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二维凝胶电泳(2-DE)是广为蛋白质组学科学家们应用的经典技术之一，蛋白混合物在两个维度上被分离。第一步是常规的等电聚焦，此过程中蛋白质根据其等电点被分离。接着，第二维使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，将蛋白质按分子量进一步分离。上述两步操作在互相垂直的两个方向上，使分离的蛋白可以铺满整块凝胶板。 分离只是一部分。分离后的蛋白需要在凝胶上显色，才能用于后续的定量研究，或从凝胶上取出用于鉴定。一些情况下，倾向于用银染或考马斯亮蓝染色胶上的蛋白，然后测定蛋白点显色的强度。另外，荧光染色法也十分普遍。各种染色法的灵敏度不同，在实践中选用何种染色法，要考虑它们的成本。 另一类显色技术是在2-DE分离前对蛋白质进行处理。与上述染色技术不同，这项处理要求发生一种化学反应，以确保蛋白质和试剂在电泳过程中结合在一起。这种技术可使用许多种荧光标记试剂。常用的基于青色素的CyDyes染料是包含三种染料的一套系列，这......阅读全文
实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测，对于不同的目的，应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性，所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被
蛋白质组学的诞生和发展，离不开多学科和技术的逐渐交叉融合。这些学科技术包括（但不限于）基因组学、生物化学、分析化学、自动化、基于电磁场的精密质谱仪、信号处理、数理统计和计算机科学。近年来，分子医学、大数据技术和人工智能的发展，进一步加速推动了蛋白质组学的成长，使之在精准医疗领域展示出越来越大的应
对于复杂混合物，如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分，通过两步正交的分离 (orthogonalseperation)，二维凝胶 (2D 胶）电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷，即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量，即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液
基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然，不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类
双向电泳仪有两向电泳组成，第一向根据蛋白质的等电点不同在pH梯度凝胶中进行等点聚焦，第二向根据蛋白质的分子量大小不同在垂直方向或水平方向进行SDS－PAGE电泳。双向电泳仪可以将2000～3000种蛋白质进行分离。一、蛋白质组学研究：1、蛋白质组：蛋白质组是指一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有
双向电泳仪有两向电泳组成，第一向根据蛋白质的等电点不同在pH梯度凝胶中进行等点聚焦，第二向根据蛋白质的分子量大小不同在垂直方向或水平方向进行SDS－PAGE电泳。双向电泳仪可以将2000～3000种蛋白质进行分离。一、蛋白质组学研究：1、蛋白质组：蛋白质组是指一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有
双向电泳仪有两向电泳组成，向根据蛋白质的等电点不同在pH梯度凝胶中进行等点聚焦，第二向根据蛋白质的分子量大小不同在垂直方向或水平方向进行SDS－PAGE电泳。双向电泳仪可以将2000～3000种蛋白质进行分离。一、蛋白质组学研究：1、蛋白质组：蛋白质组是指一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类
双向电泳仪有两向电泳组成，第一向根据蛋白质的等电点不同在pH梯度凝胶中进行等点聚焦，第二向根据蛋白质的分子量大小不同在垂直方向或水平方向进行SDS－PAGE电泳。双向电泳仪可以将2000～3000种蛋白质进行分离。一、蛋白质组学研究：1、蛋白质组：蛋白质组是指一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有
大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心，在相当短的时期内，一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年，流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译，在此后不到两年的时间，近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而，这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代，许多DNA序列信息仅
二、细胞凋亡的细胞化学测定细胞凋亡的细胞化学测定包括细胞表面（细胞膜）的结构和通透性改变的测定和细胞核DNA改变的测定。根据应用的范围，又可分为细胞群休和单个细胞测定两种，以下仅介绍其中几种较为常用的方法。碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞
实验步骤 总蛋白质的检测 1. 总蛋白质色度法染色 简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银
基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然，不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质，一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类
试剂、试剂盒尿素去污剂还原剂载体两性电解质仪器、耗材IPG 凝胶实验步骤一、第一向1. 固相 pH 梯度凝胶或凝胶条的准备固相 pH 梯度凝胶的灌注及聚合方法请参阅 固相 pH 梯度等电聚焦 有关章节，如需要可切成 3~5 mm 宽的胶条在 -20℃ 保存一年。为避免繁琐和复杂的灌胶和切胶条程序和保
