等位基因特异性PCR早期的改进方法
Bottema 等（1993）提出两个解决方案：一是设计引物时，如果引物3'末端可能与样品模板形成延伸率高的碱基错配，那么可以考虑以其互补链作为模板，从而避开这些高延伸率的错配。二是把控制PCR反应的关键成分稀释到接近极限的浓度。由于错配延伸效率毕竟比正配延伸要差，在扩增资源极低的情况下，错配延伸即使发生，也达不到可被显示出来的水平，因此避免了假阳性结果。但是，这两种方案都需要大量实验来对实验条件进行摸索优化，因此目前已较少被采用。......阅读全文
等位基因特异性PCR早期的改进方法
Bottema 等（1993）提出两个解决方案：一是设计引物时，如果引物3'末端可能与样品模板形成延伸率高的碱基错配，那么可以考虑以其互补链作为模板，从而避开这些高延伸率的错配。二是把控制PCR反应的关键成分稀释到接近极限的浓度。由于错配延伸效率毕竟比正配延伸要差，在扩增资源极低的情况下，错
等位基因特异性PCR近期改进方法
1. 在3‘末端附近引入额外错配2. 腺苷三磷酸双磷酸酶介导的等位基因特异PCR法(apyrase-mediated allelespecific extension, AMASE)3. 焦磷酸解激活的聚合反应法(Pyrophosphorolysis-activated polymerization
等位基因特异性PCR的应用
由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的，所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补，则引物能从不间断延伸，PCR可以正常进行，得到特定长度扩增带。反之，则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端，当用某一含突
等位基因特异性PCR的功能
等位基因特异性PCR（ allele specific PCR，AS-PCR ），是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应，进而达到模板区分（等位基因区分）的目的。
等位基因特异性PCR的原理
等位基因特异性PCR（ allele specific PCR，AS-PCR ），是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应，进而达到模板区分（等位基因区分）的目的。
等位基因特异性PCR技术的原理
由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的，所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补，则引物能从不间断延伸，PCR可以正常进行，得到特定长度扩增带。反之，则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端，当用某一含突
等位基因特异性PCR的技术特点
等位基因特异性PCR（ allele specific PCR，AS-PCR ），是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应，进而达到模板区分（等位基因区分）的目的。
等位基因特异性PCR的工作原理
由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的，所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补，则引物能从不间断延伸，PCR可以正常进行，得到特定长度扩增带。反之，则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端，当用某一含突
等位基因特异性PCR技术的研究发展
ASPCR的发展，主要是围绕提高3’末端碱基错配分辨率来进行的。为了提高ASPCR对末端碱基错配的分辨力，人们尝试了许多方法。比如：改换另一条链进行分析以规避这些错配延伸率高的碱基组合；把控制PCR反应的关键成分稀释到接近极限的浓度；在检测用引物的3'末端附近人为引入新的错配；截短Taq D
多重等位基因特异性PCR芯片在听力筛查中的应用
1. Abstract We demonstrate a new method, using a universal array approach termed multiplex allele-specific PCR-based universal array (ASPUA),
提高PCR特异性的方法
热启动PCR是除了好的引物设计之外，提高PCR特异性最重要的方法之一。尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚合酶在室温仍然有活性。因此，在进行PCR反应配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。这些非特异性产物一旦形成，就会被有效扩增。在用于引物设计的
等位基因特异性寡核苷酸印迹的方法介绍
中文名称等位基因特异性寡核苷酸印迹英文名称allele specific oligonucleotide blot定 义一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固
等位基因特异性寡核苷酸印迹的方法特点
中文名称等位基因特异性寡核苷酸印迹英文名称allele specific oligonucleotide blot定 义一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固
等位基因特异性扩增法简介
