离子交换层析的原理和过程

离子交换层析中,基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有负电荷的称之阳离子交换树脂;而带有正电荷的称之阴离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点,当蛋白质处于不同的pH条件下,其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质,所以这类蛋白质被留在柱子上,然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施,将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来。反之阳离子交换基质结合带有正电荷的蛋白质,结合的蛋白可以通过逐步增加洗脱液中的盐浓度或是提高洗脱液的pH值洗脱下来。......阅读全文

关于离子交换层析的预处理和装柱的相关介绍

  预处理和装柱  对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒,以保证有较好的均匀度,对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理,使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理,使最终转为-OH-型或盐型交换剂;对于阳离子交换剂则用“酸-

包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验

            试剂、试剂盒 包涵体沉淀 缓冲液 A 脱氧胆酸钠 N-十二烷基肌氨酸钠 仪器、耗材

包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验

试剂、试剂盒 包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材 Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器(FisherScient

包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验

试剂、试剂盒包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器(FisherScientifi

离子交换层析的具体操作

  预处理和装柱  对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒,以保证有较好的均匀度,对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理,使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理,使最终转为-OH-型或盐型交换剂;对于阳离子交换剂则用“酸-

离子交换层析的具体操作

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒,以保证有较好的均匀度,对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理,使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理,使最终转为-OH-型或盐型交换剂;对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理,使最终

离子交换层析技术的应用介绍

离子交换层析技术已广泛用于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质,也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。

离子交换层析的洗脱相关信息介绍

  已结合样品的离子交换前,可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方法将结合物洗脱,也可同时改变pH与离子强度。为了使复杂的组份分离完全,往往需要逐步改变pH或离子强度,其中最简单的方法是阶段洗脱法,即分次将不同pH与离子强度的溶液加入,使不同成分逐步洗脱。由于这种洗脱pH与离子强度的变化大,使许多洗

离子交换层析的具体操作

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒,以保证有较好的均匀度,对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理,使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理,使最终转为-OH-型或盐型交换剂;对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理,使最终

离子交换层析的加样与洗脱

层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度,所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的范围,同时要注意离子强度应低,可用透析、凝胶过滤或稀释法达此目的。样品中的不溶物应在透析后或凝胶过滤前,以离心法除去。为了达到满意的分离效果,上样量要适当,不要超过柱的负荷能力。柱的负荷能力可用交换容

离子交换层析的具体操作

对于离子交换纤维素要用流水洗去少量碎的不易沉淀的颗粒,以保证有较好的均匀度,对于已溶胀好的产品则不必经这一步骤。溶胀的交换剂使用前要用稀酸或稀碱处理,使之成为带H+或OH-的交换剂型。阴离子交换剂常用“碱-酸-碱”处理,使最终转为-OH-型或盐型交换剂;对于阳离子交换剂则用“酸-碱-酸”处理,使最终

离子交换层析技术的应用介绍

离子交换层析技术已广泛用于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质,也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。

离子交换层析的洗脱操作方法

已结合样品的离子交换前,可通过改变溶液的pH或改变离子强度的方法将结合物洗脱,也可同时改变pH与离子强度。为了使复杂的组份分离完全,往往需要逐步改变pH或离子强度,其中最简单的方法是阶段洗脱法,即分次将不同pH与离子强度的溶液加入,使不同成分逐步洗脱。由于这种洗脱pH与离子强度的变化大,使许多洗脱体

离子交换层析洗脱时的要求介绍

  ①洗脱液体积应足够大,一般要几十倍于床体积,从而使分离的各峰不至于太拥挤。  ②梯度的上限要足够高,使紧密吸附的物质能被洗脱下来。  ③梯度不要上升太快,要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸,会引起区带扩散;而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。  洗脱馏份的分析按一定体积(

关于离子交换层析的发展介-绍

  1848年,Thompson等人在研究土壤碱性物质交换过程中发现离子交换现象。上世纪40年代,出现了具有稳定交换特性的聚苯乙烯离子交换树脂。50年代,离子交换层析进入生物化学领域,应用于氨基酸的分析。离子交换层析是生物化学领域中常用的一种层析方法,广泛的应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白、糖类、核

高效亲和层析的原理和应用

中文名称高效亲和层析英文名称high-performance affinity chromatography;HPAC定  义利用分子间的结合作用(如抗原-抗体、酶-抑制物、激素-受体、糖类-外源凝集素或核酸的互补链之间的结合),将其中配对结合的任何一方固定在硬质的支持物(如硅酸微粒、合成的多聚物等

亲脂凝胶层析的概念和原理

中文名称亲脂凝胶层析英文名称lipophilic gel chromatography定  义用于脂溶性物质分离的凝胶层析技术。如Sephadex LH20、LH60是用羟丙基取代交联葡聚糖羟基的凝胶,不仅能在水中溶胀,也可在多数有机溶剂中溶胀,可用做亲脂物质分离的分子筛。应用学科生物化学与分子生物

