光生物学研究技术快讯：重组光合作用
美国亚利桑那州立大学生物能源与光合作用中心Kevin Redding、以色列特拉维夫大学植物科学与粮食安全学院Iftach Yacoby等科学家，在《Energy and Environmental Science》上最新发表其重要研究成果：重组光合作用：光系统I-氢酶嵌合体产生氢气（Rewiring photosynthesis: a Photosystem I-hydrogenase chimera that makes hydrogen in vivo）。科学家们利用藻类氢化酶和光系统I组成嵌合体，氢化酶直接从光合作用器官光系统I（PSI）截获高能电子，将原先的CO2通化过程导向产生氢气的过程，并最终产生氢气——地球上最清洁的能源（氢气燃烧产生水），从而实现了藻类直接利用太阳能进行光合作用产生清洁能源氢气的目的。这种具备全新的重组的光合作用系统——PSI-氢酶嵌合体的细胞，可以连续依赖太阳能制造氢气，并由此......阅读全文
光生物学研究技术快讯：重组光合作用
美国亚利桑那州立大学生物能源与光合作用中心Kevin Redding、以色列特拉维夫大学植物科学与粮食安全学院Iftach Yacoby等科学家，在《Energy and Environmental Science》上最新发表其重要研究成果：重组光合作用：光系统I-氢酶嵌合体产生氢气（Rew
植物表型分析技术快讯—西红柿表型与代谢组学研究案例
植物源蛋白水解物（PHs）是一类重要的生长刺激素，影响植物表型组及代谢组特征，进而促进植物生长和作物产量，尤其在缺水、盐胁迫、重金属等逆境条件下，这种促进作用更加突出。PSI植物表型组学研究中心首席科学家Klara Panzarova等，利用PlantScreen高通量表型分析平台，就一种PH对
基因工程重组抗体技术的研究
在抗体研究的漫长过程中,相继发展了三代不同水平的抗体制备技术｡其中以抗原免疫高等脊椎动物制备的多克隆抗体,称为第一代抗体;通过杂交瘤技术生产的只针对某一种特定抗原决定簇的单克隆抗体,称为第二代抗体;应用重组DNA技术或是基因突变的方法改造某种抗体基因的编码序列,使之产生出自然界中原本存在的抗体蛋白质
科学快讯
海底光纤：检测地震新方法 研究人员说，监测地震诱发的海底光纤电缆的变化代表了一种发现地震的新手段。他们的方法使在不安装新的海底设备的情况下感测地震成为可能，这种方法可在用其它方法难以监测地震的地区（包括俯冲带或缺乏地震仪的遥远海洋区域）发现地震。 尽管地球表面有70%为海水覆盖，但几乎所有的
环保快讯
新疆 根据《关于印发的通知》，新疆维吾尔自治区自2017年10月1日起，按照谁污染谁付费的原则，开始对石油化工行业和包装印刷行业征收挥发性有机物排污费。 此次征收范围涉及的2个行业大类中排放挥发性有机物的7个行业小类，具体包括：原油加工及石油制品制造、有机化学原料制造、初级形态塑料及合成树脂
植物表型分析技术快讯—多光谱荧光成像系统研究植物...1
植物表型分析技术快讯—多光谱荧光成像系统研究植物胁迫响应FluorCam多光谱荧光成像系统是国际知名FluorCam叶绿素荧光成像技术的高级扩展产品，其高度集成，功能强大，应用广泛，利用系统中的叶绿素荧光成像、多光谱荧光成像、红外热成像技术及RGB成像，可对植物进行全面、非接触的监测，高灵敏度反映光
植物表型分析技术快讯—多光谱荧光成像系统研究植物...2
案例2: 由真菌Rosellinia necatrix引起的白根腐病，是影响鳄梨作物的最主要的土壤传播疾病之一。白根腐病会引起植物根系腐烂、叶片发黄枯萎，甚至导致植株在出现第一个叶面症状几周后死亡。病害的早期检测与防治至关重要。本案例中，对感染Rosellinia necatrix后的植
DNA重组技术
连接反应的策略 可以采用几种策略来进行外源ＤＮＡ片段和质粒载体的连接。对此，可依据外源ＤＮＡ片段未的性质，以及质粒载体与外源ＤＮＡ上限制酸切位点的性质来作出选择。（一）外源ＤＮＡ片段未的性质带有各种未的外源ＤＮＡ的克隆方法见下表：────────────────────────────────
重组－DNA－技术简介
中文名称重组 DNA 技术英文名称recombinant DNA technique定 义在体外将两个或多个不同的DNA片段全部或部分构建成一个DNA分子的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
DNA重组技术－连接
实验概要 体外连接获得重组分子，用于转化受体细胞。实验原理 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(＜10kb)且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆，从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段， 然后体外使
同源重组技术原理
同源重组技术原理：基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为
DNA重组技术2
感受态细胞的制备(一)制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞 下述操作方案是由Hanahan(1983)提供的，所制备的大肠杆菌DHl、DH5和ＭＭ249感受态细胞培养物能使每微克超螺旋ＤＮＡ以≥5x108转化菌落的频率进行转化，其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有前述菌株的1/10-1/5。
