经典的技
增加RTPCR特异性的办法（提高逆转录保温温度和减少基...
第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法，各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5'末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位点的RNA模
定量RTPCR－（Quantitative－RTPCR）
Application: Quantitative RT-PCR is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expres
逆转录病毒的感染途径分析
反转录病毒的感染能否实现，取决于细胞的特性，细胞的分裂时相以及与病毒有关的受体是否存在。而病毒的感受性则由细胞基因所决定。只有在许多条件都具备时，肿瘤因子才能感染细胞。首先，病毒吸附在细胞表面。在这一过程中，细胞受体及膜蛋白起主导作用，细胞没有相应的受体就不会被病毒感染。在敏感的细胞里，吸附的病毒经
PCR的基础原理
PCR的基础原理*章 PCR和RT-PCR基础PCR基础聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴
PCR常见问题及回答
PCR常见问题及回答 1. cDNA产量的很低 可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 *zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系
逆转录PCR的技术简介
由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补DNA。RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术
关于逆转录PCR的技术介绍
由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补DNA。 RT-PCR的指数扩增是一种很灵
RNA提取与RTPCR(2)
融解RNA一般使用TE。 保存RNA应该尽量低温。为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的 RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的 RNA，在水
逆转录PCR概念及方法介绍
逆转录 PCRRT-PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)是一种 RNA 逆转录和 PCR 结合起来建立的 RNA 的聚合酶链反应。RT-PCR 使 RNA 检测的敏感性提高了几个数量级[较 Northern 印迹杂交敏感(3～6)×103倍],也使一些极微量 R
增加RTPCR灵敏度
分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍／酸性酚的一步法。Trizol试剂法（见下图）将一步法加以提高，可以从多种
水质分析常见问题
15、测总磷，洗衣液稀释100倍，加热后水样变黄色，对测量结果有没有影响?答：消解后如果水样没有颜色，则不干扰实验结果。水中有颜色的物质会在消解时被消解成无色的，不影响测量结果。16、连华5B-3F水质测定仪如何恢复出厂设置?答：仪器在关闭的状态，一手按住“校正”键，一手打开开关，待屏幕上显示“99
水质分析常见问题
26、配总磷过硫酸钾，由于不好溶，加塞子水浴加热到了10秒左右，塞子不是很紧，过硫酸钾还能使用吗?答：如果进水不建议使用，可以做标准溶液试一试。过硫酸钾不好溶可以多搅拌或超声，不建议加热，控制不好温度过高后会导致过硫酸钾失效。另过硫酸钾最佳保存温度25-30℃，冷藏容易结晶。27、用3B做甲醛之前做
水质分析常见问题
13、请问做氨氮实验时，为什么加入N3试剂出现大量白色浑浊，加入N2试剂后下层红色上层青色不断有小气泡上升?答：钙镁离子高，应做絮凝沉淀预处理。水样带色或浑浊以及含其他一些干扰物质，影响氨氮的测定。因此，在分析时需做适当的处理。对较清洁的水，可采用絮凝沉淀发;对污染严重的水或工业废水，则用蒸馏法消除
水质分析常见问题
11、请问定量器为什么吸不起来?答：定量器内有两个玻璃柱，吸液时弯头附近玻璃柱会将底部封死，溶液会吸上来;排液时下面玻璃柱会将底部封死让溶液从弯头排出。两个玻璃柱相当于两个单向阀。新定量器使用时吸不上来就是弯头附近玻璃柱底部没完全密封，可用手指轻弹几下或用洗耳球将溶液吸到弯头玻璃柱处就可以了。12、