亚硫酸氢盐测序法检测甲基化的介绍
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶,最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-克隆测序法。......阅读全文
快速可靠的甲基化分析,无需亚硫酸氢盐转化
在甲基化分析中,亚硫酸氢盐转化通常是必经之路。它将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,之后再结合PCR、测序等技术分析甲基化状态。听上去似乎很简单,但要想获得漂亮的结果,却并非那么容易。转化效率如何?回收率如何?这都是需要考量和优化的因素。 最近,QIAGEN
RNA甲基化测序
1、NSUN2影响m5C在HEK293细胞中整体分布情况NSUN2被报道是RNA甲基转移酶,能使tRNAs和mRNA发生m5C甲基化修饰。为了探究NSUN2对HEK293细胞mRNA m5C甲基化修饰的影响。作者利用CRISP/Cas9技术敲减NSUN2(NSUN2-/-HEK293细胞)后进行
最新DNA甲基化测序技术比较研究
在不同疾病中,DNA甲基化具有不同的模式。DNA甲基化的具体模式通常与诸如疾病亚型、疾病预后以及药物反应等临床信息具有一一对应的联系。在多种癌症的治疗过程中,DNA甲基化生物标志物可以帮助临床医生选择恰当的治疗方式。 对于拥有成千上万个样本的大量病人来说,全基因组映射与DNA甲基化分析是非常合
甲基化测序要躲哪些坑?甲基化检测的局限性剖析
表观组学研究滞后于基因组学是可以理解的。一方面,在分析碱基修饰或染色体活性之前,我们需要知道基因组的确切序列,即得到基因组的参考序列,在这个基础之上基因组的表观调控研究才能得以进行;另一方面,造成表观组学研究发展相对缓慢的一个重要原因,是目前支撑表观组学研究的技术手段都或多或少存在一定的局限性,限制
北大汤富酬、乔杰、付卫Science发表结直肠癌新成果
结直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤。基因组不稳定性、表观遗传异常以及基因表达失调是结直肠癌的典型分子特征。以往的单细胞研究只能分别检测基因组、甲基化组或转录组,而不能以单细胞分辨率同时开展多组学研究。 为了更好地了解结直肠癌的发展,北京大学的研究团队开发出一种单细胞测序方法,不仅能够分析单细胞的
m5C-RNA甲基化测序介绍
m5C RNA甲基化简介通过分析近几年的国自然立项,可以发现RNA甲基化这两年的基金项目呈指数级增长的趋势:特别是从2015年的5项到2017年的25项,项目增长尤为显著。仅2018年1月的RNA甲基化文献就达到25篇,可以说RNA甲基化的发展已经到了井喷阶段,多篇文章荣登CNS级别期刊。RNA甲基
DNA测序技术自动测序法介绍
自动测序法基因分析仪(即DNA测序仪),采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司ZL的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法),因此通过单引物PCR测序反应,生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DNA混合物,使得四种荧光染料的测序PCR产物
Nature:基于DNA甲基化的早期癌症检测
加拿大玛格丽特公主癌症中心和多伦多大学的研究人员近日开发出一种新方法,能够通过甲基化DNA实现癌症的早期检测。尽管这些结果还有待更多独立样本的验证,但他们认为这有望催生非侵入性的新型癌症筛查检测。 研究人员在上周的《Nature》杂志上介绍了一种基于免疫沉淀的实验方案,能够分析少量循环游离DN
Nature:基于DNA甲基化的早期癌症检测
加拿大玛格丽特公主癌症中心和多伦多大学的研究人员近日开发出一种新方法,能够通过甲基化DNA实现癌症的早期检测。尽管这些结果还有待更多独立样本的验证,但他们认为这有望催生非侵入性的新型癌症筛查检测。 研究人员在上周的《Nature》杂志上介绍了一种基于免疫沉淀的实验方案,能够分析少量循环游离DN
在单细胞水平预测DNA甲基化的新方法
