胰蛋白酶消化细胞的时间为何要严格控制
原因：消化时间太短,消化就不充分,不能使细胞充分分散开来；消化时间太长,会导致细胞膜表面蛋白大量被分解,从而导致细胞死亡!......阅读全文
蛋白酶解的首选变性剂——RapiGest－SF（一）
在生物药肽图分析、蛋白质修饰分析、蛋白质组学研究等诸多工作中，蛋白质的变性与酶解是样品处理的必经之路。RapiGestTM SF正是在这个实验步骤中，用以辅助蛋白酶解的变性试剂[1,2,3]。RapiGest SF有以下优点：■ 综合水相、有机相溶液条件下，最高效的辅助酶解变性剂。■ 作用过程中，不
阻塞性肺气肿的病因是什么
阻塞性肺气肿病因极为复杂，简述如下： （一）吸烟：纸烟含有多种有害成分，如焦油、尼古丁和一氧化碳等。吸烟者粘液腺岩藻糖及神经氨酸含量增多，可抑制支气管粘膜纤毛活动，反射性引起支气管痉挛，减弱肺泡世噬细胞的作用。吸烟者并发肺气肿或慢支和死于呼吸衰竭或肺心病者远较不吸烟者为多。 （二）大气污
间充质干细胞的冻存
实验概要间充质干细胞的冻存主要试剂DPBS、0.05%胰蛋白酶胰蛋白酶、间充质干细胞培养液、冻存液主要设备培养皿、15 mL离心管、冻存管、程序降温盒实验步骤（1）37℃预热间充质干细胞培养液和0.05%胰蛋白酶，4℃预冷冻存液。（2）同间充质干细胞传代第（2）～（5）步。 （2）弃
组胺检查是什么
组胺这个物质它是存在于肥大细胞、肺、肝、还有胃黏膜组织之内的，检查组胺是有助于确定过敏反应、肥大细胞增多症，还有肥大细胞活化反应等。与之相关的项目包括类胰蛋白酶，标本的要求是静脉采血或者是留取24小时的尿液都可以，然后要避免光照。 临床应用主要是确诊过敏性的疾病。组胺或者是类胰蛋白酶急剧升高，
亲和层析纯化胰酶
一、实验目的与原理生物大分子化合物的重要特征之一是具有与某些相对应的分子通过次级键或共价键专一结合的能力即亲和力。例如酶与抑制剂之间，抗原与抗体之间，结合的双方不仅是专一的，而且结合以后可以在不丧失生物活性的基础上用物理或化学的方法进行解离。根据这一特性，如果把具有亲和力的一对分子的某一方连接于水不
概述胰液的性质作用
胰液是无色无味的碱性液体，pH为7.8～8.4，渗透压与血浆相等，成人每日分泌量为1～2 L。胰液的成分除了水外还包括无机物，如钠离子、氢离子、碳酸氢根离子等；有机物主要是各种消化酶 [1] 。 1．碳酸氢盐 由胰腺小导管上皮细胞分泌。细胞内含有丰富的碳酸酐酶，可催化C02和H20结合形成碳酸
细胞分离技术是细胞培养的基本方法
从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋白酶 (Tryp
关于胰液的性质作用介绍
胰液是无色无味的碱性液体，pH为7.8～8.4，渗透压与血浆相等，成人每日分泌量为1～2 L。胰液的成分除了水外还包括无机物，如钠离子、氢离子、碳酸氢根离子等；有机物主要是各种消化酶 [1] 。 1．碳酸氢盐 由胰腺小导管上皮细胞分泌。细胞内含有丰富的碳酸酐酶，可催化C02和H20结合形成碳酸
胰液的性质作用
胰液是无色无味的碱性液体，pH为7.8～8.4，渗透压与血浆相等，成人每日分泌量为1～2 L。胰液的成分除了水外还包括无机物，如钠离子、氢离子、碳酸氢根离子等；有机物主要是各种消化酶 [1] 。 1．碳酸氢盐 由胰腺小导管上皮细胞分泌。细胞内含有丰富的碳酸酐酶，可催化C02和H20结合形成碳酸
关于小肠炎的病因介绍
致病菌 本病的病因尚未完全阐明，现认为本病的发病与感染产生B毒素的Welchii杆菌(C型产气荚膜杆菌)有关，B毒素可致肠道组织坏死，产生坏疽性肠炎。在本病发病率颇高的巴布亚新几内亚高原地区，研究发现，当地居民肠腔内蛋白酶浓度低下，这和低蛋白饮食以及当地作为主食的甘薯中所含的耐热性胰蛋白酶抑制
关于小肠炎的病因分析
1、致病菌 本病的病因尚未完全阐明，现认为本病的发病与感染产生B毒素的Welchii杆菌(C型产气荚膜杆菌)有关，B毒素可致肠道组织坏死，产生坏疽性肠炎。在本病发病率颇高的巴布亚新几内亚高原地区，研究发现，当地居民肠腔内蛋白酶浓度低下，这和低蛋白饮食以及当地作为主食的甘薯中所含的耐热性胰蛋白酶