重组－DNA－技术介绍
中文名称重组 DNA 技术英文名称recombinant DNA technique定 义在体外将两个或多个不同的DNA片段全部或部分构建成一个DNA分子的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体3
在作为载体时，这些噬菌体有一个很大的优点，即克隆到M13mp载体的外源DNA片段（双链），在子代噬菌体便成为了单链形式。故应用M13mp进行克隆，可方便地分离到大量含有外源DNA某一单链的DNA分子。这种单链DNA可在下列工作中作模板：①主要用作双脱氧链终止法进行DNA序列测定的模板；②制备仅有一条
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体1
载体（vector）是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型，亦可根据其用途不同分为克隆载体和表达载体二类。载体的构建和选择应考虑以下
基因的重组连接技术
DNA酶切片段的连接是分子生物学实验中又一关键技术，该技术是基因重组，基因改造的重要中间环节。两DNA片段相邻的5'磷酸和3'羟基间可由连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌DNA联接酶和T4DNA联接酶催化，但分子生物学实验中主要采用T4DNA联接酶，因该酶在
体外DNA重组技术2
【注意事项】基因组DNA分子量大，所有操作必须轻柔，酚/氯仿对皮肤有腐蚀作用，应该戴手套操作。二、RNA的制备【实验目的】1.理解生物细胞中RNA制备方法的原理。2.熟悉组织细胞中RNA制备的基本操作。（一）细胞总RNA的提取1.异硫氰酸胍法【实验原理】异硫氰酸胍法提取细胞总RNA是目前常用的提取方
DNA重组技术－酶切
实验概要 通过酶切获得可进行体外重组的载体和外源DNA实验原理 DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开，经分离纯化后，用链接酶将其连接，构成新的DNA分子。 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DN
体外DNA重组技术1
在体外将两个或多个来源相同或不相同的DNA片段连接成新的重组DNA分子，再转到特定宿主细胞中进行自主复制并表达。这是分子生物学中的基本技术。DNA重组技术的基本程序包括：（1）获得外源DNA：外源DNA是进行DNA重组的目的DNA片段，一般采用 DNA聚合酶链式反应(PCR)或逆转录-DNA聚合酶链
同源重组法技术介绍
同源重组法：同源重组（homologous recombination）是将外源基因定位导入受体细胞的染色体上，在该座位因有同源序列，通过单一或双交换，新基因片段替换有缺陷的片段，达到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁组装一Neo基因，则在同源重组后，因有Neo基因，可在含有新霉素（neomyci
细胞重组的技术方法
转移 核体与胞质体在仙台病毒或聚乙二醇的作用下能合并成为完整细胞，称“重组细胞”。目前不仅能使大鼠核体与小鼠胞质体合并成为重组细胞，并能使人的核体与小鼠胞质体形成重组细胞。若将胞质与完整的细胞融合，构成含有一个亲本核和两个亲本胞质的杂种细胞，称“胞质杂种”。这样，就可把一个亲本细胞的胞质基因（
DNA重组技术(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切与连接（1）酶切反应：同质粒DNA 的鉴定，只不过是质粒DNA 换为载体DNA 。若大量酶切，则成比例增加。（2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。（3）15000rpm离心15min，弃上清。（4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃
体外DNA重组技术3
【实验试剂与器材】（1）Oligo(dT)纤维素（2）层析柱装置（3）1×上样缓冲液：20mM Tris.Cl (pH7.6)，0.5M NaCl，1 mM EDTA.Na2 (pH8.0)，0.1%十二烷基肌氨酸钠(SLS)配制方法: 用Tris.HCl、NaCl和EDTA母液，加入各成分确切
体外DNA重组技术4
（二）质粒的大量制备:1.将5ml转化菌种接种于500ml LB培养液(含用于筛选的抗生素)中，37℃以225rpm速度振荡培养12～16小时；2.10,000rpm，4℃离心15min收集菌体；3.将细菌悬浮于100ml预冷的STE（0.1M NaCl，10mM Tris.Cl，pH8.0，1mM
体外DNA重组技术5
（三）DNA酶切片段的回收【实验方法与步骤】1.冻融法:（1）在UV灯下，用手术刀片将含DNA片段的琼脂糖凝胶切下，-70℃冷冻至少 15min，然后在65℃水浴中使胶融化；（2）加入等倍体积TE-饱和酚，剧烈振荡30秒钟，然后-70℃冷冻 15min；（3）室温融化后，12,000rpm离心5mi
体外DNA重组技术6
六、重组质粒的转化【实验目的】学习和掌握感受态细胞的制备方法和转化实验的基本操作。【实验原理】将重组质粒转入大肠杆菌的过程称为转化。转化所用的大肠杆菌需要用物理或化学方法特殊处理，使重组DNA分子容易进入细胞内，被处理后易于接纳DNA分子的细胞称作感受态细胞。下面介绍感受态细胞的制备。【实验试剂与器