如今,DNA甲基化的检测已经达到了单细胞的分辨率。不过,目前的方法还不能完整覆盖CpG,总是留下一些缺口。英国的一个团队最近开发出一种计算方法,可准确填补这些缺口。这项结果发表在《Genome Biology》杂志上。 研究人员使用所谓的深度神经网络策略来开发他们的方法,并命名为DeepCp
35岁助理教授追逐表观遗传学的奥秘
当黄云(Yun “Nancy” Huang,音译)还是一名大学生时,她一直希望成为一名医生,但在浙江大学医学院获得学士学位后,她的想法改变了,“我意识到,要治愈疾病,我还需要了解更多疾病的基础生物学知识。” 2005年,黄云来到了美国,在乔治亚州立大学的Jenny Yang实验室开始攻读生物化
DNA-甲基化测序常用方法
随着高通量测序技术(NGS)技术的发展,使我们能够从全基因组水平来分析 5’甲基胞嘧啶及组蛋白修饰等事件,由此能够发现很多传统的基因组学研究所不能发现的东西,这就是所谓的“DNA 甲基化测序”!DNA 甲基化测序方法按原理可以分成三大类: 1、重亚硫酸盐测序; 2、基于限制性内切酶的测序; 3、靶向
高分辨率熔解曲线法检测甲基化的相关介绍
在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物,这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化,用亚硫酸氢盐处理后,未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,样品中的GC含量发生改变,从而导致熔解温度的变化。
用循环测序法检测突变实验
实验材料血液或者其他来自待测个体的 DNA 材料试剂、试剂盒乙酸钠异丙醇TE 缓冲液分子质量标记物寡聚核苷酸测序引物多聚核苷酸激酶反应缓冲液多聚核苷酸激酶双脱氧核苷酸Taq DNA 聚合酶10 X 循环测序反应缓冲液矿物油终止液仪器、耗材热循环仪和管子实验步骤展开
检测癌症相关DNA修饰新测序方法
牛津Ludwig癌症研究所助理成员Chunxiao Song和Benjamin Schuster-Boeckler领导的这项研究表明,他们开发的新方法,TET辅助吡啶硼烷测序(TET-assisted pyridine borane sequencing,TAPS)是一种比亚硫酸氢盐测序(bis
焦磷酸测序(Pyrosequencing)实验技术及方法
先进的基于焦磷酸测序(Pyrosequencing)的PSQ96 MA技术平台,能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测服务。另外,还提供短片段的测序服务(50-100 bp),适用于细菌和病毒分型等研究领域。基于Pyrosequencing的SNP分析具有快速、高通量的特点,完
焦磷酸测序(Pyrosequencing)实验方法及技术
先进的基于焦磷酸测序(Pyrosequencing)的PSQ96 MA技术平台,能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测服务。另外,还提供短片段的测序服务(50-100 bp),适用于细菌和病毒分型等研究领域。 基于Pyrosequencing的SNP分析具有快速、高通量的特点,
北京大学Nature发布重要甲基化景观图
来自北京大学、教育部辅助生殖重点实验室、哈佛大学等机构的研究人员,绘制出了人类早期胚胎全基因组水平的DNA甲基化景观图谱,提出了有别于以往小鼠研究结果的一些新见解。这些研究结果发表在7月23日的《自然》(Nature)杂志上。 北京大学第三医院的乔杰(Jie Qiao)教授以及汤富酬(Fuch
关于亚计量沉淀法的介绍
取甲和乙两份等量放射性同位素溶液,各含待测元素。克,其放射性为Ao,放射性比度为w。将乙溶液加到含x克待测元素的试液中,进行同位素稀释后,其放射性比度为s1。如果从甲和乙(已与试液混合)溶液中分另l]等量沉淀出待测元素w0克,分别测得其放射性为Aa和Ab。 这样的方法就避免了用一般化学法定量,
磁珠法DNA甲基化方案—高效特异的DNA亚硫酸盐转化与纯化