大连化物所定量蛋白质组学新技术新方法研究取得进展
近日，中科院大连化学物理研究所生物分离分析新材料与新技术研究组(1809组)邹汉法、叶明亮研究员等人在定量蛋白质组学新技术新方法研究方面取得新进展。相关研究成果发表在最新一期的Angew. Chem. Int. Ed.上(2013年52卷，9205-9209页)。 该项研究工作利用胰蛋
各种丝氨酸蛋白酶介绍
丝氨酸蛋白酶的特点是具有独特的结构，由两个在催化活性位点会聚的β-桶结构域组成。这些酶可以根据它们的底物特异性进一步分类为胰蛋白酶样、胰凝乳蛋白酶样或弹性蛋白酶样。胰蛋白酶样胰蛋白酶样蛋白酶在带正电荷的氨基酸（赖氨酸或精氨酸）之后切割肽键。这种特异性是由位于酶S1口袋底部的残基驱动的（通常是带负电荷
动物细胞培养的培养步骤介绍
注：所有步骤应在无菌无毒的超净工作台进行。胰蛋白酶处理时间不宜过长。取离体的动物组织，器官或细胞，剪碎并加入胰蛋白酶分解成单个细胞，配置形成细胞悬液。制备动物细胞培养液体培养基（需加入血清，保证无菌无毒），将细胞接种至培养基，放入二氧化碳培养箱中进行初代培养。当细胞增殖达到一定程度，出现接触抑制现象
酶原激活的机制
酶原激活的过程通常是通过水解一个或几个特定的肽键，导致酶的构象发生改变，从而使酶的活性中心形成或暴露出来。例如，胰蛋白酶原的激活过程：胰蛋白酶原进入小肠后，在肠激酶的作用下，从其 N 端水解掉一个六肽，使构象发生改变，形成活性中心，从而转变为有活性的胰蛋白酶。又如胃蛋白酶原的激活：胃蛋白酶原在胃酸（
动物细胞培养的培养步骤
注：所有步骤应在无菌无毒的超净工作台进行。胰蛋白酶处理时间不宜过长。取离体的动物组织，器官或细胞，剪碎并加入胰蛋白酶分解成单个细胞，配置形成细胞悬液。制备动物细胞培养液体培养基（需加入血清，保证无菌无毒），将细胞接种至培养基，放入二氧化碳培养箱中进行初代培养。当细胞增殖达到一定程度，出现接触抑制现象
牙髓干细胞的分离培养——DPSCs的传代培养
实验材料牙髓组织试剂、试剂盒灭菌PBSAMSC培养基胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶0.54mmol L(0.2%)EDTA无Ca2+和Mg2+的Hank’s平衡盐溶液溶解仪器、耗材培养皿实验步骤(a)用PBSA洗培养瓶/皿三次。(b)加足够的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。(c)在8
免疫共沉淀确定结合蛋白实验
实验材料 培养基中生长的适宜细胞株 试剂、试剂盒 乙腈 考马斯亮蓝 R-250 EBC 裂解缓冲液
免疫共沉淀确定结合蛋白实验
实验材料 培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒 乙腈考马斯亮蓝 R-250EBC 裂解缓冲液NETN磷酸盐缓冲溶液SDS 凝胶加样缓冲液三氟乙酸胰蛋白酶胰蛋白酶消化缓冲液沉淀靶蛋白的抗体对照抗体不连续的 SDS-PAGE 梯度胶仪器、耗材 沸水浴蛋白质 A-Sepharose平板摇台实验步骤 材料缓
分析肺气肿的病因和发病机制
肺气肿是支气管和肺疾病常见的并发症。与吸烟、空气污染、小气道感染、尘肺等关系密切，尤其是慢性阻塞性细支气管炎是引起肺气肿的重要原因。发病机制与下列因素有关： 1．阻塞性通气障碍 慢性细支气管炎时，由于小气道的狭窄、阻塞或塌陷，导致了阻塞性通气障碍，使肺泡内残气量增多，而且，细支气管周围的炎症，
原代细胞培养中的6个常见错误
当培养原代细胞时，重要的是要记住，他们不是细胞系，不能同等对待。因为ScienCell在原代细胞培养方面的广泛工作，我们非常熟悉研究人员在培养原代细胞时遇到的常见问题。这里有六个在原代细胞培养中的常见错误，以及如何纠正这些错误。错误1：一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间纠正＃1：原代细胞对解冻过程非