等位基因特异性扩增法（allele -specific amplificarion,ASA) 是基于PCR技术的一种单核苷酸突变检测法，是分析已知碱基替代或微小片段缺失和插入型突变的常规技术。在PCR 的引物设计中，根据已知突变位点性质在引物3 ' 端或中间设计一错配碱基，使之仅能与突变
等位基因特异性寡核苷酸印迹的定义和方法
中文名称等位基因特异性寡核苷酸印迹英文名称allele specific oligonucleotide blot定 义一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固
增加PCR特异性的方法有哪些
预测一下扩增产物，在NCBI做一个primer blast如果需要设计定量PCR引物，可以在“引物库”中直接搜索，不用查找序列，设计引物，选择参数，确定引物等，输入基因名，直接提供引物序列，并进行非特异性检测
基于PCR评估sgRNA特异性的方法
CRISPR/Cas9已经成为一种通用的基因组工程工具，依赖于一个单导向RNA（sgRNA）和Cas9酶进行基因组编辑。研究人员可以用简单、快速和经济的方法来产生sgRNAs，因此能够在培养细胞、小鼠、斑马鱼和其他模型系统中进行靶向诱变。为了靶向效率，预先筛选sgRNAs，对于成功诱变和减少动物
pcr仪的改进与完善
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段，其缺点是： ①Klenow酶不耐高温， 90℃会变性失活，每次循环都要重新加。 ②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其PCR产物特异性较差，合成的DNA片段不均一。此种以Kle
PCR仪改进与完善
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段，其缺点是：①Klenow酶不耐高温， 90℃会变性失活，每次循环都要重新加。②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其PCR产物特异性较差，合成的DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化
提高RTPCR特异性的方法总结
第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法，各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。 随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5'末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位
增加PCR特异性
增加PCR特异性（一）引物设计细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点：1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性
增加PCR特异性
引物设计 细心地进行引物设计是PCR中zui重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点： 1.典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序
等位基因特异性寡核苷酸印迹的功能作用
一种测定基因突变的方法。即应用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)仅与完全互补的序列结合，故1个碱基错配即足以阻止ASO探针与目的基因片段杂交；将ASO探针连接dT多聚尾巴，结合于固相支持物上，受检基因在杂交液中，生物素标记的DNA可结合辣根过氧化物酶，借助抗生物素系统使无色基质变成有色沉淀，从而进行测
PCR的特异性指什么
由于碱基互补配对原则导致的PCR在进行反应时所合成的DNA永远是特异性的（和起始DNA相同）
影响PCR特异性的因素
①退火步骤的严格性：提高退火温度可以减少不匹配的杂交，从而提高特异性。 ②减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。 ③引物二聚体是最常见的副产品，降低引物及酶的浓度也可以减少错误引发，尤其是引物的二聚化。 ④改变MgCl2(有时KCl)浓度可以改进特异性，这可能是提高反应严格性或
如何提高PCR特异性
一天P几百管的人可能不用担心条带有没有，而对于刚入门分子生物学的人来说，PCR能看到条带，能看到特异性好的一条明亮的带就是入门zui大的欣慰。师姐会告诉你，引物设计很重要，不能有二聚体和发夹结构；师兄也会和你说退火温度很重要。提高PCR特异性可谓是仁者见仁，智者见智。以下搜集了网友们的讨论，精华汇
用于PCR的模板DNA制备实验——改进的石蜡切片－DNA－提取方法
实验步骤1. 5 μm 厚的石蜡切片 5 至 10 张贴在干净的载玻片上，常规烘片，脱蜡，水化，蒸馏水清洗，无菌蒸馏水浸泡，取出晾至半干。2. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以
如何提高PCR反应的特异性
首先是引物的特异性要高；引物特异的前提下尽可能提高退火温度，若是实在找不到特异性好的引物也可以尝试下touch dowm pcr；另外引物的3'端第一个碱基最好不要是A。
甲基化特异性的PCR
用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化。
如何提高PCR反应的特异性
v首先是引物的特异性要高；引物特异的前提下尽可能提高退火温度，若是实在找不到特异性好的引物也可以尝试下touch dowm pcr；另外引物的3'端第一个碱基最好不要是A。