定点诱变与盒式诱变的比较介绍
构建一个位点导向的文库涉及使用含有一个或多个简并密码子的合成DNA片段替代一个基因片段。这可以通过双链盒式诱变或单链寡核苷酸定向诱变来实现。我们相对倾向于寡核苷酸定向诱变,因为不同于盒式诱变,它不需要在目的区域附近有独特的限制性酶切位点,并且构建一个文库只需要一个寡核苷酸片段。因此,这个方法相当简单且健全。......阅读全文
定点诱变与盒式诱变的比较介绍
构建一个位点导向的文库涉及使用含有一个或多个简并密码子的合成DNA片段替代一个基因片段。这可以通过双链盒式诱变或单链寡核苷酸定向诱变来实现。我们相对倾向于寡核苷酸定向诱变,因为不同于盒式诱变,它不需要在目的区域附近有独特的限制性酶切位点,并且构建一个文库只需要一个寡核苷酸片段。因此,这个方法相当
盒式诱变的简介
盒式诱变(cassette mutagenesis)是一种定点诱变技术,其方法是利用一段人工合成的具有突变序列的双链寡核苷酸片段,取代野生型基因中相应序列。这种诱变的双链寡核苷酸片段是由两条人工合成的寡核苷酸链组成的,当它们退火时,会按照设计要求产生出克隆需要的粘性末端。这些合成的寡核苷酸片段就
关于盒式诱变的基本介绍
所谓盒式诱变(cassette mutagenesis),就是利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段,即所谓的寡核苷酸盒(oligonucleotide cassette),取代野生型基因中的相应序列。盒式诱变是一种定点突变技术,将靶基因的一段DNA删掉,并用人工化学合成所具有的突变核苷酸
关于盒式诱变法的基本信息介绍
基因工程技术不但可使基因产生特异性位点突变,也可以产生区域性的突变。常用的方法如盒式突变法,又称片段取代法。这一方法的要点是利用目标基因中所具有的适当的限制性内切酶位点,用人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段(这种合成的片段被称为盒),来置换或取代目标基因中的相应序列。这种用于突变的盒可以是任意
定点诱变实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 TE寡核苷酸引物质粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蜡油无水乙醇仪器、耗材 离心管热循环仪离心机实验步骤 1. 利用突变区两侧的限制性内切酶位点将待诱变的DNA片段亚克隆进高拷贝数的载体中。 2. 用小量制备的质粒提取模板DNA,用TE缓冲液重悬100 ng DNA至终浓
定点诱变实验
基本方案 利用PCR引物点突变 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
定点诱变(DpnI法)
1、引物设计:每条引物都要携带有所需的突变位点,引物一般长25~45bp,设计的突变位点需位于引物中部。2、反应:使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循环次数少,一般为12个循环。反应体系:10x pyrobest Buffer 5 uldN
定点诱变(DpnI法)
1、引物设计:每条引物都要携带有所需的突变位点,引物一般长25~45bp,设计的突变位点需位于引物中部。2、反应:使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循环次数少,一般为12个循环。反应体系:10x pyrobest Buffer 5 uldNTP Mixture(10mM) 1ul模板DN
关于基因定点诱变的概述
对于任何一种遗传学研究,尤其是有关基因的结构与功能的分析,突变都是最基本的手段。经典的方法是,应用能够修饰DNA分子的化学诱变剂或物理诱变剂处理生物体。此类诱变方法虽然已得到了广泛的应用,获得了大量的突变体,但亦存在着诸多的不便之处。 第一、经受诱变剂处理的生物体,它的任何基因都有可能发生突变
丁酸梭菌与丁酸钠的比较介绍
