细胞人工纯化的电烙筛选法
在贴壁细胞转化时，往往在培养瓶的细胞层中会出现分散的转化灶，转化灶区域细胞密集、排列规则，有明显生长趋势，与周边未能转化的细胞有明显的区域界限，此时即可用机械刮除法去除未转化细胞，也可用电烙筛选法烫死未转化细胞而保留转化灶细胞。其方法如下： (1)倒去旧液，并用记号笔划出转化灶的区域。 (2)用加热的微型电烙器(类似焊接用的电烙铁)将转化灶周边的细胞全部烫死，只保留转化灶细胞。在单细胞克隆筛选时，也可用此法将单个细胞周围的细胞杀死，然后在适应性培养基中(50%是旧液)继续培养，即可达到纯化的目的。......阅读全文
细胞人工纯化的电烙筛选法
在贴壁细胞转化时，往往在培养瓶的细胞层中会出现分散的转化灶，转化灶区域细胞密集、排列规则，有明显生长趋势，与周边未能转化的细胞有明显的区域界限，此时即可用机械刮除法去除未转化细胞，也可用电烙筛选法烫死未转化细胞而保留转化灶细胞。其方法如下： (1)倒去旧液，并用记号笔划出转化灶的区域。 (2
电烙筛选法纯化的方法介绍
在贴壁细胞转化时，往往在培养瓶的细胞层中会出现分散的转化灶，转化灶区域细胞密集、排列规则，有明显生长趋势，与周边未能转化的细胞有明显的区域界限，此时即可用机械刮除法去除未转化细胞，也可用电烙筛选法烫死未转化细胞而保留转化灶细胞。其方法如下：(1)倒去旧液，并用记号笔划出转化灶的区域。(2)用加热的微
细胞人工纯化的反复贴壁法介绍
成纤维细胞与上皮细胞相比，其贴壁过程快，大部分细胞能在短时间内(大约10~30min)完成附着过程(但不一定完全伸展)，而上皮细胞(大部分)在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，利用此差别可以纯化细胞。其方法如下： (1)将细胞悬液接种在一个培养瓶内(最好培养液内不含血清，此时上皮细
细胞人工纯化的酶消化法介绍
酶消化法是比较常用的纯化方法，不仅对贴壁细胞可行，能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，使两者分开，达到纯化的目的，对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化也是十分有效的。 (1)上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化 两者在胰蛋白酶的作用下，由于成纤维细胞先脱壁，而上皮细胞要消化相当长
细胞人工纯化的概念
人工纯化，即利用人为手段造成某一细胞生长有利的环境条件，抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。
细胞的纯化方法介绍（自然纯化和人工纯化）（二）
（1）上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化： 两者在胰蛋白酶的作用下，由于成纤维细胞先脱壁，二上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁，特别是在原代细胞初次传代和早期传代中两种差别尤为明显，故可采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开，方法步骤如下。 采用常规消化传代方式将0.25%胰蛋白酶注入培养
细胞的纯化方法介绍（自然纯化和人工纯化）（一）
体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织，体内的细胞都是混杂生长，每一种组织都有血管和间叶组织，因此，来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长，既有上皮样细胞又有纤维样细胞，纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等，混杂的细胞会直接影响实验结果，而利用体外培养细胞进
原代细胞常用纯化方法
人工纯化是利用人为手段造成对某一细胞生长有利的环境条件，抑制其他细胞的生长从而达到纯化细胞的目的。 1、细胞时间差酶消化法： 酶消化法是比较常用的纯化方法，不仅对贴壁细胞可行，能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，是两者分开，达到纯化的目的；另外对贴壁细胞与半贴壁细胞及黏附细胞
细胞的纯化的两种方法
细胞的纯化的两种方法细胞的纯化一般分为两种,即自然纯化很人工纯化.常用的纯化方法有,酶消化法,细胞因子依赖纯化法,机械刮除法,反复贴壁法,电烙筛选法. 体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织,体内的细胞都是混杂生长,每一种组织都有血管和间叶组织,因此,来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多
细胞的纯化的两种方法
细胞的纯化一般分为两种,即自然纯化很人工纯化.常用的纯化方法有,酶消化法,细胞因子依赖纯化法,机械刮除法,反复贴壁法,电烙筛选法. 体外培养的细胞源于人或动物或胚胎组织,体内的细胞都是混杂生长,每一种组织都有血管和间叶组织,因此,来源于上述组织的培养材料的原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长,既有
细胞人工纯化的机械刮除法简介
原代培养时,如果上皮细胞和成纤维细胞为分区成片混杂生长，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。可采用机械的方法去除不需要的细胞区域而保留需要的细胞区域，其方法如下： (1)将要纯化细胞的培养瓶，在净化室内放在倒置显微镜监视下进行。 (2)用硅橡皮刮子在不需要生长的细胞区域推划，使细
原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化
原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化 PriCells-原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化 原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长，既有上皮样细胞又有纤维样细胞，纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等。混杂的细胞会直接影响实验结果。 在体外培养原代细胞时，为了保
原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化
