rna浓度太低能反转录么
要看你的rna浓度有多低,一般20ng/ul。rna浓度太低可能反转不出来或者反转不是目的产物,浓度太低建议不做。......阅读全文
植物RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 TELiCl无水乙醇乙酸钠氯仿仪器、耗材 匀浆器离心管离心机水浴锅实验步骤 1. 研钵和研棒先用液氮冷却,称出15 g 冻结植物组织于研钵中(加液氮保持冻结)。2. 用研棒磨成粉末,立即转移到一个盛有150 ml,研磨缓冲液和50 ml TLE缓冲液平衡酚的500
反义RNA的制备实验
实验材料 限制性内切核酸酶酶水解 模板 DNA 大肠杆菌 DNA 多聚酶 胰 DNaseⅠ 试剂、试剂盒
细胞化学词汇互补RNA
中文名称:互补RNA英文名称:complementary RNA定 义:能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
核小RNA的用途
核小RNA是真核生物转录后加工过程中RNA剪接体(spliceosome)的主要成分,参与mRNA前体的加工过程。
如何防止RNA酶污染
在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解,而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果,所
Acid-Phenol-Yeast-RNA-Prep
This is the preferred method for yeast RNA preparationuse Gloves and RNAse free solutions throughout.1. Use a YPD overnight culture to innoculate fres
RNA构象的结构特点
中文名称RNA构象英文名称RNA conformation定 义RNA分子的空间结构,构象改变并不导致共价键的断裂和生成。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
RNA酶活性的控制
为了获得高质量的真核细胞mRNA, 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法,最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时,避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注
细胞总RNA的提取
提取细胞RNA的步骤:1) 六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol,冰上放置5min,枪头吹打。2) 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中,加入氯仿0.2ml/管,用力振摇15s。15-30℃下孵育2-3min,离心(4℃,12,000g,15min)。3) 离心后液体分为三层(上层-无色
细胞化学词汇RNA定位
中文名称:RNA定位英文名称:RNA localization定 义:RNA特异定位在细胞不同区域的过程。尤其是信使核糖核酸(mRNA)的定位对生长和发育是重要的。细胞质中RNA定位起始于细胞核,在核中被特异RNA结合蛋白识别,生成核糖核蛋白复合体,然后输出到细胞质。应用学科:生物化学与分子生物学
细胞化学词汇RNA复制
中文名称:RNA复制外文名称:RNA replication定 义:RNA复制是以RNA为模板合成RNA的过程,是除了逆转录病毒以外的其他RNA病毒的复制方式。有些生物,像某些病毒的遗传信息贮存在RNA分子中,当它们进入宿主细胞后,靠复制而传代,当它们以RNA模板时,在RNA复制酶作用下
RNA干扰技术的特点
1.高效性:Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的,只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大,只有当浓度降低到0.05 nmol/L时,沉默的效果才消失。Holen等也证实
RNA足迹法的定义
中文名称RNA足迹法英文名称RNA footprinting定 义分析RNA链与其他分子特异结合部位的方法。将标记的RNA与待研究的物质(如某种蛋白质或药物)进行结合反应后,用RNA酶清除未被结合的部分,再用电泳显示RNA链上结合位置的多寡和长度。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二
细胞化学词汇RNA重组
中文名称:RNA重组英文名称:RNA recombination定 义:RNA分子内或分子间发生的共价重新组合。应用学科:遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)
小麦总RNA的提取
实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。
细胞化学词汇卫星RNA