许华林 张曼人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于 2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布，他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱，至此，人类基因组计划已基本完成，随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质
人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于 2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布，他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱，至此，人类基因组计划已基本完成，随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和
人类基因组计划与美国塞莱拉遗传信息公司于 2001 年在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣布，他们绘制出了准确、清晰、完整的人类基因组图谱，至此，人类基因组计划已基本完成，随着后基因组时代的到来，蛋白质组学得到了空前的发展，蛋白质组研究旨在揭示基因表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的
人体内真正发挥作用的是蛋白质，蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色，随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声，一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕，蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而，蛋白质的分离和鉴定非常费时，目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组的工具，最好的实验
实验步骤一、材料1.动物一 年 中 的 问 一 时 间 在 不 同 米 样 点 潮 落 时 采 集 贻 贝 Lmk，35〜45 mm 长）或者是贝壳长度为 5 cm 的 紫 贻 贝 edwfe)。其中一个采样点是有记录的清洁区域，在这里采集到的动物作为对照。2. 富含过氧化物酶体组分的分离在分离过程
蛋白质组学（英语：proteomics，又译作蛋白质体学），是以蛋白质组为研究对象，研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。这个概念最早是在1994年，由Marc Wikins首先提出的新名词。 蛋白质组（Proteome）一词，源于蛋白质（protein）与 基因组（genome
2. 总蛋白质荧光法染色荧光染色法结合了检测灵敏度 (可与银染法媲美) 与染色流程简便性 (与考马斯亮蓝染 色 或 Z n 2+ 反染法相同），且其线性定量范围较比色法大 10〜100 倍 。检测依赖于仪器,需要一个单色激发光源、能将波长较长的发射光从波长较短 (也更亮）的激发光
用蛋白质组学方法对海洋环境中过氧 化物酶体增殖污染物进行风险评估实验 实验步骤
实验方法原理在 SDS 电泳中，由于 SDS 和还原试剂使蛋白质变性而失去生物活性，所以电泳后的检测方法不如常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳多，一般为考马斯亮蓝染色和银染色，其次为荧光方法和转移后检测。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液磷酸缓冲液贮液咪唑缓冲液贮液过硫酸铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮
原理 聚丙烯酰胺（polyacrylamide，PAA）凝胶是丙烯酰胺（acry—lamide，Acr），在交联剂甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide，Bis）的作用下经聚合而形成的一种大分子化合物。 Acr的聚合作用只有在自由基存在时才能发生，
蛋白质组研究要求有高分辨率的蛋白质分离及准确、灵敏的质谱鉴定技术。凝胶电泳中蛋白质的着色不仅影响蛋白质分离的分辨率，同时也影响后续的质谱鉴定。选择适当的蛋白质染色法将有助于提高蛋白质组学研究结果的质量。蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染
褚福亮,王福生, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室 北京市 100039项目负责人 王福生, 100039 ,北京市丰台路26号, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室. fswang@public.b
随着蛋白质组学概念的提出，双向电泳(2D gel electrophoresis)一度曾变得很流行。近几年，因质谱技术的快速发展，LC-MS的热度似乎更高。然而，在某些应用上，双向电泳更有优势。 双向电泳提供了整个样品的鸟瞰图，而这是质谱无法比拟的。它可以对样品中复杂的蛋白质进行整体性
肿瘤具有高死亡率、高转移率和高复发率，是危害人类健康的重大疾病。诊断肿瘤的传统方法有病理组织活检、核磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）、电子计算机断层扫描（computed tomography，CT）、B 超、X 线胸片、内镜检查等。这些检查对于肿瘤早期
蛋白质组实验流程双向电泳的样品的制备样品制备原则样品制备是双向电泳中最关键的一步，将直接影响2-DE结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法，尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原则：1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；2）减少对蛋白质的人为修饰