重组蛋白的定义
其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的 宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。当前重组蛋白的生产主要有四大系统;1.原核表达系统:最常用的大肠杆菌蛋白表达,真核表达系统如酵母,哺乳动物细胞蛋白表达(常用的细胞CHO,HEK293)及、昆虫细胞蛋白表达系统。重组蛋白的产生尚可利用 转基因动物的 乳腺或者植物产生,产生的重组蛋白作为生物制药的产物,在医学中作用显著。利用基因工程技术,可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。 以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例:其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的 启动子等调控组件重组在一起,通过 显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会 泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋......阅读全文
细胞因子重组要求及状态
重组细胞因子要求: 1. 真实性:重组蛋白产品一致经过N末端氨基酸序列分析;必要时应用SDS-PAGE, RP-HPLC和质谱(MS)检测其真实性。 2. 纯度:应用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析产品纯度。 3. 生物活性:进行相应的体外(in vitro)或体内(in vivo
DNA重组技术的组成部分
上游技术:基因重组、克隆和表达的设计与构建(即DNA重组技术);下游技术:基因工程菌(细胞)的大规模培养、外源基因表达产物的分离纯化过程。广义的基因工程概念更倾向于工程学的范畴。广义的基因工程是一个高度的统一体:上游重组DNA的设计必须以简化下游操作工艺和装备为指导思想;下游过程则是上游重组蓝图的体
重组质粒(dna-recombinant-plasmid)的连接
质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA 片段( <10kb) 且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段,然后体外使两者相连接,再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中,
重组载体疫苗的基本概念
一种新型疫苗。以减毒活病毒或减毒活细菌为载体,将编码特定病原体免疫原性蛋白的基因插入载体,作为疫苗输入机体可预防特定病原体。
基因物质转移和重组的途径
(1)转化:是受体菌直接摄取供体菌提供的游离DNA片段整合重组,使受体菌的性状发生变异的过程。(2)转导:是以温和噬菌体为媒介,将供体菌的基因转移到受体菌内,导致受体菌基因改变的过程。(3)接合:是受体菌和供体菌直接接触,供体菌通过性菌毛将所带有的F质粒或类似遗传物质转移至受体菌的过程。(4)溶原性
集团公司贸易领域重组整合
9月28日,集团公司在新材料楼召开贸易领域重组整合会议,重组整合后的钢研国际贸易有限公司领导班子成员及安泰国际贸易有限公司、器材供应部、北京钢研科贸公司员工参加会议。会议由集团公司副总经理李波主持。 为落实集团公司“十二五”战略发展规划,优化贸易领域资源配置、加强规范管理、强化风险控制,集
重组载体疫苗的概念和作用
一种新型疫苗。以减毒活病毒或减毒活细菌为载体,将编码特定病原体免疫原性蛋白的基因插入载体,作为疫苗输入机体可预防特定病原体。
重组活化基因的定义和作用
中文名称重组活化基因英文名称recombination activating gene;RAG定 义参与激活V(D)J DNA重组作用的基因。在V(D)J重组中重组活化基因的产物可调节依赖于重组信号序列的切割作用。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
重组质粒的连接、转化及筛选
第一节 概 述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 ,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可
重组质粒的连接、转化及筛选
第一节 概 述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 ,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实
重组质粒的连接、转化及筛选
重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化,于体外使两者相连接(若用T-载体,可直接用纯化的PCR产物进行连接),转化宿主细菌后,利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ
重组质粒的转化、筛选和鉴定
一、实验目的1、学习克隆工作中最常用的双酶切;2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术;3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术;4、了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。5、外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。6、学习鉴定重组子的方法。二、 实验原理重组子的建立
重组MVA活体免疫染色实验
基本方案 实验方法原理 活体免疫染色可用于检测改造的痘苗病毒Ankara (MVA),因为MVA不能形成分开的、易辨认的噬斑,并且这种技术不需要利用筛选的标记
Cre重组酶的基本信息
