凝集素亲和层析的原理

简单来说,亲和层析利用流动相和固定相内不同生物分子之间相互作用强度的差异来分离物质。通常,在开始亲和层析前需要预先进行全细胞提取物的粗制,例如细胞裂解液,生长培养基或血清。首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中,其中含有某类特定的生物大分子(从DNA到蛋白质,取决于实验需求)。等待一段时间使两相充分混合,随后将洗涤缓冲液倒入色谱柱中。洗涤缓冲液通过破坏非目标生物分子与固定相的较弱结合来去除非目标生物分子。目标生物分子对固定相具有较高的亲和力,因此能够保持与固定相的结合,而不会被洗涤缓冲液冲走。然后将洗脱缓冲液倒入含有剩余目标生物分子的色谱柱中。洗脱缓冲液比洗涤缓冲液,能够从更大程度上减弱靶生物分子与固定相之间的相互作用,从而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱缓冲液和目标分子,称为洗脱液。固定相一般是凝胶基质,常见的有琼脂糖。为了防止目标分子与配体结合过程中的空间干扰或重叠,首先将含有烃链的抑制剂连接到琼脂糖珠(固体支持物)上。......阅读全文

DNA亲和层析的过程

DNA亲和层析是利用亲和层析的原理与技术分离能与特定DNA序列相互作用的技术方法。总的过程包括两步,即:一、将某一类细胞中所有的蛋白质过含有该类细胞各种片段的DNA层析柱,用低浓度盐溶液洗去不与DNA作用的绝大多数蛋白,用中浓度盐溶液洗脱大部分与能DNA相互作用的蛋白。二、将第一步得到的能与DNA相

血球凝集素的概念

血球凝集素(hemagglutinin)是指可使红血球凝集的抗体或其他物质,在流感病毒、痳疹病毒(以及许多其他细菌和病毒)表面等均能找到,可附著于不同动物的红血球,而使红血球凝集。严重时可致死。水解血球凝集素可得轻、重两链,轻链可与受体细胞膜融合,重链则和细胞膜表面的唾液酸受体结合。血凝素在病毒导入

凝集素的常见种类

凝集素(Lectin)是指一种从各种植物,无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白,因其能凝集红血球(含血型物质),故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin,PHA),通常以其被提取的植物命名,如刀豆素A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ

植物凝集素的特点

植物凝集素是一类具有特异糖结合活性的蛋白,具有一个或多个可以与单糖或寡糖特异可逆结合的非催化结构域。凝集素最大的特点在于它们能识别糖蛋白和糖脂,特别是细胞膜中复杂结构的糖链,即细胞膜表面决定簇。

血球凝集素的简介

  血凝素是指红血球凝聚素,呈柱状,能与人、鸟、猪豚鼠等动物红细胞表面的受体相结合引起凝血,故而被称作血凝素。血球凝结素的主要特性是同糖体结合,不同的血球凝集素与特定的糖体也有不同的亲和力。一般的,血球凝集素具有二或者四分子聚合物结构,其分子由1个或者更多的亚基构成。  一种能使血液的红血球凝集的有

植物凝集素的定义

植物凝集素最早发现于1888年,Stillmark在蓖麻(Ricinus communis L.)籽萃取物中发现了一种细胞凝集因子,它具有凝集红细胞的作用。它是一类具有特异糖结合活性的蛋白,具有一个或多个可以与单糖或寡糖特异可逆结合的非催化结构域。根据植物凝集素亚基的结构特征,植物凝集素分成4种类型

植物凝集素的来源

植物凝集素是来源于植物的一类能凝集细胞和沉淀单糖或多糖复合物的非免疫来源的非酶蛋白质。由于其对于单糖或糖复合物特异性结合的能力,使得其在如信号转导、免疫反应、植物防御等诸多信号过程中均具有重要作用。同时植物凝集素具有细胞凝集、抗病毒、抗真菌及诱导细胞凋亡或自噬等多种能力,因此在生命科学、医学及农业方