丁酸钠,又名正丁酸钠盐,产品呈白色至类白色,似绒毛状,可吸湿性粉末,具有特殊的奶酪酸败样气味,易溶于水,水溶液pH呈碱性。因丁酸具有游离性和挥发性的特点,饲料生产中将其制成相对稳定的钠盐---丁酸钠。丁酸钠在我国是允许使用的饲料添加剂品种之一,于2006年被农业部列入《饲料添加剂品种目录》。在动
分子遗传学词汇盒式诱变
中文名称:盒式诱变外文名称:cassette mutagenesis原 料:人工合成有突变功能的寡核苷酸定义:所谓盒式诱变(cassette mutagenesis),就是利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段,即所谓的寡核苷酸盒(oligonucleotide cassette),取代
关于寡聚核苷酸的定点诱变技术介绍
是由加拿大的生物化学家M·史密斯(Michael Smith,1932—)发明的。其基本原理如下: 应用寡聚核苷酸进行DNA的定点诱变时,首先要把含有待突变的DNA片断段克隆到MI3噬菌体载体中,MI3噬菌体的正链可以感染具有纤毛的细菌,并在细菌体内进行复制后,以出芽的形式形成新的带有正链DN
ICP与AAS的比较与选择
20世纪90年代以来,随着ICP技术的不断发展,它的优势越来越突出,大有取代AAS之势,而ICP—MS的问世,不但具有优于GFAAS的检出限,而且还能测量同位素,更显示了其强大的优势。ICP是否会完全取代AAS,它们各有什么优缺点,下面对ICP—MS(等离子体质谱)、ICP—AES(全谱直读等离子体
比较FPLC与HPLC
1、二者原理相同:都是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论,并且对相体进 行了改革,配用高压输液泵,采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。 2、特点:二者均具有快速、分辨率高、检测灵敏度高、分离效能高等特点,而且FPLC还具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大
定点诱变实验——基本方案
定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。实验材料DNA试剂、试剂盒TE寡核
比较细菌与病毒的区别
病毒(virus)是一类个体微小,无完整细胞结构,含单一核酸(DNA或RNA)型,必须在活细胞内寄生并复制的非细胞型微生物。病毒比细菌还小、没有细胞结构、只能在活细胞中增殖的微生物。由蛋白质和核酸组成。多数要用电子显微镜才能观察到。细菌(英文:germs;学名:bacteria)广义的细菌即为原核生
TOC与TOD之间的比较
TOC与TOD都是利用燃烧法来测定水中有机物的含量。所不同的是,TOC是以碳的含量表示的,TOD是以还原性物质所消耗氧的数量表示的,且TOC所反映的只是含碳有机物,而TOD反映的是几乎全部有机物质。根据TOD对TOC的比例关系,可以大体确定水中有机物的种类。对于只含碳的化合物而言,因为一个碳原子燃烧
SPM与SEM的图像比较
SPM(扫描探针显微镜)与SEM(扫描电子显微镜)相比,SEM历史更长且在各方面的发展已日渐成熟。而SPM正处在方兴未艾的发展之中,软件/硬件不断开发升级,应用技术也在不断开拓。更重要的是,SPM并非是在溯寻SEM的发展历史,而是朝着一个崭新的方向在发展。虽然从名称上看二者类似,但从本质来讲,“扫描
寡核苷酸定点诱变的概念
中文名称寡核苷酸定点诱变英文名称oligonucleotidedirected mutagenesis定 义人工获得特定核酸定点突变的一种方案。将需要改变的核苷酸置于一段合成的寡核苷酸中部,在单链噬菌体(如M13)模板上用克列诺酶合成有指定变化的负链,再通过噬菌体复制得到含突变的双链。应用学科生物
PLC与DCS、-FCS比较
PLC是由早期继电器逻辑控制系统与微机计算机技术相结合而发展起来的,它是以微处理器为主的一种工业控制仪表,它融计算机技术、控制技术和通信技术于一体,集顺序控制、过程控制和数据处理于一身,可靠性高、功能强大、控制灵活、操作维护简单。近几年来,可编程序控制器及组成系统在我国冶金、电厂、轻工石化、矿业、水
