逆转录RTPCR常见问题分析
RT-PCR常见问题（一）RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因解决方案RNA被降解在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA。使用良好的无污染技术分离RNA。在将组织从动物体取出后立刻处理。RNA中包含逆转录抑制剂通过乙醇沉淀RNA除去抑制剂。用70%（体积分数）乙醇对RNA沉淀进行清洗。可以加入糖元（0.25μg/μL到0.4μg/μL）以帮助小量样品RNA的恢复。逆转录抑制剂包括：SDS，EDTA，甘油，焦磷酸钠，亚精胺，甲酰胺和胍盐。将对照RNA同样品混合，同对照RNA反应比较产量以检验抑制剂。用于合成cDNA第一链合成的引物没有很好退火确定退火温度适合您的引物。对于随机六聚体，建议在反应温度保温之前先在25℃保温10min。对于基因特异性引物（GSP），可以试一下其他GSP，或换用oligo（dT）或随机六聚体确定GSP是反义序列。起始RNA量不够增加RNA量。RNA模板二级结构......阅读全文
水质分析常见问题
19、含氯酸钠废水COD如何检测?答：含氯酸钠废水的COD检测水样的原水COD很高，用户使用了氯酸钠来处理，氯酸钠具有氧化性，能降低COD，但这种废水，使用正常方法无法检测，经过查找资料及连华技术人员的建议，我们进行了方法测试，找到解决方案。1)取2.5ml水样，加入4.8ml的E试剂，注意速度不要
芯片常见问题分析
1 芯片实验和定量PCR的优劣比较? 基因表达谱芯片实验可以对大量基因一次性进行定量研究,定量PCR则对大量基因需逐一进行定量研究。 2 在芯片制作过程中的PCR原液是否可以为客户保存? 可以抽干冷冻保存一年。 3 可否用DNA和芯片杂交? 不可以，因为芯片上的样品是cDNA而真核基因D
水质分析常见问题
05、做总磷实验时，过硫酸钾结晶了，影响检测结果吗，该怎么解决?答：过硫酸钾配制时较难溶解，使用超声波帮助其溶解。如果没有超声波，尤其是冬季室温较低，可以加热使其溶解(温度不能超过60℃，否则过硫酸钾会分解)，放冷后会有析出，因为溶液为过饱和，再加热溶解是可以使用的，不影响总磷的测定。06、请问在做
水质分析常见问题
24、测定cod用密封管消解行不行?答：可以的，但是建议使用敞口管消解。密封消解时如果密封盖没有拧紧，在颠倒摇匀的时候，可能会让溶液洒出，导致测值结果不准，甚至可能会造成人身伤害;部分水样在消解时会释放大量的气体，此种水样不可密封消解，如水里的次氯酸根太高，消解时会释放出大量氯气，密封消解会导致消解
水质分析常见问题
水质分析常见问题水质分析又称水化学分析。即用化学和物理方法测定水中各种化学成分的含量。水质分析过程中常见的问题有哪些呢？01、BOD缓冲剂液化了还能用吗?答：BOD缓冲剂时间稍长后会出现液化的现象，这是正常情况，不影响使用。02、我们测氨氮，是以氮元素计还是以铵根离子计?答:氨氮是指水中以游离氨和铵
水质分析常见问题
21、BOD缓冲剂液化还能用吗?答：BOD缓冲剂时间稍长后会出现液化的现象，这是正常情况，不影响使用。22、仪器测总氮时空白和标液正常，测水样显示(9999)什么原因?答：仪器测标样没问题，仪器一般不会有问题，可能是水样浓度太高需要稀释，总氮直测范围0.05-10mg/L，275nm波长下的吸光度尽
水质分析常见问题
08、请问BOD营养盐有黄色不溶物正常吗?答：正常，营养盐配好是淡黄色不完全溶解的溶液，用前需摇匀。09、请问N2试剂前一天配出来没什么问题，为什么放一天后变棕黄色变浑?答：N2试剂配好后应转移到聚乙烯瓶中密封、避光、低温储存。如果放到矿泉水瓶内，时间稍长会出现变质。如果未密封保存，空气中的有机气体
水质分析常见问题
24、测定cod用密封管消解行不行?答：可以的，但是建议使用敞口管消解。密封消解时如果密封盖没有拧紧，在颠倒摇匀的时候，可能会让溶液洒出，导致测值结果不准，甚至可能会造成人身伤害;部分水样在消解时会释放大量的气体，此种水样不可密封消解，如水里的次氯酸根太高，消解时会释放出大量氯气，密封消解会导致消解
eds分析常见问题
Q1:能谱的缩写是EDS还是EDX？ 开始的时候能谱的缩写有很多，比如EDS，EDX，EDAX等。ED就是Energy Dispersive，后面因为X-ray Analysis和Spectrum这几个词的不同用法，导致了缩写的不同。而且相应的汉译也有很多，比如能量色散谱，能量散射谱等等。不过
半定量RTPCR－（SemiQuantitative－RTPCR－）
RT-PCR AnalysisSolutions10X RT Buffer10X PCR Buffer100 mM Tris pH 9.0500 mM KCl1% Triton X-10025 mM MgCl2use at a concentration of 1.5 mMLysis Solutio
提高RTPCR的灵敏度和产物长度
RT－PCR 已经成为研究者确定感兴趣的器官、组织或细胞中mRNA 转录本出现、结构和表达水平的基本方法。RT－PCR的基本步骤包括：首先对样品中出现的所有mRNA 合成一个cDNA拷贝，接着扩增感兴趣的基因。因为两个步骤中使用的反应缓冲液不能兼容，所以这两个步骤（RT 和PCR）通常分别进行。即使
RTPCR的指数扩增的技术原理
RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。 RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。在完成逆转录过程之后,通过PCR进行定量分析的时候，随着
RTPCR实验操作的注意事项