DNA甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式。近年来,大量研究表明DNA甲基化修饰对于维持正常细胞功能、传递基因组遗传印记、胚胎发育以及人类肿瘤发生,起着至关重要的作用,由此甲基化研究成为表观遗传学,乃至生命科学研究的热点领域。那么如何检测单个基因或者全基因组的甲基化水平或者甲基化位点呢?当
一次RNA甲基化测序的多项成果云序RNA甲基化测序技术...2
(二)云序客户m6A RNA甲基化修饰表达谱,一次测序两篇文章疾病:胃癌样品:胃癌组织vs癌旁组织(6 vs 6)研究方法:m6A-MeRIP-Seq,RNA-seq4. m6A修饰对其修饰基因在胃癌中的异常表达及预后的潜在影响发表杂志:Frontiers in Genetics影响因子:3.258
一次RNA甲基化测序的多项成果云序RNA甲基化测序技术...1
一次RNA甲基化测序的多项成果-云序RNA甲基化测序技术大公开文章导读RNA修饰是表观遗传学中调控转录后基因表达的关键过程,目前对m6A RNA修饰的研究已进行的如火如荼,而除了m6A以外仍有多种RNA修饰类型参与调控转录后的基因表达,其中包括m1A、m5C、m7G、2’-O-甲基化修饰以及ac
测序技术再现新进展,已开发基于单分子测序平台的单细胞多组学测序技术
单细胞多组学测序技术是指对一个单细胞同时检测多个组学层面(例如基因组、表观基因组和转录组)的测序技术。这类技术可以更系统、全面地探索细胞异质性以及同一个细胞内的不同组学层面之间的互动关系,有利于更深入地解析复杂的生理、病理过程中细胞类型特异性的分子调控机制1, 2。2019年,Nature Me
Nature-Methods发表论文报道5醛基胞嘧啶测序新技术
2015年9月7日,北京大学生命科学学院伊成器研究组在《Nature Methods》杂志在线发表题为“Bisulfite-free, base-resolution analysis of 5-formylcytosine at the genome scale”的研究论文(DOI: 10.1
Science大型低成本,外显子测序成果
来自华盛顿大学医学院,霍德华休斯医学院等处的研究人员利用一种新型技术,完成了多达2446个样品外显子测序分析,找到了自闭症谱系障碍(ASD,Autism Spectrum Disorder)的多个频发突变,不仅为治疗ASD疾病提供了新思路,而且也提出了一种低成本,多基因测序新方法。相关成
Nature子刊:改进几十年前的新方法-破译DNA表观遗传密码
生物通报道:宾州大学Perelman医学院的研究人员研发出了一种新方法,可以对附着在DNA表面的化学基团进行测序,从而为更好地检测血液中的癌症和其他疾病铺平道路。这些化学基团能标记基因组中四个DNA“字母”中的一个,在表达或沉默的基因中存在差异。 这一研究成果公布在Nature Biotech
荧光法DNA测序的方法介绍
中文名称荧光法DNA测序英文名称fluorescencebased DNA sequencing定 义通过四种不同荧光试剂分别标记四种双脱氧核苷酸进行DNA测序的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
DNA测序EDF胶片显影法的介绍
使用EDF胶片可增强测序条带的对比度,如果测序胶上条带很淡,我们建议把数据转移至EDF胶片,银染胶在其影像转移至EDF胶片之后可增强条带可读性。 1. 在暗室内,将染色过的粘于玻璃板的凝胶(胶面向上)置于荧光灯箱上。如有合适的漫射板,亦可用白灯箱,为确保曝光时间,用一小条EDF胶片曝光不同时间
lncRNA启动子DNA甲基化/羟甲基化测序分析
技术优势:● 专注非编码RNA领域,完善的lncRNA启动子分析流程● 可与lncRNA表达谱芯片联合应用,实现平台间无缝对接● 可视化数据展示,提供paper级结果图表● 优化的IP实验方法,可信赖的检测平台及数据结果 介绍: 人类基因组中仅有约2%的DNA序列最
Nat-Med:恶性胶质瘤表观遗传学分析取得突破
胶质瘤的特点之一就是广泛的遗传学和转录学异质性,但是迄今为止科学家们对表观遗传学在脑胶质瘤疾病进展过程中发挥的作用知之甚少。为此,来自澳大利亚科学院等机构的研究人员使用通过国家患者登记表选择的高度注释的临床队列的数据对原发和对应复发脑胶质瘤的全基因组DNA甲基化图谱进行了描述,相关研究成果与近日