上海巴斯德所研究人员阐述丙型肝炎病毒体外复制机制
4月30日，Plos pathogens在线发表了中科院上海巴斯德所丰田哲也研究组关于丙型肝炎病毒体外复制机制的最新研究成果。这项研究由丰田哲也研究组的研究人员与日本国立感染症研究室的Takaji Wakita研究室共同完成。 由于体外感染系统模型有限，丙型肝炎病毒（HCV）领域的科学研究进展受到限制。到目前为止，只有JFH1（2a）株病毒可以在体外培养的Huh7细胞中复制并产生具有感染性的病毒。为了找到JFH1复制的机制，研究人员首先比较了JFH1，HCR6（1b）和J6CF（2a）三株病毒RNA聚合酶的结构与生化特性等差异，并找到了能激活HCR6和J6CF聚合酶活性的JFH1特异性的氨基酸位点。在含有JFH1 N3H和3’ UTR区域时，在J6CF的RNA聚合酶中引入A450S，R517K和Y561F三个突变就可以使J6CF基因组在培养的细胞中复制并产生子代病毒粒子。研究人员在深入分析了其机制后，发现......阅读全文
乙肝病毒的－DNA－复制过程
乙肝病毒（HBV）的 DNA 复制过程较为复杂，主要包括以下步骤：吸附和侵入：乙肝病毒通过其表面的蛋白与肝细胞表面的受体结合，然后病毒被摄入肝细胞内。脱壳：病毒进入细胞后，脱去衣壳，释放出松弛环状 DNA（rcDNA）。形成共价闭合环状 DNA（cccDNA）：rcDNA 进入肝细胞核，在细胞酶的作
挑战生物学以往观点－哺乳动物细胞可将RNA序列写入DNA
美国费城托马斯杰斐逊大学的研究人员首次发现，哺乳动物细胞可以将RNA序列转换回DNA，这在病毒中比真核细胞更常见。这一发现可能会挑战生物学长期以来的观点，并可能对生物学的众多领域产生广泛影响。相关研究发表在6月11日的《科学进展》杂志上。 细胞含有一种机制，它可以将DNA复制成一组新的DNA，
慢病毒的包装简介及其应用范围
慢病毒，（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达
慢病毒的包装简介及其应用范围
慢病毒，（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达
慢病毒的包装简介及其应用范围
慢病毒，（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达
中国科学家首次揭示病毒内部三维结构
9月18日，国际顶级学术期刊《Science》杂志发表了一篇题为“冷冻电镜揭示双链RNA病毒内部聚合酶和病毒基因组的非线轴结构”的论文。论文中，两位中国科学家首次将病毒的观察视角从“衣壳”深入到内部，改变了过去认为该类型病毒的内部基因组应呈线轴状排列的主流观点，亦用一种全新方法，开启帮助人类认知
Cell：科学家揭示埃博拉病毒和其它RNA病毒的关键结构蛋白
埃博拉病毒和狂犬病毒都是两种人类的致死性病原体，其同属于RNA病毒类别，而且其在宿主体内常常会共享一套常用的策略来进行病毒基因组的复制，而其它同类型的病毒包括马尔堡病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒以及水疱性口炎病毒等；研究者发现水疱性口炎病毒(VSV)可以引发牲畜患急性病，但其并不会引发人类患病，但其
塞尼卡病毒重组发生率与变异频率密切相关
近日，哈尔滨兽医研究所重点实验室于力团队发表在该杂志上的文章 “Senecavirus-specific recombination assays reveal the intimate link between polymerase fidelity and RNA recombination
2篇Science文章公布突破性研究成果
时至流感高发季节，来自Scripps研究院TSRI的研究人员近期完成了流感病毒研究的一项重大进步――以前所未有的精确度“看”到了流感必需的蛋白复合物之一，这将有助于解析流感病毒如何在感染细胞中复制的分子机理。这项研究采用了先进的分子生物学和电子显微镜技术，获得的图像也有助于找到流感病毒的弱点，从
Thogoto病毒的RNA转录和复制机制获揭示
近日，中国科学院广州生物医药与健康研究院研究员熊晓犁团队与广州国家实验室研究员陈新文团队合作，在国家重点研发计划、国家自然科学基金等项目的资助下，研究揭示了正黏病毒科Thogoto病毒的RNA转录和复制机制。相关成果发表于《自然-通讯》。THOV 聚合酶在RNA合成过程中呈现不同的构象。研究团队供图
乙肝病毒复制之谜
在医学上，病毒的繁殖被称之为“复制”，这是因为它不像细胞和寄生虫那样通过细胞核分裂等方式繁殖，而是像我们铸造机器零件一样，按照一定的模具复制出来的。在复制的过程中，有两个很重要的因素：一个是催化剂，另一个是模板。没有这两个因素，乙肝病毒就不能复制。 乙肝病毒复制的“催化剂”叫做乙肝病毒d
新型冠状病毒的核酸检测原理
所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒，病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其它病原体的标志物。新型冠状病毒出现后，我国科学家在极短的时间里完成了对新型冠状病毒全基因组序列的解析，并通过与其它物种的基因组序列对比，发现了
聚合酶链[式]反应
中文名称聚合酶链[式]反应英文名称polymerase chain reaction;PCR定 义通过DNA互补双链解链、退火和聚合延伸的多次循环来扩增DNA特定序列的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
定量聚合酶链反应
中文名称定量聚合酶链反应英文名称quantitative PCR;qPCR定 义将某种已知含量的DNA模板作为内标准进行PCR反应，对待测模板进行定量分析的方法。更灵敏的定量PCR是采用实时PCR方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
耐热DNA聚合酶简介
