rna浓度太低能反转录么
要看你的rna浓度有多低,一般20ng/ul。rna浓度太低可能反转不出来或者反转不是目的产物,浓度太低建议不做。......阅读全文
RNA病毒类型介绍
病毒的核酸包括双链DNA(dsDNA)、单链DNA(ssDNA)、双链RNA(dsRNA)、正单链RNA(+ssRNA)、负单链RNA(-ssRNA)五种不同类型。病毒颗粒中的组成成分有简有繁,有的用颗粒自带专门用于病毒复制的核酸酶,有的则无。有些RNA病毒的RNA并不仅有一个分子,如流感病毒有8条
概述反义RNA技术
随着分子生物学和遗传工程的发展,基因治疗应运而生,反义技术是其中一种,它的基础是根据核酸杂交原理设计针对特定靶序列的反义核酸,从而抑制特定基因的表达,包括反义RNA、反义DNA及核酶(Ribozyme),它们通过人工合成和生物合成获得。 反义DNA是指一段能与特定的DNA或RNA以碱基互补配对
反义RNA稳定方法
[1]反义RNA3'端带有茎环结构或类似ρ-不依赖性终止子结构时,可以稳定RNA分子;[2]Gorski等还发现在T4噬菌体的基因32mRNA的5'端上游的茎环结构及其附近的序列亦可稳定RNA分子。所以在设计反义RNA基因时,最好将产生3'及5'端这种二级结构的序列克
提取植物rna方法
提到RNA的提取,是不是充满了心酸和无奈呀,抽提过程中已十分小心谨慎了,但是有时候还是会出现RNA污染、降解的悲剧。别怕,今天小编给您介绍一种新的RNA提取方法,比以前的方法更快、更有效和更可靠,让您从此不用再担心的RNA的抽提了。 众所周知:获得纯净、完整的RNA样品,是对一种植物的活性基因
RNA抽提经验
对大部分实验人员来说,RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上,现有的 RNA 抽提方法/试剂,如果用于从培养细胞中抽提 RNA,比抽提基因组 DNA 更方便,成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提,总会碰到问题呢? 组织 RNA 抽提失败的两大现象是: RNA 降
TRIzol-RNA提取方法
实验方法原理 Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构
全血RNA提取
摘要: RNA提取应该说已经成为了一种常见的分子生物学操作步骤了,但是不少科研人员仍然烦恼着如何寻找一种最好的方法,或者找到一种适合于特殊用途方法。比如说传统的血液标本表达谱芯片实验需要先把有核细胞从全血中分离出来,加白细胞分离液、离心等步骤,比较繁琐,如果能进行全血的提取,那就再好不过。RNA提取
RNA沉默的作用
植物可利用 PTGS 和 TGS 来抵抗病毒侵染, 病毒侵染植物后会产生大量病毒来源的小 RNA (virus-derived small interfering RNAs, vsiRNA), 介导对病毒 RNA 的降解或抑制病毒基因的转录; 而在与植物长期共进化过程中, 病毒编码一个或多个RNA沉
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法,包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法,及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因
转运RNA的定义
大多数tRNA由七十几至九十几个核苷酸折叠形成的三叶草形短链组成,相对分子质量为25000〜30000,沉降常数约为4S。旧称联接RNA、可溶性RNA等。主要作用是携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质,即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序。tRNA
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后,即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于:成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低(低于70%),则应采用腺病毒或慢病毒载体,利用病毒载体的高感染率、高表达特性,更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
双RNA病毒介绍
本科病毒形态与呼肠孤病毒相似,过去归于呼肠孤病毒科,亦曾作为分类地位 未定的病毒。1973年,当人们认识到该科成员中的传染性胰坏死病毒和传染性 法氏囊病病毒在形态学上很相似,尤其是它们的基因组都含有双股双节段RNA后 ,建议设立一个新科。1984年正式命名为双RNA病毒科。在国际病毒分类委员会(IC
环形RNA与线性RNA定量比较分析新系统CLEAR发布
1月15日,国际学术期刊Genomics,Proteomics & Bioinformatics在线发表了中国科学院-德国马普计算生物学伙伴研究所杨力研究组关于环形RNA研究的最新进展“CIRCexplorer3: A CLEAR Pipeline for Direct Comparison o
动物RNA提取实验——SV总RNA试剂盒提取法
动物RNA提取可用于:(1)研究生物体基因调控机制;(2)分子克隆和基因表达以获得该性状基因;(3)可以对特定的基因表达进行定量的检测,从分子水平精确的了解细胞生命活动的规律。实验方法原理SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养
3.6.2-用T4-RNA-连接酶连接-RNA-分子
T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA,尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外,T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。实验材料T4RNA连接酶供体RNA受体
植物RNA的分离(总RNA的分离和mRNA的分离)
