怎样溶解引物?
生工的合成报告单给出了每OD引物稀释为100 μmoL/L(即100 pmol/ul)浓度的加水量,您可以根椐您的实验需要加入适量的无核酸酶的双蒸水(PH>6.0)或TE缓冲液(PH7.5~8.0),开启瓶盖溶解之前最好在3000~4000转/分钟的转速下离心1分钟,防止开盖时引物散失。......阅读全文
怎样溶解引物?
生工的合成报告单给出了每OD引物稀释为100 μmoL/L(即100 pmol/ul)浓度的加水量,您可以根椐您的实验需要加入适量的无核酸酶的双蒸水(PH>6.0)或TE缓冲液(PH7.5~8.0),开启瓶盖溶解之前最好在3000~4000转/分钟的转速下离心1分钟,防止开盖时引物散失。
引物溶解引物保存
1. 如何测定引物的OD值? 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量,请注意紫外分光光度计的使用,测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其
引物溶解引物保存
1. 如何测定引物的OD值?用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量,请注意紫外分光光度计的使用,测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其吸光度
如何溶解引物?
干燥后的引物质地非常疏松,开盖前最好离心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或10mM Tris pH7.5缓冲液,室温放置几分钟,振荡助溶,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),引物在这种
引物溶解稀释方法
在实验室进行分子克隆实验时,经常需要合成大量的引物,而这些合成的引物首先要进行适当的稀释才能使用。如果不稀释就使用引物,往往造成引物的浪费和过早的活性丧失,更有一些被污染而不能使用。因此,建议对合成的引物先进行稀释,然后使用。稀释的引物利于保存和应用。现将方法简单叙述如下:1. Oligo DNA是
如何溶解和保存引物?
如何溶解引物?干燥后的引物质地非常疏松,开盖前最好瞬时离心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或TE(pH8.0)缓冲液,室温放置几分钟,振荡助溶,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),引物
怎样设计引物
一般是通过设计软件,例如oligo6,primer5等,你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明,是比较容易的。至于设计引物的一般原则如下:* 序列选取应在基因的保守区段* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状发卡结构* 典型的引物18到24个核苷长。引物需要
用什么溶解引物最合适?
常用的溶剂是水或者TE缓冲液(pH7.4——8.0),两者在实际实验中都是常用的。一般认为,TE缓冲液比较稳定,能提供稳定的pH环境,适合于保存引物(以及质粒或基因组DNA)。但也有人认为,TE中的EDTA分子会影响后续PCR的效率。如果您很注重PCR效率的话就要考虑到这一点。而双蒸水很易得,操作方
溶解引物需要什么水
先离心!然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液(约100μM),保存于-20℃。使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高,浓度过高有两个弊端:一是容易形成引物二聚体(primer-dimer),二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时,容易产
已经溶解的引物的问题
已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了?如果您溶解引物的水pH过低或污染了菌或核酸酶,会使引物降解。使用时没有充分解冻混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物,避免反复冻溶。建议使用10mM Tris pH7.5缓冲液溶解引物,因为有些蒸馏水的pH值
PCR的引物怎样设计
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它。如这一段不能形成二级结构,那就可以在
怎样消除引物二聚体
首先在设计引物的时候,要注意避免产生引物二聚体.现在的引物设计软件都会有一个dimer的选项,可以看出你设计的引物是否会发生二聚体.如果会形成二聚体,并且序列不能有大的变动,那就注意一下在3'端别发生dimer的互补.其次,在PCR时提高退火温度可以提高PCR的特异性,可以减少引物二聚体.
怎样预防肿瘤溶解综合征?
白血病、淋巴瘤等患者化疗前24小时开始给予别嘌呤醇600mg/d,口服,持续用药1-2天。此后可给予别嘌呤醇,每日300mg口服。对于需要立即抢救的病人,给予相同剂量的别嘌呤醇,并需要碱化尿液(pH>7),静脉输注含0.4%碳酸氢钠的溶液和利尿剂,使尿量维持在100-150mL/h。在给予足够液
怎么通过看扩增曲线和溶解曲线看引物的好差
具体要看你做什么实验,模板和扩增的基因实怎样的.1、扩增曲线:一般来说如果你做双ΔCT法那么你的扩增曲线必须是S型,有明显的四个时期,且复孔的CT值尽量一致,相差不要超过0.5个CT值(上限是1个CT值);同一个基因在...
怎样预防脑桥中央髓鞘溶解症?
