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等位基因特异性PCR的工作原理

由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的,所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补,则引物能从不间断延伸,PCR可以正常进行,得到特定长度扩增带。反之,则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端,当用某一含突变序列的引物进行PCR时,如果得到特异扩增带,表明被测基因含有该种突变。没有特异扩增带出现,则表示没有这种突变。ASA也可以将多个引物在一个反应体系中同时进行(多重ASA),其产物通过CE检测,就可以完成多个点突变的检测。......阅读全文

等位基因特异性PCR的工作原理

由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的,所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补,则引物能从不间断延伸,PCR可以正常进行,得到特定长度扩增带。反之,则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端,当用某一含突

等位基因特异性PCR的原理

等位基因特异性PCR( allele specific PCR,AS-PCR ),是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应,进而达到模板区分(等位基因区分)的目的。

等位基因特异性PCR技术的原理

由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的,所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补,则引物能从不间断延伸,PCR可以正常进行,得到特定长度扩增带。反之,则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端,当用某一含突

等位基因特异性PCR的功能

等位基因特异性PCR( allele specific PCR,AS-PCR ),是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应,进而达到模板区分(等位基因区分)的目的。

等位基因特异性PCR的应用

由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的,所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补,则引物能从不间断延伸,PCR可以正常进行,得到特定长度扩增带。反之,则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端,当用某一含突

等位基因特异性PCR的技术特点

等位基因特异性PCR( allele specific PCR,AS-PCR ),是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应,进而达到模板区分(等位基因区分)的目的。

等位基因特异性PCR近期改进方法

1. 在3‘末端附近引入额外错配2. 腺苷三磷酸双磷酸酶介导的等位基因特异PCR法(apyrase-mediated allelespecific extension, AMASE)3. 焦磷酸解激活的聚合反应法(Pyrophosphorolysis-activated polymerization

等位基因特异性PCR技术的研究发展

ASPCR的发展,主要是围绕提高3’末端碱基错配分辨率来进行的。为了提高ASPCR对末端碱基错配的分辨力,人们尝试了许多方法。比如:改换另一条链进行分析以规避这些错配延伸率高的碱基组合;把控制PCR反应的关键成分稀释到接近极限的浓度;在检测用引物的3'末端附近人为引入新的错配;截短Taq D

等位基因特异性PCR早期的改进方法

Bottema 等(1993)提出两个解决方案:一是设计引物时,如果引物3'末端可能与样品模板形成延伸率高的碱基错配,那么可以考虑以其互补链作为模板,从而避开这些高延伸率的错配。二是把控制PCR反应的关键成分稀释到接近极限的浓度。由于错配延伸效率毕竟比正配延伸要差,在扩增资源极低的情况下,错

多重等位基因特异性PCR芯片在听力筛查中的应用

       1. Abstract  We demonstrate a new method, using a universal array approach termed multiplex allele-specific PCR-based universal array (ASPUA),

等位基因特异性扩增法简介

  等位基因特异性扩增法(allele -specific amplificarion,ASA) 是基于PCR技术的一种单核苷酸突变检测法,是分析已知碱基替代或微小片段缺失和插入型突变的常规技术。在PCR 的引物设计中,根据已知突变位点性质在引物3 ' 端或中间设计一错配碱基,使之仅能与突变

pcr仪的工作原理

  利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。

PCR仪的工作原理

PCR 扩增的步骤首先将模板 DNA 置于 92℃ -96℃,进行变性(denaturation)处理,使 dsDNA 在高温下解链成为 ssDNA ,且热变性不改变其化学性质;然后退火(annealing) ,将温度降至 37℃ -72℃,使引物与模板的互补区相结合;zui后,在 72℃ 条件下,

PCR仪的工作原理

PCR 扩增的步骤首先将模板 DNA 置于 92℃ -96℃,进行变性(denaturation)处理,使 dsDNA 在高温下解链成为 ssDNA ,且热变性不改变其化学性质;然后退火(annealing) ,将温度降至 37℃ -72℃,使引物与模板的互补区相结合;zui后,在 72℃ 条件下,

PCR仪工作原理

利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。

PCR仪工作原理

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,简称PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断

PCR仪工作原理

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,简称PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断

PCR仪工作原理

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,简称PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断

PCR仪工作原理

  聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,简称PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和

PCR仪工作原理

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,简称PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断

PCR扩增仪工作原理

  PCR技术的原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成 [2] 。  1. 模板DNA的变性  模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下

PCR基因扩增仪的工作原理

  基因扩增仪性能,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。

PCR基因扩增仪的工作原理

基因扩增仪性能卓越,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。基

PCR基因扩增仪的工作原理

  基因扩增仪性能,能满足不同工作环境的多种需求。可用作以聚合酶链式反应为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。基因扩增仪广泛应用于分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域。

增加PCR特异性

引物设计  细心地进行引物设计是PCR中zui重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点:  1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序

增加PCR特异性

增加PCR特异性(一)引物设计细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点:1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性

实时荧光定量PCR工作原理

  实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)   基本原理    qPCR 技术是在反应体系中加入荧光报告基团和荧光淬灭基团,随着 PCR 反应的进行,扩增产物不断积累,导致荧光信号不断积累, 从而利用荧光信号的变化实时监测整个 PCR 进程。

荧光定量PCR仪工作原理

1 系统的组成和工作原理本系统由基本PCR部分、荧光检测部分和上位计算机部分等组成。基本PCR部分是该仪器的基础,包括加热丝、温度采集与处理等部分,它必须具有精确控温、快速升降温、温度场均一等PCR仪的基本要求,保证PCR过程的顺利完成。荧光检测部分包括激励光源、光电倍增管、信号采集与处理等部分。上

等位基因特异性寡核苷酸印迹的功能作用

一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合,故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交;将ASO探针连接dT多聚尾巴,结合于固相支持物上,受检基因在杂交液中,生物素标记的DNA可结合辣根过氧化物酶,借助抗生物素系统使无色基质变成有色沉淀,从而进行测

等位基因特异性寡核苷酸印迹的方法介绍

中文名称等位基因特异性寡核苷酸印迹英文名称allele specific oligonucleotide blot定  义一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合,故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交;将ASO探针连接dT多聚尾巴,结合于固