免疫细胞化学术

　　免疫细胞化学（immunocytochemistry），是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术，根据抗原与抗体特异性结合的点，检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。肽类与蛋白质种类繁多，均具有抗原性，当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种动物体内，则产生与该抗原相应的特异性抗体（免疫球蛋白）；将抗体从血清中提出后，结合上某种标记物，即成为标记抗体。用标记抗体与组织切片标本孵育，抗体则与细胞中相应抗原发生特异性结合，结合部位被标记物显示，则在显微镜下观察到该肽或蛋白质的分布。用荧光素（常用异硫氰酸）标记抗体，并于荧光显微镜下观察，称免疫荧光术。如抗体与辣根过氧化物酶（horse radish peroxidase， HRP）等结合，进行酶显示后，可在光镜或电镜观察，用于电镜者则称为免疫电镜术（immunoelectronmicroscopy）此外，以铁蛋白标记抗体，称铁蛋白标记法，也能用于电镜下观察。标记抗体与抗原结合方式。

　　直接法

　　用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合，操作方法简便，特异性高，但敏感性较差，此法可用于检定未知抗原；

　　间接法

　　先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合，然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合；第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体，然后再结合以标记物。通过这样的放大作用，使抗原分子上的标记物大大增多，故间接法较直接法的敏感性大为增高，约高5～10倍，故应用更为广泛。间接法中较常用的，如过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物法（peroxidase anti-peroxidase complexmethod，

　　 标记方法PAP法），该法除需一抗和二抗外，还需要制备HRP标记的抗酶抗体，即以HRP作为抗原免疫动物，制成抗HRP抗体，再以HRP对标记该抗体，制成稳定的环形PAP复合物。标本先后经一抗、二抗和PAP复合物处理后再以DAB显色抗原存在部位可见棕黄色产物。

　　近10年来，免疫细胞学技术有了很大进展，各种新方法相继建立。单克隆抗体 （monoclonal antibody）制备技术极大地提高抗体的特异性与免疫组化染色的精确性。继PAP法之后由于生物素-亲合素等试剂的应用，为检测微量抗原、受体、抗体提供了更精确的技术。常用的生物素-亲合方法有：标记亲合素-生物素法（labelled avidin-biotin method LAB法）、桥连亲合素-生物素法（bridged avidin-biotin method,BAB法）及亲素-生物素-过氧化物酶复合物法（avidin-biotin-peroxidase complex method，ABC法）；现市上有配制成的ABC药盒供应，使用简便，是广泛应用的一种方法。