中文名称:卫星RNA外文名称:satellite RNA别 名:卫星核酸类 别:植物病毒RNA常见种类:黄瓜花叶病毒定 义:卫星RNA是一类小的非编码RNA,基因组大小为200-1500nt,通常不编码蛋白,是一类存在于某专一病毒粒即辅助病毒的衣壳内并完全依赖于辅
如何改善RNA提取质量
1.在收获组织及细胞死亡之后,应立即灭活内源的RNA酶,以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活:1)用含离液(如胍盐)的细胞裂解液收获样品,并立即匀浆。2)用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是:组织块必须保证足够小,在浸入液氮的瞬间就能冻结,以确保瞬间令RNA酶失活3)立即将样品置
Making-RNA-probes-for-in-situ-hybridization
Make DNA templates via PCRDay 1It's preferable to start with constructs that contain RNA polymerase start sites (T3, T7, or SP6) which allow use o
poly(A)+-RNA的制备实验
利用cND A微阵列技术可用于:(1)并行分析检测成千上万个基因的表达情况;(2)在新基因的发现、基因组功能的研究、疾病的预测和诊断、药物靶标的确定和药物毒性预测等多方面发挥着重要的作用。实验方法原理大多数的信使RNA(mRNA)都带有poly(A)尾,而结构RNA没有。使用本工作方案,可以将带po
信使RNA的功能特点
信使RNA(mRNA)最早发现于1960年,在蛋白质合成过程中负责传递遗传信息、直接指导蛋白质合成,具有以下特点。 1.含量低,占细胞总RNA的1%~5%。 2.种类多,可达105种。不同基因表达不同的mRNA。3.寿命短,不同mRNA指导合成不同的蛋白质,完成使命后即被降解。细菌mRNA的平均半衰
RNA荧光原位杂交
原位杂交:在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DAN或 RNA
小麦总RNA的提取
实验概要从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备。实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄
核糖体RNA特点
(1)含量高,rRNA是细胞内含量最高的RNA,占细胞总RNA的80%~85%。 (2)寿命长,rRNA更新慢,寿命长。 (3)种类少,原核生物有5S、16S、23s三种rRNA,约占核糖体质量的66%(其中5S,23SrRNA占核糖体大亚基的70%,16S rRNA占核糖体小亚基的60%);真核生
细胞化学词汇RNA靶向
中文名称:RNA靶向英文名称:RNA targeting定 义:(1)针对RNA分子设计的一种定向作用技术。包括一些小分子化合物(如抗生素)、反义核酸、反式作用核酶、适配体、干扰小RNA等的应用。(2)由于RNA分子本身具有较大的柔性,能专一地与RNA、DNA和蛋白质相互作用,而成为一种特异的靶向
Extraction-of-RNA-from-Fibrous-tissues
实验概要E.Z.N.A.™ MicroElute® Total RNA Kit provides a rapid and easy method for the isolation of up to 50 ug of total RNA from small amount of cultured
细胞化学词汇反义RNA
中文名称:反义RNA外文名称:antisense RNA概 念:与mRNA互补的RNA分子作 用:抑制mRNA的翻译分 类:三类反义RNA是指与mRNA互补后,能抑制与疾病发生直接相关基因的表达的RNA。它封闭基因表达,具有特异性强、操作简单的特点,可用来治疗由基因突变或过度表达导
细胞化学词汇RNA沉默
中文名称:基因沉默外文名称:RNA silencing定 义:基因沉默是指在真核生物(植物、动物、真菌)中保守的由双链RNA诱导的鉴定和破坏其细胞质中异常变异或过表达的RNA的一种机制。
RNA探针的应用介绍
这类RNA探针主要用于研究目的,而不是用于检测。例如,在筛选逆转录病毒人类免疫缺陷病毒(HIV)的基因组DNA克隆时,因无DNA探针可利用,就利用HIV的全套标记mRNA作为探针,成功地筛选到多株HIV基因组DNA克隆。又如进行中的转录分析(nuclear run on transcrip-tion
培养细胞中RNA检测
实验概要掌握培养细胞中RNA的检测方法。实验步骤1.制胶(1%): 琼脂糖 2.5g 10×Mops缓冲液 25.0ml H2O 192.0ml2.在微波炉中加热煮沸使胶完全溶于水并灭菌。3.取出胶冷却到60℃,于通风柜中加45ml甲醛,混匀。4.加20μl溴化乙锭,混匀。5.令胶液再
RNA-印迹法的概念
中文名称RNA 印迹法英文名称Northern blotting定 义将电泳分离的RNA从凝胶中转移到纤维素膜或尼龙膜上,用32P标记的RNA或DNA杂交进行检测的方法。主要用于检测目的基因的转录水平。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)