在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时，会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是
Standard－RTPCR
RT-PCR or reverse transcription PCR refers to PCR that uses product of an RT reaction as template. In effect, the PCR amplifies cDNA fragments. In one
RTPCR之我见
本文讨论的范围包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不谈具体protocol，是因为各种书籍和kit说明书上都有，主要说一些原则，而且大部分是失败和成功的经验，还有小组讨论结果以及各种书里七零八落看的内容，希望对大家有用。 基因表达的定义
RTPCR－PROTOCOL
RT-PCR PROTOCOL材料与方法………………………………………………………… 1．材料 ………………………………………………………1.1 供试用组织(细胞)…………………………………1.2 主要仪器设备………………………………………1.3 主要试剂……………………………………………1.
RTPCR步骤
总RNA提取1. 取200mg组织，放到1.5ml EP管中，加入1ml Trizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿，剧烈摇动30s，室温3min。4. 12000×g，4℃ 离心，15min。5. 吸上层无色水相，移入另一EP管中（约0.5ml）。6. 加等体积异丙醇，-20℃，3
提高RTPCR的灵敏度与产物长度
摘要RT－PCR 已经成为研究者确定感兴趣的器官、组织或细胞中mRNA 转录本出现、结构和表达水平的基本方法。RT－PCR的基本步骤包括：首先对样品中出现的所有mRNA 合成一个cDNA拷贝，接着扩增感兴趣的基因。因为两个步骤中使用的反应缓冲液不能兼容，所以这两个步骤（RT 和PCR）通常分别进行。
RNA提取和RTPCR
真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA
RNA提取与RTPCR(4)
2.8 小量RNA检测方法的提高 当仅有小量RNA时，RT-PCR尤其具有挑战性。在RNA分离过程中加入的作为载体的糖元有助于增加小量样品的产量。可以在加入Trizol的同时加入无RNase的糖元。糖元是水溶性的，可以同RNA保持在水相中以辅助随后的沉淀。对于小于50mg的组织或106个培养细胞
揭秘！核酸检测是什么流程
HIV核酸定性检测技术，其检测过程分为核酸提取、逆转录合成cDNA、PCR扩增反应、扩增产物定性分和结果判定和完成报告单。 核酸检测具体流程如下： 1. 核酸提取 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应
核酸检测是什么流程？
HIV核酸定性检测技术，其检测过程分为核酸提取、逆转录合成cDNA、PCR扩增反应、扩增产物定性分和结果判定和完成报告单。 实验室检测具体步骤如下： 1. 核酸提取 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA
一文揭秘核酸检测完整流程
HIV核酸定性检测技术，其检测过程分为核酸提取、逆转录合成cDNA、PCR扩增反应、扩增产物定性分和结果判定和完成报告单。 核酸检测具体流程如下： 1. 核酸提取 使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应
RTPCR技术简介和RTPCR引物的选择
RT-PCR简介RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD
核酸检验方法
核酸检测具体流程如下：1. 核酸提取使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。2. 逆转录合成cDNA逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs
测序常见问题及其分析
1、PCR 产物测序时出现重叠峰 问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序 结果移码） 解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE 纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进
QPCR常见问题及其分析
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400
QPCR常见问题及其分析
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为10
测序常见问题及其分析
1、PCR 产物测序时出现重叠峰 问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序 结果移码） 解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE 纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进
PCR克隆常见问题分析
1、克隆PCR产物的最优条件是什么？ 最佳插入片段：载体比需实验确定。1:1（插入片段:载体）常为最佳比，摩尔数比1:8或8:1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4℃过夜。在