细胞人工纯化的概念
人工纯化,即利用人为手段造成某一细胞生长有利的环境条件,抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。......阅读全文
细胞人工纯化的概念
人工纯化,即利用人为手段造成某一细胞生长有利的环境条件,抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。
细胞的纯化方法介绍(自然纯化和人工纯化)(二)
(1)上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化: 两者在胰蛋白酶的作用下,由于成纤维细胞先脱壁,二上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁,特别是在原代细胞初次传代和早期传代中两种差别尤为明显,故可采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开,方法步骤如下。 采用常规消化传代方式将0.25%胰蛋白酶注入培养
细胞的纯化方法介绍(自然纯化和人工纯化)(一)
体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织,体内的细胞都是混杂生长,每一种组织都有血管和间叶组织,因此,来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,既有上皮样细胞又有纤维样细胞,纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等,混杂的细胞会直接影响实验结果,而利用体外培养细胞进
细胞纯化的概念和目的
体外培养的细胞源于人或动物体内或胚胎组织,其体内的细胞都是混杂生长,每一种组织都有血管和间叶组织。因此,来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,即有上皮样细胞,又有纤维样细胞,纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等,混杂的细胞会直接影响实验结果。而利用体外培
细胞人工纯化的机械刮除法简介
原代培养时,如果上皮细胞和成纤维细胞为分区成片混杂生长,每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。可采用机械的方法去除不需要的细胞区域而保留需要的细胞区域,其方法如下: (1)将要纯化细胞的培养瓶,在净化室内放在倒置显微镜监视下进行。 (2)用硅橡皮刮子在不需要生长的细胞区域推划,使细
细胞人工纯化的电烙筛选法
在贴壁细胞转化时,往往在培养瓶的细胞层中会出现分散的转化灶,转化灶区域细胞密集、排列规则,有明显生长趋势,与周边未能转化的细胞有明显的区域界限,此时即可用机械刮除法去除未转化细胞,也可用电烙筛选法烫死未转化细胞而保留转化灶细胞。其方法如下: (1)倒去旧液,并用记号笔划出转化灶的区域。 (2
细胞人工纯化的酶消化法介绍
酶消化法是比较常用的纯化方法,不仅对贴壁细胞可行,能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同,使两者分开,达到纯化的目的,对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化也是十分有效的。 (1)上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化 两者在胰蛋白酶的作用下,由于成纤维细胞先脱壁,而上皮细胞要消化相当长
细胞人工纯化的反复贴壁法介绍
成纤维细胞与上皮细胞相比,其贴壁过程快,大部分细胞能在短时间内(大约10~30min)完成附着过程(但不一定完全伸展),而上皮细胞(大部分)在短时间内不能附着或附着不稳定,稍加振荡即浮起,利用此差别可以纯化细胞。其方法如下: (1)将细胞悬液接种在一个培养瓶内(最好培养液内不含血清,此时上皮细
纯化鸡胚细胞疫苗的概念和功能
中文名称纯化鸡胚细胞疫苗英文名称purified chick embryo cell vaccine;PCEC定 义取鸡成纤维细胞原代培养的狂犬病毒,经β-丙内酯灭活而制成的一类用于接触前或接触后预防狂犬病的冻干制剂。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
人工被动免疫接种的概念
中文名称人工被动免疫接种英文名称artificial passive immunization定 义人工给予机体免疫效应分子(如抗体)或免疫细胞,使之获得相应免疫力的方法。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
人工被动免疫接种的概念
中文名称人工被动免疫接种英文名称artificial passive immunization定 义人工给予机体免疫效应分子(如抗体)或免疫细胞,使之获得相应免疫力的方法。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
人工主动免疫的概念
人工主动免疫是将疫苗或类毒素接种于人体,使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施,主要用于预防,这就是通常所说的“打预防针”。
人工免疫接种的概念
中文名称人工免疫接种英文名称artificial immunization定 义人工接种抗原、免疫分子(如抗体)或免疫细胞使机体获得相应免疫力的方法。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
多位点人工接头的概念
中文名称多位点人工接头英文名称polylinker定 义含多个限制酶识别位点的一段人工合成DNA序列,可插入质粒等载体中成多克隆位点,或连接到其他DNA片段上,以方便分子克隆操作。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
