如何检测诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的
在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml0.5XYPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。该蛋白很可能有转录激活域，是个转录因子。可以通过基因重组切掉转录激活域，然后重新检测其是否自激活，但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。可以采用以下方法解决：1)检测一下DNA的纯度，如果可以的话，重新用乙醇纯化。2)DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。3)不适当的培养基，重新配制培养基，并做对照转化。4)检测pGBT9对照载体的转化效率，放置于SD/–Trp平板上，转化效率应该在1x105colonies/mgDNA以上。在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的、新......阅读全文
相互作用克隆实验
实验方法原理它需要一种编码诱饵蛋白的基因和用噬菌体表达载体，如 λgt 11 构建的适当的表达文库。编码诱饵蛋白的基因常用于在中合成重组融合蛋白。重组融合蛋白使用具放射性的 [32P] 作标记。由于 cAMP 依赖蛋白质激酶（蛋白质激酶 A，PKA）的识别位点被引入重组融合蛋白质，从而可通过 PKA
相互作用克隆实验
相互作用克隆 实验方法原理 它需要一种编码诱饵蛋白的基因和用噬菌体表达载体，如 λgt 11 构建的适当的表达文库。编码诱饵蛋白的基因常用于在中合成重组融合蛋
相互作用克隆实验
实验方法原理 它需要一种编码诱饵蛋白的基因和用噬菌体表达载体，如 λgt 11 构建的适当的表达文库。编码诱饵蛋白的基因常用于在中合成重组融合蛋白。重组融合蛋白使用具放射性的 [32P] 作标记。由于 cAMP 依赖蛋白质激酶（蛋白质激酶 A，PKA）的识别位点被引入重组融合蛋白质，从而可通
简述酵母双杂交系统的技术步骤
1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒； 2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母； 3.再将文库质粒转化到酵母中； 4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。
酵母双杂交系统的技术步骤
1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；3.再将文库质粒转化到酵母中；4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。
GST融合蛋白的亲和纯化实验
实验方法原理 琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用 1/10 的 GST 融合体加样做平行 SDS-PAGE 凝胶电泳并染色以便更确切地比较 GST 融合体蛋白带。另外，融合蛋白的降解可能导致诱饵蛋白的量减少
GST融合蛋白的亲和纯化实验
GST 共结合纯化法 实验方法原理 琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用
GST融合蛋白的亲和纯化实验
实验方法原理琼脂糖颗粒和诱饵蛋白复合体在洗涤时并不会损失而且所有反应都含有等量的诱饵蛋白。为了证明在洗涤期间没有任何材料损失，应使用 1/10 的 GST 融合体加样做平行 SDS-PAGE 凝胶电泳并染色以便更确切地比较 GST 融合体蛋白带。另外，融合蛋白的降解可能导致诱饵蛋白的量减少，尤其是当
GST－pulldown－assay的基本原理
基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的磁珠上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液与之孵育,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析
酵母双杂交系统简介
酵母双杂交系统酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可
蛋白质组学主要包括哪些分析技术及各自特点
为探究生物进程的分子机制，需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用。研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下：一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道 基因在酵母细胞内的表
蛋白质组的分析鉴定方法主要有哪些
为探究生物进程的分子机制,需要确定介导这个过程的蛋白质-蛋白质间的相互作用.研究蛋白质间相互作用的主要技术总结如下：一、酵母双杂交系统酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法.其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道 基因在酵母细胞内的表
美开发蛋白质疗法－可用于抑制癌细胞在体内扩散
癌细胞的扩散正是导致大多数癌症患者死亡的罪魁祸首。目前，医务工作者们通常通过化疗抑制癌细胞的转移，但化疗本身的效果有限，且会带来强烈的副作用。而近日公布的一项研究成果或许在未来能够帮助癌症患者们减免化疗之苦。 美国斯坦福大学的研究团队开发出一种蛋白质疗法，该疗法能够破坏癌细胞从肿瘤中分离的过程
为什么要做gstpulldown实验
因为此方法简单易行,操作方便。GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的
代谢组鉴定质控标准正式建立
