MolPsychatr：基因治疗小头症取得进展
东京医科齿科大学日前发表公报称，其研究人员参与的一个国际团队在动物实验中弄清了先天性小头症的发生机制，并通过基因治疗，部分恢复了小头症实验鼠脑的尺寸和智力。 由于遗传原因，每3万至5万名婴儿中就有1人患小头症，患者脑的尺寸很小，并且伴随智力障碍。近年来，与小头症有关的致病基因相继被发现，PQBP1基因就是其中之一。 东京医科齿科大学教授冈泽均和美国哈佛大学、德国马克斯·普朗克研究所等机构的同行人工培育出PQBP1基因缺陷的实验鼠，使位于实验鼠神经干细胞内的这一基因不发挥作用，然后研究实验鼠脑的发育过程。 他们发现，PQBP1基因丧失功能后，对细胞分裂周期发挥影响的蛋白质APC4也无法再发挥作用，神经干细胞的分裂周期会变得异常缓慢，到实验鼠出生前都无法形成充足量的神经细胞，从而无法形成足够尺寸的脑。 研究人员还确认，给胎儿期的PQBP1基因缺损实验鼠补充APC4蛋白质后，神经细胞的形成得以恢复。另外，向怀有基因缺损实验......阅读全文
转基因小鼠制备实验方法
实验概要掌握转基因小鼠制备基本实验方法。实验步骤1. 选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。 2. 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结
基因组文库的扩增实验
实验方法原理 通过平板培养可对重组噬菌体文库进行扩增，平板培养的原种可直接来源于本方案所述的包装混合物。但只要可能，该扩增过程可被省略，而感兴趣的 DNA 序列可从原始文库直接筛选。扩增将不可避免地降低文库的复杂性，部分原因在于在连续
痘苗病毒系统基因表达实验（一）
本节介绍依赖于在哺乳动物细胞质合成噬菌体 T7 RNA 聚合酶的瞬时细胞质表达系统。首先，将感兴趣的基因插入质粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶启动子（PT7）的控制下。应用脂质体转染，重组质粒进入感染了 vTF7-3 的细胞质中，而 vTF7-3 是一种能编码噬菌体T7 RNA聚合酶的重组痘苗病
RNA干扰（转录后基因沉默）实验
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。目前主要用于（1）特异性剔除或关闭特定基因的表达 （2）探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗 （3）使
多药抗药基因的表达实验
实验方法原理 大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。实验材料 RNA试剂、试剂盒 PBS氯仿异丙醇萘酸异硫氰酸肽十二烷基肌酸钠构橼酸钠乙酸钠二疏基乙醇乙醇Taq酶仪器、耗材 离心机紫外分光光度计琼脂糖凝胶电泳PCR仪实验步骤 一、细胞总RNA提取1. 收集约5×107
基因转染和实验设计原则
磷酸钙-DNA共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项
RNA干扰（转录后基因沉默）实验
RNA干扰 实验方法原理 1. 病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内，并利用宿主细胞进行转录时，常产生一些dsR
基因枪法转化小麦实验（一）
实验材料 幼胚盾片试剂、试剂盒 乙醇漂白消毒剂仪器、耗材 诱导培养基实验步骤 下面介绍的是经过优化的针对幼胚盾片转化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。对某些特定的品种，幼穗转化比幼胚盾片转化更有效，如普通小麦品种 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小
基因表达系列分析实验（SAGE）（二）
31. 乙醇沉淀：11.5 ml 样品10 ul SeeDNA100 ul 糖原5.1 ml 7.5 mol/L 乙酸铵38.3 ml 100％ 乙醇干冰/甲醇浴 15 min。然后室温溶化 2 min。32. 轻轻涡旋混匀，台式离心机的吊桶转子室温约 3000 g （4000 r/min） 离心
