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凝集素去除半抗原糖

蛋白质糖基化的检测实验 实验方法原理 用酶或化学脱糖基化、通过选择性标记或通过凝集素亲和层析法是检测蛋白糖基化常用方法。 实验材料 蛋白样品 试剂、试剂盒 磷酸钠缓冲液 蛋白溶液 β-巯基乙醇 NP-40 溶液 仪器、耗材 SDS-PAGE 玻璃器皿 植物凝集素柱 实验步骤 一、用 PNGaseF（N-多糖酶）处理 以 0.1 mol/L 磷酸钠（或 Tris-HCl，而不用柠檬酸）缓冲液，pH 7.4 ( 7.0~8.0 ) 配制高达 2 mg/ml 的蛋白溶液，并含 50 mmol/L β-巯基乙醇和 0.1% SDS，在水浴中煮沸 2 分钟。加 1/10 体积的 10% NP-40 溶液（或使 SDS 浓度少于或等于 0.17%，NP-40：SDS 的质量比在终反应中至少是 7:1)。加 PNGaseF 到终浓度为 6 mU/ml。注意这里的 1U 相当于在 1 分钟形成的 1 微摩尔产物；--......阅读全文