温度滴定与电位滴定的比较
1.每种不同类型的电位滴定需要不同的探头:酸碱滴定需要一个pH探头;氧化还原滴定需要一个氧化还原探头;氯化物的滴定需要氯化物ISE或者银电极;对于EDTA滴定,需要根据不同的组分选择特殊的ISE。这样的例子举不胜举。我们不希望如此复杂,是不是?使用温度滴定,一个简单的温度探头就可以用于所有的分析。
油加热与电加热的比较
高压反应釜的加热方式有两种,一种是硅油加热(简称油加热),另一种是电加热。油加热快, 精准性高。它内置制冷装置f,冷却时将硅油冷却。冷却可以在零度以下。但其缺点是温度不能太高,最多在300C左右。而电加热的显著特点是可以加热到很高的温度,如800C左右。电加热的缺点是冷却依靠自来水,当然也可使用独立
球磨机驱动系统的选择与比较
在粉磨工艺中最主要的设备就是球磨机,各类球磨机大致相同,属于低速重载设备,且要求具有一定的恒转矩,以满足球磨机装载量的要求。电动机作为球磨机电力传动方式的生产机械,其功率是按最大负荷或长期额定负荷选择的。传动系统作为磨机的驱动部件,其运行特性及成本直接影响着磨机的稳定性和效益。随着磨机大型化的发展,
磁透镜与光学透镜的比较
光学透镜成像时,物距L1、象距L2、焦距f三者之间满足右图1所示关系式: 由于光学透镜的焦距f是不能改变的,要满足成像条件,必须同时改变L1和L2。 与光学透镜相似,电磁透镜成像时也必须满足式。但磁透镜的焦距可以通过改变线圈中通过电流的大小来调节。采用磁透镜成像时,可以在固定L1的情况下,改
有机膜与无机膜的比较
人们习惯根据膜元件的材质将人工合成的膜产品分为高分子聚合物膜——有机膜,和无机材料膜——无机膜。有机膜的材质非常广泛,有纤维素衍生物类、聚砜类、聚酰胺类、聚酰亚胺类、聚酯类聚稀烃类、含硅聚合物、含氟聚合物等等。无机膜分为多孔膜和致密膜两大类。致密膜主要用于气相分离,多孔膜的孔径从5微米到2纳米甚至2
AAS与ICP比较与选择方法知识
AAS顾名思义,就是原子吸收光谱法,该法具有检出限低、准确度高、选择性好(即干扰少)、分析速度快等优点。ICP原子发射光谱仪,是根据试样中被测元素的原子或离子,对各元素进行定性分析和定量分析的仪器,该仪器具有样品用量少,应用范围广且快速,灵敏和选择性好等特点。 ICP是否会完全取代AAS,它们各
关于横向与纵向加热石墨炉性能比较介绍
1、温度的均匀性和恒温区域 从两种石墨炉的设计结构看,横向加热石墨炉有着更好的温度均匀性和更大的恒温区域,由于横向加热石墨管的两端与冷却部分不接触,两端的热散失很小,沿管长度方向的温度梯度减少,其恒温区域增加,更好的适应了L′vov型炉的恒温原子化的要求。 2、记忆效应 横向加热平台石墨管
The-Lancet:MERS与SARS特征比较
2015年6月3日,《柳叶刀》(lancet)在线发表了英国伦敦大学Alimuddin Zumla等人的《中东呼吸综合征》综述文章。 Zumla等人通过检索2010年1月1日至2015年5月31日发表于Medline等数据库上有关中东呼吸综合征(MERS)的文献,以及美国、沙特、欧洲卫生部门发布
petct与SPET性能比较
PET全称为正电子发射计算机断层显像(positron emission tomography PET),是反映病变的基因、分子、代谢及功能状态的显像设备。它是利用正电子核素标记葡萄糖等人体代谢物作为显像剂,通过病灶对显像剂的摄取来反映其代谢变化,从而为临床提供疾病的生物代谢信息。是当今生命科学、医
定点诱变实验——利用PCR引物点突变
实验材料DNA试剂、试剂盒DNA聚合酶klenow限制性内切酶仪器、耗材水浴锅离心机培养箱实验步骤1. 制备模板(见基本方案,步骤1和2) 2. 合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。 3. 扩增模板DNA(基本方案,步骤4和5),在最后一次延伸结束后,加5 U 的klenow酶,30℃保温