基因枪法转化大麦实验（二）
4. 粒子轰击幼胚(1) 幼胚渗透处理轰击前，取分离 1 天后的幼胚，放在高渗培养基中处理 4 h。每皿 20~30 枚幼胚，置于培养皿中心 1.6 cm2 范围内，盾片朝上。胚可以放得紧密一些，但相互之间不要碰到。轰击之后幼胚继续高渗处理 16 h。(2) 基因枪准备① 基因枪所有组件和内部的枪体
基因表达系列分析实验（SAGE）（四）
83. 用作测序的 2 ul PCR 产物（所需的确切用量取决于测序的方案，并应当优化）用下述方法处理：0.1 ul 外切核酸酶 I0.1 ul 虾碱性磷酸酶1.8 ul 50 mmol/L Tris·Cl，pH 8. 0加 2 ul 消化混合液到 2 ul DNA 中。84. 在热循环仪上进行反应
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K 裂解）从抗凝全血中得到基因组DNA。 实验材料 抗凝全血
多药抗药基因的表达实验
多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测特定基因的过度表达。一、细胞总RNA提取1. 收集约5×107个细胞，冷PBS洗涤。2. 加入400 ul RNA提取液（含6 mol/l 的异硫氰酸肽，0.5%十二烷基肌酸钠，0.025 mol/l 构橼酸钠pH7.0，0.25 mol/
多药抗药基因的表达实验
PCR扩增法 实验方法原理 大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。 多药抗药基因的表达实验是通过反转录和PCR的方法来检测这些特
血基因组DNA提取实验
实验方法原理 本试剂盒采用特殊的细胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K 裂解）从抗凝全血中得到基因组DNA。适用于从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA。实验材料 抗凝全血试剂、试剂盒 血基因组DNA 试剂盒仪器、耗材 96孔深孔板96圆孔板96孔DNA制备板
细菌基因组DNA提取实验
细菌基因组DNA提取可应用于：（1）获得细菌基因组DNA；（2）作为PCR模板；（3）用于测序、遗传信息分析等。实验方法原理本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。适合于从1.0x109 细菌中获得多至20 ug 的基因组DN
痘苗病毒系统基因表达实验（二）
实验方法原理含有 pT7 控制的外源基因（本实验「重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染」）的重组质粒，通过同源重组可整合到痘苗病毒中,并制备重组病毒储液。将此病毒储液与 vTF7-3 共同感染贴壁或悬浮细胞，在培养过程中，外源基因被高效的 T7 RNA 聚合酶转录，并在感染细胞的细胞质完成
基因组文库的扩增实验
实验方法原理 通过平板培养可对重组噬菌体文库进行扩增，平板培养的原种可直接来源于本方案所述的包装混合物。但只要可能，该扩增过程可被省略，而感兴趣的 DNA 序列可从原始文库直接筛选。扩增将不可避免地降低文库的复杂性，部分原因在于在连续几轮的噬菌体生长中，对生长缓慢的重组噬菌体来说是十分不利的
PCR实验中内参基因的作用
1. 判断样品提取是否成功。假如你提取了总RNA然后再做逆转录得到cDNA，然后再去跑PCR发现没有结果，是不是表示样品中没有你的目的基因呢？答案是：不一定。要根据使用同一模板跑出的内参基因的结果才可判断。内参基因的CT在一个合理范围（比如20左右）的前提下，才能说明样品制备没问题，在这个前提下，做
基因表达系列分析实验（SAGE）（一）
实验方法原理 实验材料 感兴趣的细胞或组织试剂、试剂盒 糖原EDTA缓冲液SDSBSATween 20连接子T4 DNA 连接酶BsmFIPC8SeeDNA乙酸钠乙醇DMSOPCR引物乙酸铵DNA ladder 聚丙烯酰胺 TBE凝胶DNA参照pZErO-1 质粒TE缓冲SOC培养液Tris · C
