Takara推出PCR领域的全能酶
幸福的PCR都是相似的,不幸的PCR各有各的不幸。PCR虽说并不是个复杂的过程,但经常会遇到各种各样的问题,比如GC含量过高、片段太长、保真度不够等等。许多DNA聚合酶就是针对这些问题而设计的,以实现“更高更快更强”。然而,PCR扩增的模板千变万化,每次都要换,这确实麻烦。若有一种全能酶,能解决各种问题,那就perfect啦。 Takara(宝生物)公司的确推出了这样一种酶,那就是Tks Gflex DNA Polymerase。这种酶具有“全能”特性,成功率高,能够对复杂序列扩增,长片段扩增,即使是粗提样品,也不在话下。 据介绍,Tks Gflex DNA聚合酶是源于Thermococcus sp.高保真聚合酶的改良型PCR酶。一般的α型聚合酶容易与模板DNA非特异性结合而阻碍引物的延伸,因此PCR反应有时难以进行。然而,Tks Gflex DNA聚合酶经过改良,可成功抑制与模板DNA的过剩结合。因......阅读全文
关于聚合酶链反应模板的介绍
单、双链DNA或RNA都可以作为PCR的样品。若起始材料是RNA,须先通过逆转录得到第一条cDNA。虽然PCR可以仅用极微量的样品,甚至是来自单一细胞的DNA,但为了保证反应的特异性,还应用ng级的克隆DNA,μg水平的单拷贝染色体DNA或104拷贝的待扩增片段作为起始材料,模板可以是粗品,但不
聚合酶链反应的模板的制备
PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以破碎的细菌
聚合酶链式反应模板的制备
PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。 模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。 标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难
聚合酶链式反应(PCR)模板的制备
模板的制备PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难以
关于基因扩增技术—聚合酶链反应的条件模板核酸的介绍
基因扩增技术—聚合酶链反应可以以DNA或RNA为模板进行核酸的体外扩增。不过RNA的扩增首先逆转录成cDNA后才能进行PCR循环。不同来源的核酸标本必须经处理后才能用于PCR的扩增,处理不当或处理过程中DNA掉失都会导致PCR扩增失败。采集标本方法不当,未能获得所要检测的靶DNA都会导致出现假阴
用大肠杆菌-DNA-聚合酶-I-Klenow-片段及单链-DNA-模板进行...
用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验试剂、试剂盒 dATP去离子蒸馏水EDTA延伸 终止混合液和示踪混合液甲酰胺上样缓冲液Tris-Cl酶和缓冲液大肠杆菌 DNA 聚合酶ⅠKienow 片段核酸和寡聚核苷酸寡核苷酸引物单链 DNA 模板放射性化合物
PCR的模板制备
PCR的模板可以是DNA,也可以是RNA。 模板的取材主要依据PCR的扩增对象,可以是病原体标本如病毒、细菌、真菌等。也可以是病理生理标本如细胞、血液、羊水细胞等。法医学标本有血斑、精斑、毛发等。 标本处理的基本要求是除去杂质,并部分纯化标本中的核酸。多数样品需要经过SDS和蛋白酶K处理。难
什么是模板链?
是DNA分子在复制过程中,由双螺旋结构解旋后解开的两条单链,包含一条模板链和一条编码链。
qpcr设计引物以mrna为模板还是以cdna为模板
当然是cDNA了,mRNA还没有被剪切就有可能有内含子,如果你的基因没有内含子的话,DNA,cDNAmRNA都是无所谓的
模板链的基本结构
1、DNA的碱基互补配对原则:A与T配对,G与C配对。 2、DNA复制:是指以亲代DNA分子为模板来合成子代DNA的过程。DNA的复制实质上是遗传信息的复制。3、解旋:在ATP供能、解旋酶的作用下,DNA分子两条多脱氧核苷酸链配对的碱基从氢键处断裂,于是部分双螺旋链解旋为二条平行双链,解开的两条单链
转录模板的操作步骤
1. 提取cDNA质粒;2. 线性化质粒:(利用单一的酶切位点线性化有利于转录)3. 纯化质粒:(尽量避免RNase污染) ① 加等体积的Tris-苯酚:氯仿(1:1)到100μL限制内切酶消化体系,涡旋振荡20s, 13000g离心5min; ②上清转移,加入2倍体积无水乙醇和1/10体积的3M的
PCR的模板最大是多少
长片段PCR扩增试剂盒所用的酶是Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶,这种混合酶可以染色体和其它细胞器的DNA为模板高效进行PCR反应。在人的染色体上可以扩增出27kb的DNA片段,而以DNA为模板则可以扩增出40 kb的片段.现在的那些试剂盒还是比较牛的
“RNA测序”通用模板新突破
通过检测血液或尿液中少量的RNA来诊断或治疗疾病是一个新兴领域。随着技术的进步,研究人员可以对RNA片段进行测序,但不同的人使用不同的方法来测序RNA,有时会得到不同的结果,这是影响成功的一个重大障碍,使得此领域很难取得进展。近来,密歇根大学Tewari教授的实验室领导了美国和荷兰的9个实验室组
制备DNA测序模板实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材 巴斯德吸管试管离心机实验步骤 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA,以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株
关于模板链的结构介绍
