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如何测定抗体亲和力

在《抗体工程》上有亲和力常数的测定方法,如平衡透析、竞争结合、荧光增强法、硫氰酸盐洗脱法、ELISA和固相放射免疫测定法(SPRIA)等。其中ELISA和SPRIA是最敏感的检测方法。通常采用竞争结合以及Scatchard作图法。如果有条件用SPR方法,这是目前国际上流行的方法,该方法灵敏,客观。另外测亲和力之前最好先测定抗体的有效浓度,方法是夹心法,用标准免疫球蛋白做标准品。因为在作OD-抗体浓度曲线时如果抗体浓度不够,做不出来好的S形曲线,达不到最高值。所以建议你先测定抗体的浓度。如果浓度较低的话,你可以浓缩一下,方法很多,如PEG法,真空冷冻干燥,超速离心等等。......阅读全文

如何测定抗体亲和力

在《抗体工程》上有亲和力常数的测定方法,如平衡透析、竞争结合、荧光增强法、硫氰酸盐洗脱法、ELISA和固相放射免疫测定法(SPRIA)等。其中ELISA和SPRIA是最敏感的检测方法。通常采用竞争结合以及Scatchard作图法。如果有条件用SPR方法,这是目前国际上流行的方法,该方法灵敏,客观。另

如何测定抗体亲和力

在《抗体工程》上有亲和力常数的测定方法,如平衡透析、竞争结合、荧光增强法、硫氰酸盐洗脱法、ELISA和固相放射免疫测定法(SPRIA)等。其中ELISA和SPRIA是最敏感的检测方法。通常采用竞争结合以及Scatchard作图法。如果有条件用SPR方法,这是目前国际上流行的方法,该方法灵敏,客观。另

平衡法选择高亲和力噬菌体抗体

[器材和试剂]   ● 链霉亲和素磁珠(DynabeadsM280,Dynal)   ● 磁性1.5ml试管架(Dynal)   ● 磷酸盐缓冲液(PBS)   ● 2%脱脂奶粉PBS(2%MPBS)   ● 生物素化试剂盒   ● 含0.1为Tween-20的PBS(PBS/Tween)   ●

Countstar® FL在抗体亲和力实验中的应用

抗体是自然产生用于帮助免疫系统抵御细胞内外侵害的免疫球蛋白。免疫荧光法测定细胞水平的抗体亲和力大小是评价抗体效果非常重要的指标,当前主要的测定方法是利用流式细胞仪以实现相对定量。而Countstar® FL可通过间接免疫荧光法检测不同抗原抗体反应呈现的平均荧光强度直接定量评价抗体亲和力大小,同时也可

ELISA检测噬菌体抗体与目的抗原的亲和力

实验概要本实验利用ELISA检测了噬菌体抗体与目的抗原的亲和力。主要试剂1. 0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)2. 1%BSA3. HRP标记的抗M13噬菌体多抗4. 2mol/L H2SO4主要设备1. 酶标板2. 酶标仪实验步骤1. 将抗原用PBS或0.5mol/L Na2CO3(p

ELISA检测噬菌体抗体与目的抗原的亲和力

【材料和试剂】 (1)酶标板 (2)酶标仪 (3)0.5mol/L Na2CO3(pH9.6) (4)1%A (5)HRP标记的抗M13噬菌体多抗 (6)2mol/L H2SO4 【操作步骤】 (1)将抗原用或0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)稀释至10μg

高亲和力单克隆抗体制备问题及对策

1,细胞长的慢或细胞死亡 正常生长情况下,细胞一天传代一次,生长越好,贴壁越多 对策:①培养基配方不对;② 接种密度太低,低于10的4次方;③污染了支原体或者其他不明细菌,支原体的现状是出现小黑点;细菌污染是浑浊;霉菌污染是出现白色肉眼可见菌落;不明细菌污染出现砂状平铺背景,视野发暗。④细胞瓶刷

研究人员发表抗体亲和力体内定向进化系统“EASINESS”

  上海交通大学系统生物医学研究院陶生策团队,开发了一种基于大肠杆菌的抗体亲和力体内定向进化系统“EASINESS”,可以在一周内将目标抗体亲和力提升1-2个数量级,且无需复杂的机械装置与人工操作。该研究基于一种易错DNA聚合酶I选择性地突变ColE1质粒实现体内抗体突变库的构建,以及来自mDHF

高亲和力高纯度零污染的细胞培养级抗体制备指南

单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),是针对专一的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年,主要原理是利用产生抗体的B细胞与骨髓瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。目前大量制备单抗的方法主要有两种方法:一种是动物体内生产法(腹水制备),在小鼠腹腔内接种

TORCH的血清学检测及IgG抗体亲和力检测对诊断的辅助作用

TORCH是一组病原微生物英文首字母的缩写,T代表弓形虫(toxoplasma gondii,TOX),R代表风疹病毒(rubella virus,RV),C代表巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV),H代表单纯疱疹病毒(herpes simplx virus,HSV)I、II型,而O