基因表达系列分析实验（SAGE）（三）
58. 用 1：10 000 的 SYBR Green I 染 15 min。在 UV 盒上观察，分出感兴趣的区带。59. 把每一块凝胶放入底部有约 0.5 mm 小洞的 0.5 ml 微量离心管中（用 21-G 针头刺的）。60. 把 0.5 离心管连同凝胶块放入 2.0 ml 的硅烷化的离心管里
基因枪法转化大麦实验（一）
实验材料 麦穗试剂、试剂盒 植物凝胶乙醇次氯酸钠蒸馏水亚精胺仪器、耗材 EP 管移液枪实验步骤 1. 组织培养基的准备( 1 ) 首先准备所需浓度 2 倍的植物凝胶，高压灭菌（见注 2 ) 。( 2 ) 所有的组织培养基都要过滤灭菌，因此除了无菌的储备液，其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀，
转基因植株的选择实验——转基因植物的分析
实验材料叶片试剂、试剂盒液氮DNA 纯化试剂盒bar 基因引物吐温PPT仪器、耗材PCR 分析塑料盆实验步骤一、PCR 分析1. 当植株长到合适大小时（即 3 ~4 张叶片），取约 2 cm 长的叶片，立即放于液氮中，抽提基因组 DNA。2. 在液氮中将叶片磨成粉末状，并使用 Wizard 基因组
PCR实验分区基因扩增实验室通风环境的设计
那我们先来了解一下什么是气溶胶？气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，在气体与液体面摩擦时，操作时比较剧烈地摇动反应管，离心机离心，扩增后PCR产物开盖时、吸样时及移液器枪反复吹吸样品时都可形成气溶胶而污染。综上所述，为了得到好的实验结果，PCR反应需要进行严格的实验分
基因组编辑调控植物内源基因翻译效率实验流程发布
上游开放阅读框uORF广泛存在于动植物基因的5’非翻译区，通常能够抑制下游主开放阅读框pORF的翻译。中国科学院遗传与发育生物学研究所高彩霞研究组率先利用CRISPR/Cas9技术对uORF进行编辑，发现能够显著提高目标基因的翻译效率，建立了利用基因组编辑调控内源基因蛋白质翻译效率的新方法，相关
基因组编辑调控植物内源基因翻译效率的实验流程
上游开放阅读框uORF广泛存在于动植物基因的5’非翻译区，通常能够抑制下游主开放阅读框pORF的翻译。中国科学院遗传与发育生物学研究所高彩霞研究组率先利用CRISPR/Cas9技术对uORF进行编辑，发现能够显着提高目标基因的翻译效率，建立了利用基因组编辑调控内源基因蛋白质翻译效率的新方法，相关成果
转基因植株的选择实验——转基因植株的生长和选择
实验材料幼胚盾片试剂、试剂盒24-DAgNO3毒莠定特美汀草铵膦玉米素仪器、耗材诱导培养基再生培养基实验步骤1. 将可能含有转化细胞的幼胚盾片置于愈伤诱导培养基上培养产生愈伤组织，诱导培养基中添加 0.5 mg/L 2 , 4-D 和 10 mg /L AgNO3。对农杆菌处理过的培养物，培养基中
实验室里自己动手检测转基因
上海将建首个以转基因为主题的青少年科普教育基地 若想消除公众对转基因食品的莫名恐惧，最好是让公众和它“亲密接触”――了解什么是转基因食品，体会如何检测转基因食品。记者日前从上海院士中心主办的第43期院士沙龙上获悉，上海将建设首个以转基因为主题的青少年科普教育基地，可望于今年
华大基因在哥本哈根建实验室
日前，欧洲华大负责人与丹麦哥本哈根生物科技园执行总裁签订关于华大基因在该园区建立实验室的协议。哥本哈根生物科技园方面表示，这将增加园区对相关产业的吸引力，也有助于使整个科技园发展成为世界级的研究基地。 目前，华大基因已与丹麦很多研究机构及生物技术公司建立良好合作关系。今年3月，欧洲华
Naure热点关注转基因食物致癌实验
欧洲从来都不是特别喜欢转基因(GM)食品，而上周发布的一篇惊人的研究论文看起来将会更进一步地坚定公众和政党的反对态度。 这项研究发表在同行评审期刊《食物和化学品毒理学》(Food and Chemical Toxicology)杂志上，调查了喂食NK603玉米大鼠的不利健康影响。NK