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡 [1] 。Cre(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)是来源于噬菌体P1的一种酶蛋白,分
德国光伏行业面临重组前景
德国太阳能经济联邦协会日前公布的数据显示,2012年德国太阳能光伏发电量较2011年猛增45%。分析人士指出,产能过剩可能使德国光伏行业面临重组前景。 数据显示,2012年1月至11月,全德新增光伏装机容量7300兆瓦。截至2012年底,德国已安装130万套光伏发电设备,为约800万用户提
分子的重复机制异位重组
减数分裂过程中未对齐的同源染色体之间发生的不平等交叉引起的复制称为异位重组。不平等交叉是在基因组中对部分区域DNA片段进行复制最有效的方法。发生这种情况的可能性取决于两条染色体之间重复元件的共享程度。该重组的产物是交换位点的重复和相互删除。异位重组通常由复制断裂点处的序列相似性介导,形成直接重复。重
重组质粒的连接、转化及筛选
重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化,于体外使两者相连接(若用T-载体,可直接用纯化的PCR产物进行连接),转化宿主细菌后,利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ
重组乙肝疫苗的接种信息
如何接种乙肝疫苗:1、接种的对象:国家计划免疫对象是所有新生儿,享受免费注射。其他人和可能与乙型肝炎患者接触的人均可接种。2、接种前准备:乙肝疫苗只对健康人有效果,而乙肝患者不管打多少针都没有效果,所以在接种前最好先检查下乙肝两对半、HBV-DNA等项目,以确定是否感染乙肝病毒。3、接种时间:一般按
基因间重组的概念和意义
1、概念:在生物体进行有性生殖的过程中,控制不同形状的非等位基因重新组合。2、类型:(1)自由组合型:减数第一次分裂后期,随着非同源染色体自由组合,非同源染色体上的非等位基因也自由组合。(2)交叉互换型:减数第一次分裂前期(四分体),基因随着同源染色体的非等位基因的交叉互换 而发生重组。3、意义:(
重组酶聚合酶扩增叙述
重组酶聚合酶扩增(RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37℃左右。重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链D
重组MVA活体免疫染色实验
实验方法原理 活体免疫染色可用于检测改造的痘苗病毒Ankara (MVA),因为MVA不能形成分开的、易辨认的噬斑,并且这种技术不需要利用筛选的标记基因。实验材料 汇片生长的CEF细胞试剂、试剂盒 完全 MEM-2、MEM-2.5 和 MEM-10 培养基转染细胞裂解液干冰/乙醇抗外源基因表达蛋白一
关于重组人溶菌酶的定义综述
1、名词释义 重组人溶菌酶是一种广谱抗菌、抗病毒药物, 能够杀死毒性微生物并保护自身不受损害, 同时与其他药物相互作用无交叉反应。 2、生物学定义 人源溶菌酶(Human lysozyme,HLZ)属于C型溶菌酶,是一种由130个氨基酸组成的,分子量约为14.7 kD的单体蛋白。其氨基酸
重组酵母乙肝疫苗的简介
利用现代基因工程技术,构建含有乙肝病毒表面抗原基因的重组质粒,经此重组质粒转化的酵母能在繁殖过程中产生乙肝病毒表面抗原,经破碎酵母菌体,乙肝病毒表面抗原释放经纯化、灭活加佐剂氢氧化铝后制成乙肝疫苗。重组酵母乙肝疫苗为adw亚型,用于预防所有已知亚型的乙肝病毒的感染。
中钢吉炭重组恢复审核
中钢吉炭3月1日公告,接中国证监会通知,恢复审核公司并购重组申请。在证监会最新披露的并购重组审核进度表中,中钢吉炭的审核状态也由上期的“有关方面涉嫌违法稽查立案,暂停审核”变为“消除影响,恢复审核”。 据公司重组方案,中钢吉炭拟将全部资产及负债置出,通过资产置换、发行股份的方式购
简述转座重组的转座机制
细菌转座子有两种转座机制:简单转座和复制转座。 1.简单转座( simple transposilion) 转座酶将转座子从原位点切下,插入被转座酶错位切割的转座位点,经过填补之后,两端形成短的同向重复序列(4~13bp)。原位点或被连接修复,或所属DNA被降解。降解通常是致死性的。 2.复
基因重组和基因重排的区别
基因重排:通过基因的转座,DNA的断裂错接而使正常基因顺序发生改变。基因重排是一个基因内DNA排列发生改变,而使这个基因改变了,如出现新的基因就是靠这种方法基因重组: 是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合,形成新DNA分子的过程。基因重组却是几个不同基因互相改变位置,而使的
关于基因重组疫苗的类型介绍
基因重组是指一个基因的DNA序列是由两个或两个以上的亲本DNA组合起来的。基因重组是遗传的基本现象,病毒、原核生物和真核生物都存在基因重组现象。减数分裂可能发生基因重组。基因重组的特点是双DNA链间进行物质交换。真核生物,重组发生在减数分裂期同源染色体的非姊妹染色单体间,细菌可发生在转化或转导过
Cre重组酶的结构和来源
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡 。Cre(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)是来源于噬菌体P1的一种酶蛋白,分子量约
CreloxP重组系统技术详解
Cre-loxP重组系统一.Cre-loxP重组系统作用原理1. Cre重组酶和loxP位点Cre重组酶(Cyclization Recombination Enzyme)由大肠杆菌噬菌体P1的Cre基因编码,是由343个氨基酸组成的38kD的蛋白质。它不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能够特异性
阳性重组克隆的构建和筛选
实验概要构建并筛选含有目的基因的候选阳性重组克隆。有助于理解目的基因与克隆载体的连接、转化和筛选原理及流程。实验原理1. 连接反应:利用经过限制性内切酶消化的线形载体与目的基因两端暴露出的平末端或相同的粘性末端,使用T4 DNA 聚合酶将二者连接起来形成重组载体。2. 转化过程:感受态细胞通过温度敏