蛋白质组和代谢组技术都基于质谱，但相比于蓬勃发展的蛋白质组学技术，代谢组虽然技术流程更简单，但其应用却一直十分缓慢。究其原因，是因为蛋白质组学却很早就基于Target-Decoy策略建立了FDR（假发现率）质控策略，可以保证鉴定结果的可靠性；而代谢组全谱鉴定一直缺乏有效的质控手段对鉴定结果进行
关于酵母双杂交系统的发展介绍
发展起来的各种双杂交系统大多是以Fields等人建立的系统为基础的。这些新系统主要对报道基因、“诱饵”表达载体以及“猎物”表达载体等做了一些改进。其中一个重要改进是引入额外的报道基因，如广泛采用的HIS3基因。经过改造带有HIS3报道基因的酵母细胞，只有当HIS3被启动表达才能在缺乏组氨酸的选择
通过相互作用交配确定识别特异性实验
实验方法原理 实验材料 质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒 10 cm 完全极限（CM） 缺失成分培养基平板YPD 平板 X-gal 平板仪器、耗材 30℃ 培养箱实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 用乙酸锂转化法将单个肽适配体捕获质粒与对照质粒（pJG4-5）转化人 EG
通过相互作用交配确定识别特异性实验
实验材料质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒10 cm 完全极限（CM） 缺失成分培养基平板YPD 平板 X-gal 平板仪器、耗材30℃ 培养箱实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 用乙酸锂转化法将单个肽适配体捕获质粒与对照质粒（pJG4-5）转化人 EGY48 （Mata）。
双杂交和其他双成分系统实验（二）
方法诱饵-LexA 融合蛋白的构建1.将编码诱饵蛋白的靶 DNA 克隆到 LexA 融合载体（如，pMW101 或 pMW103) 的多聚接头处，以合成一种框架内的 LexA 融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻译终止序列。形成的质粒作为 pBait。2. 采用下列 LexA 融合基因和报道质粒的组
各种蛋白互作检测方法优缺点分析
聚焦蛋白质互作研究进展与实验方法研究蛋白-蛋白相互作用是理解生命活动的基础。蛋白质—蛋白质互作网络是生物信息调控的主要实现方式，是决定细胞命运的关键因素。检测蛋白质间相互作用的实验方法有哪些？这些检测方法各有什么优缺点?总结如下。1. 生化方法●共纯化、共沉淀，在不同基质上进行色谱层析(需要补充)●
酵母双杂交系统的研究过程
Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or tar
酵母双杂交系统的研究过程
Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or targe
研究蛋白质相互作用的新技术
近期，来自多伦多大学Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute (LTRI)和Donnelly中心的一组研究人员，开发出一种新技术，可以将细胞内的DNA条形码拼接在一起，以同时搜寻数百万个蛋白质配对，用以分析蛋白质相互作用。相关研究结果发表在4月22日的《Mol
面对病菌，植物会开启“诱敌”模式
在病菌面前，为什么有的植物被侵害，而有的植物“毛发无损”？日前出版的《科学》杂志发表了中国科学家的论文，揭示了植物抗病的机理。这一发现对于未来设计农作物抗病品种、发展绿色农业具有重要意义。 上世纪40年代，科学家提出了植物抗病基因的理论。1994年，科学家发现了植物抗病基因编码抗病蛋白，但是一
部分植物面对病菌为何毫发无损？
在病菌面前，为什么有的植物被侵害，而有的植物“毛发无损”？日前出版的《科学》杂志发表了中国科学家的论文，揭示了植物抗病的机理。这一发现对于未来设计农作物抗病品种、发展绿色农业具有重要意义。 上世纪40年代，科学家提出了植物抗病基因的理论。1994年，科学家发现了植物抗病基因编码抗病蛋白，但是一
加拿大开发出DNA条形码融合技术提高人类对疾病认知度
据最新一期《分子系统生物学》报道，加拿大研究人员开发出一种新技术，可将DNA（脱氧核糖核酸）条形码拼接在单个细胞内，以同时搜索数以百万计蛋白质对之间的相互作用。 近年来，DNA条形码技术使科学家开展高并行试验（许多不同类型的细胞在同一试管内进行试验）成为可能，而新一代DNA测序技术的发展，进一
什么是噬菌体表面显示技术
噬菌体表面显示技术就是噬菌体展示技术，是将基因表达的产物和亲和选择相结合的的技术，起基本原理是将编码“诱饵”蛋白的DNA片段插入噬菌体基因组，并使之与噬菌体外壳蛋白编码基因相融合。该重组噬菌体侵染宿主细菌后，复制形成大量带有杂合外壳蛋白的噬菌体颗粒，直接用于捕获靶蛋白库中与"诱饵'蛋白相互作
Cell子刊封面：基因沉默的关键一步
基因沉默是控制细胞活性的主要方式。现在，Scripps研究所的科学家们揭示了基因沉默中的关键一步，使人们可以根据需要对这一机制进行增强或抑制。该研究作为封面文章发表在本期的Molecular Cell杂志上。 “控制天然的基因沉默过程，将为人们提供治疗人类疾病的全新途径，”TSRI的助理教授I
Sci－Trans－Med：靶向血小板可以治疗癌症
心脏病，中风，败血症和癌症是全世界死亡人数最多的疾病。它们还有其他共同之处：所有这些都与活化的血小板有关，这些细胞在我们的血液中循环，通常有助于形成血凝块以止血并在受伤时促进愈合，但也可能导致危险的血栓，肿瘤等问题。目前已经开发了几种抗血小板药物以对抗血小板相关病症，但是它们的作用不易逆转，并且
加拿大开发出DNA条形码融合技术－实验效率可提高10倍
据最新一期《分子系统生物学》报道，加拿大研究人员开发出一种新技术，可将DNA（脱氧核糖核酸）条形码拼接在单个细胞内，以同时搜索数以百万计蛋白质对之间的相互作用。 近年来，DNA条形码技术使科学家开展高并行试验（许多不同类型的细胞在同一试管内进行试验）成为可能，而新一代DNA测序技术的发展，进一