1. 总RNA的分离总RNA分离的方法很多,常采用的是异硫氰酸胍和b-巯基乙醇这两种RNase 抑制剂来抑制RNase的活性,同时,异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠(sarcosyl)共同作用可以破坏核蛋白复合体,使RNA顺利地解脱出来溶进缓冲液。由于RNA在碱性条件下不稳定,因而在整个提取过程中体
带你认识RNA军团中“非正规军”——非编码RNA
人类的每一个细胞随时都像在进行着一场无止尽的战争,细胞核是司令部,细胞质是战场。六十年前,弗朗西斯·克里克(Francis Crick)的“中心法则”( DNA转录成RNA,再翻译成蛋白质)现在一直是细胞作战的绝对军规,军事机密(遗传信息)必须从司令DNA先到RNA军团,再到“武器弹药”蛋白质。司令
研究人员合成高性能荧光RNA实现活细胞RNA成像
2019年11月5日,华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室杨弋教授等在Nature Biotechnology(《自然—生物技术》)杂志上发表了封面学术论文,题为“Visualizing RNA dynamics in live cells with bright and stable fl
云序环状RNA研究策略在环状RNA研究的应用(二)
4.对年龄相关性白内障circRNA的分析显示,circZNF292可以通过海绵机制调节miR-23b-3p功能发表期刊:Aging-us影响因子:4.831发表时间:2020.9.10研究方法:全转录组测序、qRT-PCR、RIP、RNA pull down、双荧光素酶实验等云序提供文章链接:Pr
RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)3
A、细胞裂解a.单层细胞的裂解a)吸出培养液,以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞,重复1次,将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上,再将铝板置于冰盘上。b)直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液, 并使之遍布整个平板的
RNA分离与分析实验_用丙烯酰胺尿素凝胶纯化RNA
实验材料RNA试剂、试剂盒TBE 缓冲液丙烯酰铵溶液过硫酸铵水溶液RNA 染色液仪器、耗材玻璃板实验步骤1. 准备下列溶液:TBE 缓冲液:Tris 碱 54 g,硼酸 27.5 g,0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 20 ml,溶解并加水至 1000 ml。当发现贮存液有白色沉淀
通过记录RNA聚合酶观察早期RNA转录动力学
科学家们通过记录RNA聚合酶在何时何地通过与DNA序列结合启动转录,观察了早期RNA转录动力学。 生命的活动是通过蛋白质的制造而发生的,蛋白质赋予我们的细胞结构和功能。细胞蛋白质从DNA编码的基因指令中获得行进顺序,他们的序列首先被复制并在一个叫做转录的多步骤过程中被制造成RNA。 科罗拉多
云序环状RNA研究策略在环状RNA研究的应用(一)
环状RNA作为新发现的RNA分子,从诞生之日起就是光环加身,屡屡登上Science、Nature、Cell等高分期刊。近期发表的《2019研究前沿》中,“环状RNA作为癌症新的生物标志物”成为生物科学领域6个新兴前沿之一。2019年环状RNA共发表SCI论文885篇,较2018年增长约20%,其中大
HBV-RNA检测技术盘点——RTqPCR-VS-RNA捕获探针法
慢性乙型肝炎影响着世界上超过2.4亿人口[1],难以治愈已成为公认的事实。大多研究认为难以治愈与肝细胞核内HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)半衰期过长且难以清除有关。[2]因此,肝内检测cccDNA对评估抗病毒治疗疗效和治疗终点具有重要意义。但直接检测cccDNA十分困难,通常需要进行肝组织活
诱骗RNA结合蛋白不与癌细胞中的天然RNA分子结合
科学家也开始变得“狡猾”,开始用欺骗来对抗癌症。希伯莱大学的研究人员发明了一种诱饵,可以阻止癌症用于转移的RNA结合蛋白。 近年来,RNA结合蛋白在肿瘤生长中起着重要作用已经成为不争的事实。这些蛋白在所有细胞中都很活跃,尤其是在癌细胞中,它们与RNA分子结合,加速癌细胞的生长。不幸的是,目前还
RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)2
(一)实验程序如不谨慎操作,外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品:(1)玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA〈, /SPAN〉酶,可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染,使用前必须于180℃干烤8小时或更
m6A“RNA甲基化”研究汇总—非编码RNA篇
RNA甲基化是目前申请国自然项目热点,也是唯一能在短短3个月内发数十篇nature,cell级别高分文章领域,近期RNA甲基化研究引起了科研工作者的研究热潮。因mRNA参与蛋白编码,之前多数文章针对mRNA甲基化进行研究(详细见云序课堂之前往期回顾)。然而许多研究表明发生m6A甲基化的非编码RNA在
细胞化学词汇RNA构象
中文名称:RNA构象英文名称:RNA conformation定 义:RNA分子的空间结构,构象改变并不导致共价键的断裂和生成。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇RNA折叠
中文名称:RNA折叠英文名称:RNA folding定 义:新合成的或变性的RNA转变为特定的、成熟的三维结构构象的过程。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇RNA运输
中文名称:RNA运输英文名称:RNA trafficking定 义:将RNA引导到细胞的特定区域。细胞内的RNA运输对细胞的生理功能至关重要。核内RNA运输影响RNA的加工成熟和核输出;胞质RNA运输影响RNA的定位、运输和基因表达的水平。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二