Nature：外源核酸诱导的原核生物短Ago蛋白系统发挥功能的分子机理
RNA介导的转录后基因调控在生命个体抵御外源入侵的过程中起到重要作用。Argonaute（Ago）蛋白是存在于古菌、细菌和真核生物中的一种蛋白。它为非编码小RNA提供锚位点，达到降解靶基因或者抑制翻译的目的。对比真核生物的Ago，原核生物的Ago展现出多样性，分为三个家族——长A型、长B型和短Ago亚型。原核长A和长B型Ago包括四个结构域，即N端结构域、PAZ结构域、MID结构域和PIWI结构域。这四个结构域在Ago蛋白系统发挥功能的过程中发挥重要的功能，缺一不可。原核短Ago不具备N端和PAZ结构域（图1a），因此原核短Ago在发挥功能时必须招募一些其他蛋白如SIR2和TIR蛋白，补偿N端和PAZ结构域的功能。 与真核生物相比，原核生物的Ago不仅可以介导由DNA引导的靶向DNA干扰，而且可以介导由RNA引导的靶向RNA或者DNA干扰。因此，原核生物的Ago展示出更多的功能，如靶向干扰噬菌体入侵和外源质粒DNA扩增、阻......阅读全文
Nature：外源核酸诱导的原核生物短Ago蛋白系统发挥功能的分子机理
RNA介导的转录后基因调控在生命个体抵御外源入侵的过程中起到重要作用。Argonaute（Ago）蛋白是存在于古菌、细菌和真核生物中的一种蛋白。它为非编码小RNA提供锚位点，达到降解靶基因或者抑制翻译的目的。对比真核生物的Ago，原核生物的Ago展现出多样性，分为三个家族——长A型、长B型和短A
科学家揭示外源核酸诱导的原核生物短Ago蛋白系统发挥功能的分子机理
RNA介导的转录后基因调控在生命个体抵御外源入侵的过程中起到重要作用。Argonaute（Ago）蛋白是存在于古菌、细菌和真核生物中的一种蛋白。它为非编码小RNA提供锚位点，达到降解靶基因或者抑制翻译的目的。对比真核生物的Ago，原核生物的Ago展现出多样性，分为三个家族——长A型、长B型和短Ago
外源DNA的定义
外源DNA，是通过基因工程技术或病毒感染等途径引入靶细胞中的DNA序列。
DNA重组（DNA－recombination）技术：外源基因的蛋白表达4
（3）CHO细胞稳定表达系统：动物细胞瞬时表达系统中外源基因没有稳定地整合到宿主细胞染色体中，一染色体外DNA的形式存在。因而只能瞬时表达。要使外源基因在宿主细胞中高效、稳定地表达，必须建立一个稳定表达系统，包括适宜的表达载体、有效的基因转染、标记基因和目标基因的选择与共扩增、受体适当的受体细胞和培
DNA重组（DNA－recombination）技术：外源基因的蛋白表达3
（6）遗传标记： 从成千上万个哺乳细胞中，检测出极少数的含DNA重组体的转染细胞，并鉴定已导入外源DNA是哺乳动物细胞基因表达系统的一个关键内容。因此，在真核生物表达载体上必须附有标记基因，才能进行筛选。常用的标记基因有：胸苷激酶基因（thymidine kinase，TK）、二氢叶酸还原酶
DNA重组（DNA－recombination）技术：外源基因的蛋白表达2
2.包涵体的分离与纯化细胞破碎时提取细胞内产物的关键。对于细菌的裂解常用的有酶溶法、超声破碎法、化学渗透法、玻璃珠研磨等。包涵体可通过超声波、匀浆等常规的方法是菌体破碎后，离心就可得到。密度梯度离心后可得到高纯度的包涵体。包涵体一般不溶于水，为了获得可溶性的蛋白质可加入强蛋白质变性剂后使其溶解。一般
DNA重组（DNA－recombination）技术：外源基因的蛋白表达1
通过外源DNA的重组、克隆、以及鉴定，可以获得所需的特异DNA克隆。外源克隆基因在某种表达载体及适宜的宿主细胞中可表达为相应的蛋白质，这就组成了外源基因的蛋白表达系统。表达后的蛋白质必须具有原来的生物学活性，这是基于正确的基因转录、转录后加工、mRNA翻译及翻译后修饰，同时与表达载体的结构和表达体系
外源DNA的基因特点
基因有两个特点，一是能忠实地复制自己，以保持生物的基本特征；二是基因能够“突变”，突变绝大多数会导致疾病，另外的一小部分是非致病突变。非致病突变给自然选择带来了原始材料，使生物可以在自然选择中被选择出最适合自然的个体。含特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。除某些病毒的基因由核糖核酸（
概述外源DNA的特点
基因有两个特点，一是能忠实地复制自己，以保持生物的基本特征；二是基因能够“突变”，突变绝大多数会导致疾病，另外的一小部分是非致病突变。非致病突变给自然选择带来了原始材料，使生物可以在自然选择中被选择出最适合自然的个体。 含特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。除某些病毒的基因由核
细胞化学词汇外源DNA
中文名称：外源DNA外文名称：Exogenous DNA定 义：对于一个细胞来说，内源DNA是其基因组的序列（本身生物就有的DNA），而外源的DNA是通过基因工程导入的其他物种或细胞的DNA，也可以是人工合成的一段DNA。
外源DNA的基本特点
基因有两个特点，一是能忠实地复制自己，以保持生物的基本特征；二是基因能够“突变”，突变绝大多数会导致疾病，另外的一小部分是非致病突变。非致病突变给自然选择带来了原始材料，使生物可以在自然选择中被选择出最适合自然的个体。含特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。除某些病毒的基因由核糖核酸（
关于外源DNA的基本介绍
外源DNA，是通过基因工程技术或病毒感染等途径引入靶细胞中的DNA序列。 对于一个细胞来说，内源DNA是其基因组的序列（本身生物就有的DNA），而外源的DNA是通过基因工程导入的其他物种或细胞的DNA，也可以是人工合成的一段DNA。
外源质粒DNA转化大肠杆菌
摘要： 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（5）
或者第5步和第6步改为丙酮洗:5.加入200ul冰冷的丙酮，用手指轻弹EP管，洗去管底和管壁残余的TCA。6.15000g,离心10－20分钟,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。样品是酵母细胞超声后离心获得的上清，用Loading buffer溶解蛋白沉淀，始终不
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（3）