人工主动免疫接种的概念
中文名称人工主动免疫接种英文名称artificial active immunization定 义人工接种抗原,使机体产生针对该抗原的特异免疫力的方法。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
人工微型染色体的概念
中文名称人工微型染色体英文名称artificial minichromosome定 义将真核细胞的DNA复制起点、着丝粒和端粒三种关键性DNA序列互相搭配,人工组装成的小染色体。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞培养与细胞工程(二级学科)
人工主动免疫接种的概念
中文名称人工主动免疫接种英文名称artificial active immunization定 义人工接种抗原,使机体产生针对该抗原的特异免疫力的方法。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(二级学科),免疫预防(三级学科)
细菌人工染色体的概念
细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)是指一种以F质粒(F-plasmid)为基础建构而成的细菌染色体克隆载体,常用来克隆150kb左右大小的DNA片段,最多可保存300kb个碱基对。
原代细胞纯化方法
(1)胰蛋白酶 纯化法 ●在去除不需要的组织后,使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4 mm小片,通过悬浮在无钙镁的平衡盐溶液中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀,去除上清液。重复清洗2到3次。 ●将盛有组织碎片的容器置于冰上,去除残留的上清液。加入0.25%溶解在无钙镁的平衡盐溶液中的胰蛋
细胞分离纯化技术
Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞实验方法原理Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低(
细胞分离纯化技术
实验方法原理 常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是 1.077±0.001 的 聚 蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,水性高,平均分子量为400000,当密度为1.2 g/ml仍未超出正常生理性
细胞分离纯化技术
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞 实验方法原理 常用来分离人外周血单个
细胞分离纯化技术
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞 实验方法原理 常用来分离人外周血单个
酵母人工染色体的概念和本质
酵母人工染色体(Yeast artificial chromosomes,简称YAC),是一种能够克隆长达400Kb的DNA片段的载体,含有酵母细胞中必需的端粒、着丝点和复制起始序列,是细胞内具有遗传性质的物体,易被碱性染料染成深色,所以叫染色体(染色质)。其本质是脱氧核苷酸,是细胞核内由核蛋白组成
纯化RNA实验——从培养的细胞中纯化总RNA
实验材料细胞试剂、试剂盒RNA 提取缓冲液变性液水饱和酚仪器、耗材培养皿Falcon 2063 管实验步骤1. 取 1 个细胞已长满的 100 ml 培养皿,吸出培养液,加 2 ml RNA 提取缓冲液,用橡胶刮棒刮下细胞。RNA 提取缓冲液:变性液,20 mlβ-巯基乙醇,0.144 ml2 mo
细胞自然纯化的方法特点
自然纯化即利用某一种类细胞的增殖优势,在长期传代过程中靠自然淘汰法,不断排挤其他生长慢的细胞,靠自然增殖的潜力,最后留下生长优势旺的细胞,达到细胞纯化的目的。但这种方法常无法按照需要和实验要求及目的来选择细胞,此法花费时间长,留下来的往往是成纤维细胞。仅有那些恶性变的肿瘤细胞或突变的细胞可以通过此方
T-细胞亚群的分离纯化
基 本 方 案 间 接 淘 洗 法 分 离 T 细胞亚群材 料亲和纯化的人免疫球蛋白吸附的羊抗鼠 Ig (Tago)0.05m ol/L Tris •Cl,pH9. 5抗 CD 8 抗体或其他特异性小鼠抗体(多克隆或单克隆;如 Coulter 或 Becton Dickinson)PBS总 T 细
巨噬细胞的分离和纯化
巨噬细胞的分离1)从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞1.取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。3~4天以后收集腹腔细胞。2.如要收集腹腔静置巨噬细胞,不注射刺激物,
单个核细胞的分离纯化
外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)主要指淋巴细胞和单核细胞,是免疫学实验最常用的细胞,也是进行T细胞和B细胞分离纯化的重要环节。1.原理PBMC的密度与血液中的其他成分不同。红细胞和粒细胞的密度较大,为1.092左右;淋巴细胞和单核细胞的
T-细胞亚群的分离纯化
分离出来的T 细胞用抗CD8 抗体可分为CD4 + 和 CD8+ T 细胞。由于两种细胞都可回收,此法优于抗体和补体溶解法作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」实验步骤基 本 方 案 间 接 淘 洗 法 分 离 T 细胞亚群材 料亲和纯化的人免疫球蛋白吸附的羊抗鼠