1、DNA的碱基互补配对原则:A与T配对,G与C配对。 2、DNA复制:是指以亲代DNA分子为模板来合成子代DNA的过程。DNA的复制实质上是遗传信息的复制。 3、解旋:在ATP供能、解旋酶的作用下,DNA分子两条多脱氧核苷酸链配对的碱基从氢键处断裂,于是部分双螺旋链解旋为二条平行双链,解开的
转录模板的必要条件
转录模板必须满足:1. 在基因组全长克隆过程中,在正向引物5‘末端添加T7启动子序列;2. 以T7启动子作为体外转录启动子,在启动子后面靶位序列连续带有3个G,转录效率最 高;3. 在正向引物5/端添加一个帽子G,有利于提高体外转录RNA分子的侵染活性。
制备DNA测序模板实验
制备单链M13噬菌体DNA 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性 实验材料 大肠杆菌
免拆模板生产线设备
免拆模板生产线设备 1)所有物料均实现自动化电脑计量,无须人工配料,确保了产品质量的稳定性。 2)全程实现自动化程度生产,用工量大幅降低50%以上; 3)无需制作模具,大幅降低企业的生产成本; 4)生产过程全密闭,几乎零粉尘,车间环境大大改善。克服了以往车间粉尘大、环保不
高GC比模板的PCR扩增
PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程,涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动,比如Platinum Taq DNA聚合酶(Invitrogen)可以达到更高的特异性,降低对镁离子浓度的依赖,并且有利于提高“问题模板”的产量。然而,传统的PCR条件
高GC比模板的PCR扩增
PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程,涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动,比如Platinum Taq DNA聚合酶(Invitrogen)可以达到更高的特异性,降低对镁离子浓度的依赖,并且有利于提高“问题模板”的产量。然而,传统的PCR条件
用于-PCR-的模板-DNA-制备实验
酚-氯仿法提取石蜡组织中 DNA 改进的石蜡切片 DNA 提取方法 直接法(DNA 免提法) 冰冻片 含血标本 胸腹水或尿液
《科学》:端粒可作为RNA合成模板
一直以来,科学家认为,端粒(Telomeres)的唯一作用在于保护DNA免受磨损。瑞士科学家最新研究发现,端粒的作用不仅如此,它还能作为合成RNA的模板。相关论文10月4日在线发表于《科学》上。 每次染色体进行复制的时候,末端的DNA总是会发生丢失。为了防止重要遗传信息的遗失,端粒会“牺牲”自我,贡
PCR技术要素模板(靶基因)核酸
模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀; 蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别
蛋白质生物合成翻译模板
不同mRNA序列的分子大小和碱基排列顺序各不相同,但都具有5ˊ-端非翻译区、开放阅读框架区、和3ˊ-端非翻译区;真核生物的mRNA的5ˊ-端还有帽子结构、3ˊ-端有长度不一的多聚腺苷酸(polyA)尾。帽子结构能与帽子结合,在翻译时参与mRNA在核糖体上的定位结合,启动蛋白质生物的合成;帽子结构和p
高GC比模板的PCR扩增
PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程,涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动,比如Platinum Taq DNA聚合酶(Invitrogen)可以达到更高的特异性,降低对镁离子浓度的依赖,并且有利于提高“问题模板”的产量。然而,传统的PCR条件
用于-PCR-的模板-DNA-制备实验
实验方法原理 实验步骤 1. 10 mm 厚石蜡切片 10~15 张,置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl,9000 r/min,8 min×3。3. 脱水无水乙醇 1200 μl,9000 r/min,5 min×3。4. 打开 Eppendor
城市大气污染治理有了“模板”
今年是“大气十条”的收官之年。8月16日,清洁空气联盟在北京发布了《城市空气质量达标规划编制手册》(简称手册),结合国际和国内先进经验,为我国城市提供大气治污“模板”,助力各地空气质量达标管理长效机制的建立。 手册包括达标规划编制的原则、具体方法、目标和步骤等,还有系列相关工具的介绍及使用,汇
模板链的复制的特点和意义
1.特点:边解旋边复制,半保留复制。2.结果:一个DNA分子复制一次形成两个完全相同的DNA分子。3.意义:使亲代的遗传信息传给子代,从而使前后代保持了一定的连续性……4.准确复制的原因:DNA之所以能够自我复制,一是因为它具有独特的双螺旋结构,能为复制提供模板;二是因为它的碱基互补配对能力,能够使
模板的浓度对PCR有什么影响
pcr的灵敏度很高,几pg的DNA就能检测出来了。一般用pcr产物或者质粒做模板,只需要1ng左右就可以了,如果是基因组或者cDNA做模板,模板量可适当增加。
模板链的复制的条件和过程
1.条件:a、模板:亲代DNA的两条母链;b、原料:四种脱氧核苷酸为;c、能量:(ATP);d、一系列的酶。缺少其中任何一种,DNA复制都无法进行。2.过程:a、解旋:首先DNA分子利用细胞提供的能量,在解旋酶的作用下,把两条扭成螺旋的双链解开,这个过程称为解旋;b、合成子链:然后,以解开的每段链(