12、蛋白降解分泌表达的目标蛋白比胞内蛋白确实容易被降解。可以尝试以下几种办法：1、尽可能降低培养液的pH值减少酶活，酵母生长pH值比较广，4～7都可以试一下；2、多试几种蛋白添加剂，充当酶解底物（比如酵母酸）；3、摸索最适下罐（摇瓶也一样），宁可少表达点也别给降解光了。实在没办法，只好换菌株或做p
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（4）
15、菌体密度：菌体是在BMMY中培养的，可以不用BMMY做对照，在600nm处测OD值，培养基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。麦芽浸提液培养酵母（不换液，补料），生长阶段结束后，密度可达到10-12，诱导培养结束后，密度可达到18左右。如果用1体积的BMGY，在生长阶段结束后，换液时，加入1/
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（1）
1、 菌株用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。2、温度： 在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。3、pH手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概 5-6左右。pH3的时候
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（2）
如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。用无机盐进行大规模发酵，更省钱。大规模发酵时，甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用纯氧并不昂贵，在武汉买个钢瓶600元左右，一瓶纯氧20元。一个批次100h左右估计3－4 瓶氧气。
外源DNA和质粒载体的连接反应
外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导
质粒载体和外源DNA的连接反应
实验概要掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。实验原理DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来，该反为需能反应，通常需要加入ATP或NADH，DNA连接酶对粘性末端的连接效率要远
外源DNA和质粒载体的连接反应
外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导
质粒载体和外源DNA的连接反应
实验原理DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来，该反为需能反应，通常需要加入ATP或NADH，DNA连接酶对粘性末端的连接效率要远高于对平末端的连接效率。在基因基因工程实验中，最常用的来源于T
质粒载体和外源DNA中限制酶切位点的性质
如今，质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源DNA片段本身毫无二致的载体。这就具备一个不可比拟的优点，也应是可以用相应的限制酶消化重组质粒崦回收外源DNA。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的限制酶B
外源DNA片段在质粒载体中的克隆实验
克隆法 实验方法原理 限制性内切酶可识别特定位点并切割DNA产生粘性末端或平端的外源片段，经DNA的纯化处理后用于连接反应；选择克隆载体pUC18多克隆位点上
外源DNA片段在质粒载体中的克隆实验
NA重组技术包括载体及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的获得及纯化、目的片段与克隆载体的体外连接、重组子的筛选和鉴定等内容。主要用于（1）外源性基因转染；（2）对外源性基因的转化分离。实验方法原理限制性内切酶可识别特定位点并切割DNA产生粘性末端或平端的外源片段，经DNA的纯化处理后用于连接反应；
外源DNA片段在质粒载体中的克隆实
实验方法原理 限制性内切酶可识别特定位点并切割DNA产生粘性末端或平端的外源片段，经DNA的纯化处理后用于连接反应；选择克隆载体pUC18多克隆位点上相应的限制性内切酶切割，并用碱性磷酸酶处理防止载体自连；在连接酶的作用下将外源片段连接到载体上，实现外源片段的克隆。实验材料 DNA片段PUC18试剂
Argonaute（AGO）蛋白的结构和功能
Argonaute（AGO）：一类庞大的蛋白质家族，是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白质主要包含两个结构域：PAZ和PIWI两个结构域，但具体功能尚不清楚。研究表明，PAZ结构域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端；一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ
美国放行基因编辑蘑菇和玉米－不含任何外源DNA
美国农业部对采用基因编辑技术的新型作物网开一面，是由于基因编辑后的作物，不含任何新引入的遗传物质或外源DNA。当技术飞奔时，既面临重新定义转基因，也要思考监管如何收放。 在不到一周的时间里，美国农业部相继豁免了一种基因编辑蘑菇和一种基因编辑玉米的监管。 它们都采用了一种名为CRISPR
关于AGO蛋白质的基本介绍
Argonaute（AGO）：一类庞大的蛋白质家族，是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白质主要包含两个结构域：PAZ和PIWI两个结构域，但具体功能尚不清楚。研究表明，PAZ结构域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端；一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。P
原核短Ago在病毒入侵前后有啥变化？研究揭示
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/10/509647.shtm中国科学院物理研究所/北京凝聚态物理国家研究中心丁玮团队和朱洪涛团队与中国医学科学院北京协和医学院病原生物研究所崔胜团队合作，通过高分辨冷冻电镜技术与自主研发的自动化结构解析策略，在