反相分配层析的概念和原理

中文名称反相分配层析英文名称reversed-phase partition chromatography定  义流动相的极性大于固定相的分配层析技术。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

旋转薄层层析的概念和原理

中文名称旋转薄层层析英文名称rotating thin-layer chromatography定  义用硅胶板等薄层析材料代替滤纸,在圆形层析材料距圆心适当距离位置处点样后置于离心轴上,在离心力作用下,溶剂借离心力向外周移动,能加快层析速度的层析技术。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法

层析的原理

层析法又称色层分析法或色谱法,是一种基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同,使它们在某种基质中移动速度不同而进行分离和分析的方法。例如:我们利用物质在溶解度、吸附能力、立体化学特性及分子的大小、带电情况及离子交换、亲和力的大小及特异的生物学反应等方面的差异,使其在流动相与固定相之间的分配系数(

离子交换高效液相层析实验_阴离子交换HPLC

实验材料蛋白质试剂、试剂盒Tris·ClNaCl磷酸钠缓冲液仪器、耗材交换柱实验步骤1.  在使用IEX柱前,依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白质:10倍柱床的已脱气水和10倍柱床的高盐缓冲液,对聚合体IEX柱,洗柱液在8 ~10,对硅胶类柱,洗柱液pH在7~8。2.  在室温平衡IEX柱,对4

离子交换高效液相层析实验_阳离子交换HPLC

实验材料蛋白质试剂、试剂盒磷酸钠NaCl仪器、耗材层析柱HPLC进样器实验步骤1.  用10倍柱床的已脱气的水冼去柱子的贮存溶剂,并以10倍体积的高盐缓冲液在低pH洗硅胶类或聚合体IEX柱。2.  如按前述阴离子方案分离,那么应用磷酸钠和磷酸钠/NaCl缓冲液分离蛋白标准,采用以下液体进行梯度洗脱:

离子交换层析法浓缩蛋白实验

实验方法原理 离子交換层析可用于浓缩蛋白质溶液。因为大多数蛋白质的等电点均低于 8, 所以它们可在 pH 值为 8 的弱离子强度溶液中被阴离子交换树脂吸附。用离子强度大的溶液可简单的将它们洗脱下来,达到浓缩的目的。实验材料 蛋白质溶液仪器、耗材 离子交换树脂层析柱实验步骤 1. 准备离子交换树脂,装

离子交换层析法浓缩蛋白实验

            实验方法原理 离子交換层析可用于浓缩蛋白质溶液。因为大多数蛋白质的等电点均低于 8, 所以它们可在 pH 值为 8 的弱离子强度溶液中被阴离子交换树脂吸附。用离子强度大的溶液可简单的将它们洗脱下来,达到浓缩的目的。

离子交换层析法提取IgG简介

  常用的离子交换剂有DEAE纤维素或QAE纤维素,以QAE-Sephadex最为理想,DE22、32、52也可应用。取QAE-SephadexA25或A50经酸处理并在0.05mol/LpH7.5~8.6的磷酸盐缓冲液中平衡,将水分抽干,称湿重Ig加于10ml血清中,在室温30min后,离心或过滤

离子交换高效液相层析实验

实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 Tris·ClNaCl磷酸钠缓冲液仪器、耗材 交换柱实验步骤 1.  在使用IEX柱前,依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白质:10倍柱床的已脱气水和10倍柱床的高盐缓冲液,对聚合体IEX柱,洗柱液在8 ~10,对硅胶类柱,洗柱液pH在7~8。2.  在室温平衡IE

离子交换层析分为哪几种?

  离子交换层析可以根据配基的不同可以分为阳离子交换层析和阴离子交换层析。阳离子交换柱可以吸附带正电荷的蛋白,阴离子交换柱可以吸附带负电荷的蛋白。

离子交换层析实验——基本方案

离子交换层析(Ion Exchange Chromatography简称为IEC)是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。实验材料蛋白质试剂、试剂盒离子交换缓冲液仪器、耗材离子交换层析柱梯度混合器电导表实验步骤1.

离子交换层析法浓缩蛋白实验

实验方法原理离子交換层析可用于浓缩蛋白质溶液。因为大多数蛋白质的等电点均低于 8, 所以它们可在 pH 值为 8 的弱离子强度溶液中被阴离子交换树脂吸附。用离子强度大的溶液可简单的将它们洗脱下来,达到浓缩的目的。实验材料蛋白质溶液仪器、耗材离子交换树脂层析柱实验步骤1. 准备离子交换树脂,装配层析柱

常用色层分析离子交换层析

离子交换层析支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子,如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。带阳离子基团的,如磺酸基(—SO3H)、羧甲基(—CH2COOH)和磷酸基等为阳离子交换剂。带阴离子基团的,如DEAE—(二乙基胺乙基)和QAE—(四级胺乙基)等为阴离子交换剂。离子交换层析只适