凝集素的研究意义

凝集素在动、植物体内广泛存在。凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中,特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构,即细胞膜表面的糖基。一种凝集素具有只对某一种特异性糖基专一性结合的能力。因此,凝集素可以作为研究细胞膜结构的探针。凝集素在无脊椎动物血液中具有多种生物活性,可以选择凝集各种细胞,对肿瘤细胞有特异

凝集素去除半抗原糖

  蛋白质糖基化的检测实验  实验方法原理  用酶或化学脱糖基化、通过选择性标记或通过凝集素亲和层析法是检测蛋白糖基化常用方法。  实验材料  蛋白样品  试剂、试剂盒  磷酸钠缓冲液 蛋白溶液 β-巯基乙醇 NP-40 溶液  仪器、耗材  SDS-PAGE 玻璃器皿 植物凝集素柱  实验步骤  

免疫亲和层析简介

  免疫亲和层析(Immunoaffinity Chromatography,IAC),或免疫亲和色谱,是利用生物体内存在的抗原、抗体之间高度特异性的亲和力进行分离的方法。 亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。下面简单介绍一些亲和层析技术用于纯化各种生物大分子的情况。

免疫亲和层析实验

            试剂、试剂盒 免疫亲和介质 溴化氰(CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 饱和 AMS 沉淀物 偶联缓冲液

亲和层析凝胶指南

GE HealthcareBenzamidine Sepharose™ 6B is p-aminobenzamidine covalentlyattached to Sepharose 6B by the epoxy coupling method.p-Aminobenzamidine (PAB),

亲和层析技术

亲和层析     (一)原理    亲和层析是一种吸附层析,抗原(或抗体)和相应的抗体(或抗原)发生特异性结合,而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原(或抗体)固相化后,就可以使存在液相中的相应抗体(或抗原)选择性地结合在固相载体上,借以与液相中的其他蛋白质分开,达到分离提纯的目的。    

亲和层析之蛋白A

球菌的细胞壁,与IgG的Fc片段具有非常强的特异性,分子量约为42×103,如图所示。一般在蛋白 A亲和层析中,配基在中性pH条件下结合抗体,在酸性pH条件下与蛋白解离。蛋白A与抗体IgG的Fc片段结合模式基于蛋白 A 亲和层析的抗体捕获工艺较为稳定,但也存在一些不足,主要包括:(1)介质成本高。(

亲和层析--抗体纯化

蛋白 A(Protein A)琼脂糖微球蛋白 A(Protein A)是金黄色葡萄球菌的细胞壁成分。它由一条多肽链组成,其中包含五个抗体结合结构域。这些高亲和力结合域和免疫球蛋白 G(IgG)的 Fc 区域特异性结合。其他类型如 IgA 和 IgM 可能可以通过和 抗体 Fab 片段相互作用与蛋白

什么是亲和层析?

亲和色谱也称为亲和层析,是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子,并且它们的结合是可逆的,在改变流动相条件时二者还能相互分离。亲和色谱可以用来从混合物中纯化或浓缩某一分子,也可以用来去除或减少混合物中某一分子的含量。

免疫亲和层析实验

试剂、试剂盒免疫亲和介质溴化氰(CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备免疫亲和介质(带固定化的 MAb NT73; 见下文)溴

免疫亲和层析实验

试剂、试剂盒 免疫亲和介质溴化氰(CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 饱和 AMS 沉淀物偶联缓冲液乙醇胺缓冲液 BLAC 洗脱缓冲液二硫苏糖醇硫氰酸钾叠氮钠仪器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备免疫亲和介质(带固定化的 MAb NT73; 见

亲和层析法概述

亲和层析法是利用生物大分子与某些对应的专一分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离生物大分子的色谱方法,也叫做生物亲和或生物特异性亲和色谱。这种特异可逆结合的物质很多,见表6–3。如抗原与抗体、底物与酶、激素与受体等,他们间的这种特异亲和能力又叫亲和力。亲和色谱中,一对互相识别的分子互称对方