组织的分离实验_EDTA－消化分离法
实验方法原理EDTA是一种非酶性消化物，常用不含Ca2+和Mg2+的BSS 配成0.02%的工作液。关于EDTA的作用机制一般认为是：一些组织，尤其是上皮组织，在生存中需要Ca2+和Mg2+才能维持组织的完整性。EDTA能从这些组织生存环境中吸收这些离子，形成螯合物，能促进细胞相互分离。EDTA 作
原代细胞的培养与建系4
（2） 胶原酶（Collagenase）消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用
原代细胞培养之——细胞分离技术（二）
（2） 胶原酶（Collagenase）消化法 胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶，对胶原有很强的消化作用。适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织，它对细胞间质有较好的消化作用，对细胞本身影响不大，可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害。该酶分离效果好，即使有钙、镁离子存在仍有活性，故可用PBS和含血清的
分离细胞完成的培养容器如何处理？
1. 移弃使用过的细胞培养基。2. 使用不包含有钙镁的平衡盐溶液或EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid，乙二胺四乙酸.)清洗细胞（看表确定正确的清洗溶液）。在培养瓶对着细胞的一面加入清洗溶液，通过转动培养瓶1到2分钟清洗细胞层，然后去除清洗液。3. 以2～3m
免疫共沉淀确定结合蛋白实验
当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合保持下来。这一亊实可被用于检测和确定生理条件下相关的蛋白质-蛋白质间相互作用。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料培养基中生长的适宜细胞株试剂、试剂盒乙腈考马斯亮蓝
细胞培养的基本方法细胞分离技术（一）
细胞分离技术一、从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋
猪甲状腺细胞培养
实验方法原理 由于甲状腺富含纤维性组织，所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法，用单一的胰蛋白酶消化效果一般；促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的，它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。实验材料 猪甲状腺试剂、试剂盒 F-12培养基胎牛血清胰蛋白酶胶原酶Ⅳ牛 TSH仪器、耗材
原代细胞培养中的常见错误
当培养原代细胞时，重要的是要记住，他们不是细胞系，不能同等对待。我们非常熟悉研究人员在培养原代细胞时遇到的常见问题。这里有六个在原代细胞培养中的常见错误，以及如何纠正这些错误。 错误1：一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间纠正1：原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴中，保持并轻轻旋转直
微生物培养基的原理、制作和现象：牛肉(或牛心)消化汤
成分 绞碎牛肉(或牛心) 1000g 15%氢氧化钠溶液 27mL 胰蛋白酶 40mL 三氯甲烷 1mL 氯化钠 10g 蒸馏水 2000mL制法 1 称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。 2 加氢氧化