耐热DNA 聚合酶(Taq DNA 聚合酶)：1969年人们从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离出一种嗜热的水生真菌Thermusaquaticus,能在70~ 75C生长,从该菌分离纯化得到一种耐热的、依赖DNA 的DNA 聚合酶,简称Taq DNA 聚合酶。 耐热DNA聚合酶是一种可抗高温
DNA聚合酶的发现
在50年代的中期，A. Kornberg和他的同事们就想到DNA的复制必然是一种酶的催化作用，于是决心分离出这种酶并研究其结构和作用机制。为了达到这个目的，他们分离的蛋白，然后加到体外合成系统中即 同位素标记的dNTP、Mg2+及模板DNA，经过大量的工作，于1956年终于发现了DNA聚合酶Ⅰ（
聚合酶的基本特性
聚合作用在引物RNA'-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的构象发生变化，促进3'-OH与5
RNA聚合酶的特点
RNA聚合酶催化RNA的合成，其与DNA聚合酶有许多相同的催化特点：①以DNA为模板；②催化核苷酸通过聚合反应合成核酸；③聚合反应是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯键的反应；④以3’→5’方向阅读模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照碱基配对原则忠实转录模板序列。
DNA聚合酶的功能
[1] 聚合作用：在引物RNA'-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸 加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。 酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有 催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的 构象发生变化，促进3&
DNA聚合酶的缺点
缺点无3'→5'阅读校正功能，在PCR扩增过程可引起错配，30次循环错配率约0.25%。措施:选择高保真Taq酶，如Pfu。原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。注意:Pfu扩增产物为平末端。
DNA聚合酶的功能
1）通过核苷酸聚合反应，使DNA链沿5’→3’方向延长（DNA聚合酶活性）[1] 2）催化由3’端水解DNA链（3’→ 5’核酸外切酶活性，用于切除错配的碱基）[1] 3）催化由5’端水解DNA链（5’→ 3’核酸外切酶活性，用于切除引物）[1] 4）催化由3’端使DNA链发生焦磷酸解
DNA聚合酶的用途
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶扩增的PCR产物，3'末端总是带有1个非模板依赖型的突出碱基，而这个碱基几乎总是A，因为Taq酶对dATP具有优先聚合活性，故可用T载体克隆。
DNA聚合酶的特性
DNA聚合酶有多种，E.coli就有三种。通常DNA聚合酶具有以下共同特点： ①需要DNA模板，因此这类酶又称为依赖DNA的DNA聚合酶；②需要RNA或DNA作为引物(primer)，即DNA聚合酶不能从头催化； ③催化dNTP加到引物的3'-OH末端，其速率为1000nt/min，因而DN
DNA聚合酶的特性
良好的热稳定性;70℃ 2h，残留90%活性;93℃ 2h，残留60%活性;94℃ 2h，残留40%活性。5'→3'聚合酶活性，对dATP有优先聚合活性;5'→3'外切酶活性;无3'→5'外切酶活性。
反向聚合酶链反应
中文名称反向聚合酶链反应英文名称inverse PCR;iPCR定 义用于扩增已知序列的DNA旁侧未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上没有识别位点的限制内切酶，切出包含已知DNA、而两端带有未知序列的区段，将切出的DNA区段环化，然后再按已知的DNA序列设计一对引物进行扩增。应用学科细胞生物学
关于聚合酶的介绍
1957年，美国科学家阿瑟·科恩伯格（Arthur Kornberg）首次在大肠杆菌中发现DNA聚合酶，这种酶被称为DNA聚合酶I（DNA polymerase I，简称：Pol I）。1970年，德国科学家罗尔夫·克尼佩尔斯（Rolf Knippers）发现DNA聚合酶II（Pol II）。随
DNA聚合酶的概述
DNA聚合酶（DNA polymerase）是 细胞复制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA为复制模板，从将DNA由5'端点开始复制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、 引物、dNTP 等的情况下）及其相辅的活性。 真核细胞有5种DNA
聚合酶的功能特性
聚合作用在引物RNA'-OH末端，以dNTP为底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后，可能使酶的构象发生变化，促进3'-OH与5
DNA聚合酶的特性
原核生物大肠杆菌DNA聚合酶DNA聚合酶最早在E.coli中发现，到目前为止已确定有5种类型，分别为DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶V，都与DNA链的延长有关。 其中DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ研究得比较明确。DNA聚合酶Ⅰ是1956年由Arthur Kombe
DNA聚合酶的定义
真核细胞有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶α（定位于胞核，参与复制引发，不具有5'－3'外切酶活性及3'－5'外切酶活性，有5'－3'聚合酶活性），β（定位于核内，参与高保真度复制，不具有5'－3'外切酶活性，其中疑似存在5&#