凝集素基本特性

凝集素具有多方面的特性,在此我们仅简要提及其与免疫细胞化学技术方法应用有关的某些特性。我们知道,生物膜中含有一定量的糖类,主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。凝集素最大的特点在于它们能识别糖蛋白和糖肽中,特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构,即细胞膜表面的碳脂化合物决定簇。一种凝集素具有对某一种特异性糖基专

冷凝集素试验

1﹒检验方法学(1)原理:冷凝集素试验(col d agglutinin test):冷凝集素为可逆性抗体,在低温时与自身红细胞、“O ”型红细胞发生凝集,当温度增高时,凝集又消失。(2)器材和试剂:冰箱、水浴箱、试管、试管架、吸管(1ml和0.2ml)、玻璃棒;0型或与受检者ABO同型抗凝血、受检

概述植物凝集素在生物学研究方面的应用

  植物凝集索由于专一的识别某一特定单糖或多糖中的特定糖基序列,不仅用于分离纯化,也用于糖链的结构分析。它们可识别糖链的不同类型、不同核心结构,探测糖链分布,选用多种凝集索反复核对糖链的结构可获得较为准确的结论。利用凝集素亲和层析。亲和电泳和抗体凝集素酶免疫测定凝集素和糖链结合的强弱。细胞表面的糖链

植物凝集素在生物学研究方面的应用

植物凝集索由于专一的识别某一特定单糖或多糖中的特定糖基序列,不仅用于分离纯化,也用于糖链的结构分析。它们可识别糖链的不同类型、不同核心结构,探测糖链分布,选用多种凝集索反复核对糖链的结构可获得较为准确的结论。利用凝集素亲和层析。亲和电泳和抗体凝集素酶免疫测定凝集素和糖链结合的强弱。细胞表面的糖链结构

关于植物凝集素对生物学研究方面的应用介绍

  植物凝集索由于专一的识别某一特定单糖或多糖中的特定糖基序列,不仅用于分离纯化,也用于糖链的结构分析。它们可识别糖链的不同类型、不同核心结构,探测糖链分布,选用多种凝集索反复核对糖链的结构可获得较为准确的结论。利用凝集素亲和层析。亲和电泳和抗体凝集素酶免疫测定凝集素和糖链结合的强弱。细胞表面的糖链

简述亲和层析的特殊应用

  亲和色谱的用途很广泛,可以用来从细胞提取物中分离纯化核酸、蛋白,还可以从血浆中分离抗体。分离重组蛋白就经常使用亲和色谱。通过基因修饰为蛋白加上一些人为的特性,这些特性使蛋白选择性地与配体结合,从而达到分离的目的。亲和色谱的另一大用途是从血浆中分离抗体。

免疫亲和层析的应用特点

免疫亲和层析(Immunoaffinity Chromatography,IAC),或免疫亲和色谱,是利用生物体内存在的抗原、抗体之间高度特异性的亲和力进行分离的方法。 亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。下面简单介绍一些亲和层析技术用于纯化各种生物大分子的情况。

DNA亲和层析的技术特点

DNA亲和层析是一种检测DNA与蛋白质相互作用的技术手段,属于亲和层析的一种,利用一些蛋白质能结合特定序列的DNA片段的原理,分离与特定DNA序列有相互作用的蛋白质。

免疫亲和层析的应用实例

  抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上,就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低,用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离,而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原,经动物免

简述免疫亲和层析的应用

  一种基于免疫层析测试(ICT)试纸的亲和层析测试。有别于普通临床检测,该试纸提供了快速的诊断手段。使用ICT,技术人员无需使用实验室,即可在患者的床边进行测定。 ICT检测对引起感染的微生物高度特异。

免疫亲和层析的应用实例

  抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上,就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低,用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离,而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原,经动物免