PriCells-原代上皮细胞与原代成纤维细胞培养的分离纯化原代细胞、传代细胞绝大多数都呈混合生长，既有上皮样细胞又有纤维样细胞，纤维样细胞又包括成纤维细胞、肌细胞、骨细胞、滑膜细胞等。混杂的细胞会直接影响实验结果。在体外培养原代细胞时，为了保证实验结果的可靠性、一致性、稳定性、和可重复性，要求采用
细胞纯化的方法分类和介绍
自然纯化自然纯化即利用某一种类细胞的增殖优势，在长期传代过程中靠自然淘汰法，不断排挤其他生长慢的细胞，靠自然增殖的潜力，最后留下生长优势旺的细胞，达到细胞纯化的目的。但这种方法常无法按照需要和实验要求及目的来选择细胞，此法花费时间长，留下来的往往是成纤维细胞。仅有那些恶性变的肿瘤细胞或突变的细胞可以
吸附法纯化病毒实验——红细胞吸附法
实验方法原理用于某些可与红细胞吸附的病毒的浓缩，如正粘病毒和副粘病毒，由于红细胞吸附法是特异的，故可达到浓缩并纯化的目的。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液鸡红细胞悬液仪器、耗材烧杯水浴锅实验步骤用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞，常用的是鸡红细胞。基本步骤为：① 1%~3% 鸡
细胞纯化酶消化法的方法介绍
酶消化法是比较常用的纯化方法，不仅对贴壁细胞可行，能利用上皮细胞和成纤维细胞对胰蛋白酶的耐受性不同，使两者分开，达到纯化的目的，对贴壁细胞与半贴壁及粘附细胞间的分离纯化也是十分有效的。
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中 采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
实验方法原理 这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中 采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。实验材料
中等量细胞克隆的杂交法筛选实验
这一方法适用于任何大小的细菌克隆，但小的克隆可以给出最清楚的结果。小克隆可以产生尖锐的杂交信号，而且在克隆从琼脂板转到膜的过程中不会弥散。操作中采用能够包含 2500 克隆的 90 mm 板效果最好。在保证没有气泡的情况下，用更大的滤膜很难正好覆盖于 150 mm 板。本实验来源「分子克隆实验指南第
悬浮培养法细胞的筛选驯化和保藏
实现悬浮培养首先需要选择合适的宿主细胞，细胞系的特征直接影响放大的可能性以及放大技术的选择。同一种细胞在悬浮培养和贴罐培养时对同一病毒的敏感性不同；同一株细胞不同的克隆对营养条件有不同的需求，对病毒敏感性亦可能不同。 常根据毒株特性，综合考虑所用毒株能在何种细胞上增殖、表达，悬浮或贴壁细胞属性足否适
细胞因子依赖纯化法的方法介绍
人和动物组织中某些细胞需要有特殊的细胞因子存在的微环境才能长期存活和生长繁殖，如IL-2是T细胞生长所必需的细胞因子，BCGF是B细胞的生长因子，体外培养中淋巴细胞若加入IL-2就可使T细胞生长繁殖，形成IL-2依赖的T细胞系，如CTLL-2细胞株，而其他细胞则自然被淘汰，采用此法还建立了IL-6依
GST融合蛋白纯化——筛选表达株
Purification of GST fusion proteins in E.coli GSTSugden lab,McArdle Laboratory for Cancer Research ,University of Wisconsin-Madison Medical SchoolScre
细胞因子依赖纯化法基本介绍
人和动物组织中某些细胞需要有特殊的细胞因子存在的微环境才能长期存活和生长繁殖，如IL-2是T细胞生长所必需的细胞因子，BCGF是B细胞的生长因子，体外培养中淋巴细胞若加入IL-2就可使T细胞生长繁殖，形成IL-2依赖的T细胞系，如CTLL-2细胞株，而其他细胞则自然被淘汰，采用此法还建
密度阻滞法纯化人外周血单核细胞
试剂和器材： 1. 抗凝血剂：100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L柠檬酸钠；2. Hepes缓冲生理盐水（HBS）：8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；3. 淋巴细胞分离液（例如LymphoprepTM或NycoPrepTM1.077）或OptiPre
转化克隆的筛选和鉴定——快速PCR筛选法
实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒引物Taq酶PCR缓冲液甘油硫酸镁dNTP蒸馏水琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器微量移液取样器移液器吸头离心管双面微量离心管架制冰机恒温摇床超净工作台摇菌管PCR仪培养皿凝胶电泳仪
原代细胞的培养与建系3
下面为美国标准细胞库或细胞银行（ATCC）入库细胞的基本要求： （1）培养简历 组织来源日期、物种、组织来源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态，细胞已传代数等。 （2）冻存液 培养基和保护剂名称。 （3）细胞活力 冻融前后细胞接种存活率和生长特性(生长繁殖曲线，分裂指数等)。 （4
抗体的纯化：盐析法
精制抗体的方法很多。一般采用综合技术，避免蛋白变性。如分离IgG时，多结合使用盐析法与离子交换法，以求纯化。提取IgM的方法也很多，如应用凝胶过滤与制备电泳法，或离子交换与凝胶过滤等。 一、原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。
抗体的纯化：盐析法
精制抗体的方法很多。一般采用综合技术，避免蛋白变性。如分离IgG时，多结合使用盐析法与离子交换法，以求纯化。提取IgM的方法也很多，如应用凝胶过滤与制备电泳法，或离子交换与凝胶过滤等。一、原理蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用
振荡摇床法纯化培养少突胶质细胞实验
实验方法原理利用少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞生长存存时间上的差异，以及细胞生长方式、细胞对培养层黏附性不同等特性，用37℃恒温摇床从培养的混合胶质细胞中分离少突胶质前休细胞，然后再利用差速贴壁的原理用塑料培养皿或培养瓶除去纯化后污染的星形胶质细胞以获得高纯度的少突胶质细胞，并在体外诱导分化
振荡摇床法纯化培养少突胶质细胞实验
基本方案 实验方法原理 利用少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞生长存存时间上的差异，以及细胞生长方式、细胞对培养层黏附性不同等特性，用37℃恒温摇床从培养