为预防髓鞘溶解,在积极治疗原发疾病的同时,应尽可能避免电解质紊乱,尤其是低钠血症,在纠正低钠血症时要缓慢,起初24小时内血钠升高不要超过25mmol/L,一旦症状控制住,就减少钠的应用,血钠24小时升高一般不超过10mmol/L。目前主张用生理盐水慢速纠正,并限制液体量,加强营养和注意。
日常怎样维护溶解氧分析仪
溶解氧分析仪只要选型、设置、维护得当,一般均能满足工艺的测量要求。溶解氧分析仪的使用不好的主要问题出在:使用维护不正确;电极内部泄露造成温度补偿不正常;电极输入阻抗降低等。 日常维护仪表的日常维护主要包括定期对电极进行清洗、校验、再生。 (1)1~2周应清洗一次电极,如果膜片上有污染物,会引
怎样找到一个细菌的特异性引物
PCR技术中扩增的是两引物之间的核苷酸序列,意思是采用该技术,可以大量扩增引物之间的序列,一般情况下,我们需要大量的某一基因的片段时,我们在基因的两端分别设计引物(一段一条),然后在体外,采用PCR的方法,用引物进行体外DNA复制,从而大量合成引物之间的基因。PCR即聚合酶链式反应是一种用于放大扩增
溶解氧分析仪怎样维护和保养?
(1)1~2 周应清洗一次电极,如果膜片上有污染物,会引起测量误差。清洗时应小心,注意不要损坏膜片。将电极放入清水中涮洗,如污物不能洗去,用软布或棉布小心擦洗。 (2)2~3 月应重新校验一次零点和量程。 (3)电极的再生大约1 年左右进行一次。当测量范围调整不过来,就需要对溶解氧电极再生。
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性。2、G十C含量:应在40%一60%之间,PCR扩增中的复性温度一般较Tm值低等于引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时,
什么是上游引物和下游引物
虽然这个问题很简单,但我怎么发觉挺难回答的......上游引物就是和要扩增基因片断上游序列结合的引物(引物就是单链寡聚核苷酸,基因扩增需要从引物开始),同理,下游引物指与目的基因片断下游序列结合者。具体示意如下:(上下两条长线代表DNA模板)5'-----------------------
快速了解反转录引物随机引物
随机引物是指当特定mRNA由于含有使逆转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时,可采用随机六聚体这一非特异的引物来拷贝全长mRNA。 1.特异性引物一般在增低丰度目的基因才选择使用,用得比较少。一般都推荐用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物。由于rna的二级结构破坏不完全,导致特异性
聚乙二醇PEG8000怎样溶解与水相容
聚乙二醇是聚环氧乙烷与水的加聚物,简称"PEG"。分子量在700以下者,在20℃时为无色无臭不挥发粘稠液体,略有吸水性;分子量在700~900之间者为半固体;分子量1000及以上者为浅白色蜡状固体或絮片状石蜡或流动性粉末。随着分子量的提高,其水溶性、蒸汽压、吸水性和有机溶剂的溶解度等相应下降,而凝固
设计引物遵循原则、引物保存和各种PCR的引物设计
一 设计引物应遵循以下原则1 、引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。2 、引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。3 、引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上
PCR引物
PCR Primer Design and Reaction Optimization (Molecular Biology Techniques Manual) PCR Primer Design (Newman Lab) PCR Primer Design (Eppendorf)Detail
PCR引物
PCR Primer Design and Reaction Optimization (Molecular Biology Techniques Manual) PCR Primer Design (Newman Lab) PCR Primer Design (Eppendorf)Detail
设计引物时需要避免引物之间形成什么而造成引物自连。
设计引物时需要避免引物之间形成_碱基互补配对。而造成引物自连。相同末端或相同黏性末端或相同平末端。末端特指双链DNA分子的端位碱基,是专用名词,不可以用在单链引物上。且引物之间的碱基互补配对不一定是所有碱基都能够互补配对,少量配对也会使两种引物结合在一起,从而不能获得特异性DNA产物。
温度对溶解氧测定仪的影响是怎样的?
氧的溶解度取决于温度、压力和水中溶解的盐,另外氧通过溶液扩散比通过膜扩散快,如流速太慢会产生干扰。 1.温度的影响由于温度变化,膜的扩散系数和氧的溶解度都将发生变化,直接影响到溶氧电极电流输出,常采用热敏电阻来消除温度的影响。温度上升,扩散系数增加,溶解度反而减小。温度对溶解度系数a的影响可以