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蛋白鉴定方法之质谱相关技术

质谱已成为连接蛋白质与基因的重要技术,开启了大规模自动化的蛋白质鉴定之门。 用来分析蛋白质或多肽的质谱有两个主要的部分,1)样品入机的离子源,2)测量被介入离子的分子量的装置。 首先是基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)为一脉冲式的离子化技术。 它从固相标本中产生离子,并在飞行管中测其分子量。 其次是电喷雾质谱(ESI-MS),是一连续离子化的方法,从液相中产生离子,联合四极质谱或在飞行时间检测器中测其分子量。 近年来,质谱的装置和技术有了长足的进展。 在MALDI-TOF中,最重要的进步是离子反射器(ion reflectron)和延迟提取(delayed ion extraction),可达相当精确的分子量。 在ESI-MS中,纳米级电雾源(nano-electrospray source)的出现使得微升级的样品在30~40 min内分析成为可能。 将反相液相色谱和串联质谱(tandem MS)联......阅读全文

你必须知道的质谱鉴定中14条FAQ

   质谱技术在蛋白鉴定等实验中具有不可忽视的作用,不过,目前的应用还不是特别广泛。那么,有问题了怎么解决呢?本文收集了相关的新手对于这项技术的常见问题与解决方法。希望能更好地帮助大家了解这项技术。  问题1. 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级?  答:一级质谱鉴定的方式

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

实验步骤:3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作。因此,

质谱鉴定,常见疑问解答

问题1、一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级?答:一级质谱鉴定的方式主要为胎指纹图谱(PMF),即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量并搜库比较实现蛋白质的鉴定;二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的破碎并对碎片进行深入分析和比较,鉴定出该肽段的序列并结合PMF的

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

仪器、耗材DBMS实验步骤3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作

你必须知道的质谱鉴定中10条FAQ

  质谱技术在蛋白鉴定等实验中具有不可忽视的作用,应用前景十分广泛。那么,有问题了怎么解决呢?  问题1. 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级?  答:一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱(peptide-mass mapping, PMF),即利用质谱仪精确测量酶解片段的分

蛋白质组学在植物科学研究中的应用

1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记,如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen

质谱鉴定常见问题解答

   1. 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级?  答:一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱(PMF),即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量并搜库比较实现蛋白质的鉴定,二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的破碎并对碎片进行深入分析和比较,鉴定出该肽段的序列并结合

质谱鉴定常见问题解答

1. 一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级? 答:一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱(PMF),即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量并搜库比较实现蛋白质的鉴定,二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的破碎并对碎片进行深入分析和比较,鉴定出该肽段的序列并结合PMF

蛋白质质谱鉴定技术概述及常见问题解决方法

  蛋白质(Protein)是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,存在于所有生物细胞,作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用,因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。   现代研究结果发现越来越多的多肽

革兰阴性菌鉴定效能评估PK!国产Clin-TOF-Ⅱ MS & Bruker Biotyper

  范欣, 肖盟, 徐志鹏, 张戈,陈欣欣,徐英春. 国产基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统Clin-TOF-Ⅱ MS与Bruker Biotyper质谱系统在革兰阴性菌的鉴定效能评估 [J]. 中华检验医学杂志,2017,40( 1 ): 41-45. DOI: 10.3760/cma.j.is

蛋白质质谱鉴定技术概述及常见问题

蛋白质(Protein)是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,存在于所有生物细胞,作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用,因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。现代研究结果发现越来越多的多肽同蛋白质一样

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验(四)

4. 质谱鉴定报告文件上传PROTICdb 兼容以制表分隔的文本格式输出的 Sequest 鉴定报告(见注释 13) 。( 1 ) 为演示,访问 http: //location 一 of/your/proticdb/home/demo. php。点击  “formto  o

新型双压线性离子阱质谱仪给蛋白质组学带来革...(四)

如图 4 所示,在不同仪器之间,有很多蛋白会重复出现,即被不同仪器同时鉴定到。在 60 分钟的分离过程中, LTQ Velos 双压离子阱鉴定到了 LTQ XL 得到到蛋白数目的 88% , LTQ Velos 双压离子阱鉴定到了 Q-TOF 得到蛋白数目的 90% ,此外,还有 570 个

北京师范大学质谱中心学术交流及工作研讨会在京举行

   布鲁克·道尔顿公司 潘晨松 应用技术支持工程师   布鲁克·道尔顿公司的潘晨松应用技术支持工程师在报告“全力打造基于质谱的科学工具”中,通过为客户进行的实际样品分析实例讲解了micrOTOF-QⅡ液相色谱四级杆飞行时间质谱仪的功能和分析方法。   潘工程师介绍,micrOTOF-QⅡ

分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS直接检测血培养阳性细菌

引言随着广谱抗菌药物的广泛应用、多种侵入性诊疗手段的普遍应用以及各种原因导致的免疫功能低下患者的日益增加, 血流感染的患病率呈逐年上升的趋势。美国的统计数据显示, 血流感染连续多年位于疾病死亡率排名前10位。国内报道院内血流感染的总死亡率平均为30%~40%。相对传统培养鉴定流程, 基质辅助激光解析

临床微生物实验室:质谱应用的广阔前景

  质谱技术在临床微生物实验室中的应用前景  【引言】自20世纪80年代起, 质谱技术就已经成为科学研究中用于蛋白分析的强大工具。随着技术的不断成熟和广泛使用, 其在微生物检验常规诊断中的作用越来越受到关注, 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser deso

周晓光:MALDI诞生30年小记

  基质辅助激光解吸电离(也就是通常所说的MALDI)于1987年首次由Hillenkamp 及Karas提出,如今已经30年。从那时起,通过应用这一“软电离”技术与飞行时间质谱(MALDI -TOF MS)的结合,成功地实现了为生物大分子提供快速和高度可靠检测手段的目的,同时也为生命科学领域提供了

植物蛋白质组学和糖基化实验

实验材料链霉亲和素-过氧化物酶                                       &

融智生物发布全球首个商用化生物组学微生物质谱数据库

  近日,融智生物宣布建设完成基于全新生物组学理念的微生物质谱数据库。这是全球首次发布商品化生物组学微生物质谱数据库。  传统上,基于不同的细菌或真菌内蛋白组成分特别是核糖体蛋白有显著的差异,对核糖体蛋白组的质谱测试,可用于快速、高准确度鉴定微生物。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TO

超4000种 融智生物发布商用化生物组学微生物质谱数据库

  近日,融智生物宣布建设完成基于全新生物组学理念的微生物质谱数据库。这是全球首次发布商品化生物组学微生物质谱数据库。  传统上,基于不同的细菌或真菌内蛋白组成分特别是核糖体蛋白有显著的差异,对核糖体蛋白组的质谱测试,可用于快速、高准确度鉴定微生物。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TO

一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白(二)

Skyline 中嵌入的 mProphet 软件会根据同一肽段的多个子离子峰的 feature 进行打分。 Feature 包括子离子共流出峰形、保留时间偏差、 dotp 值、信噪比等。为了区分假阳性的子离子峰, mProphet 可以建立 decoy 库,也可以将打分排名第二的肽段作为decoy,

一小时 DDA 鉴定 DIA 定量 4000 个 Hela 蛋白(二)

500 ng Hela 细胞裂解液用相同的色谱柱,相同的色谱梯度,将 QE HF 切换至 DIA 扫描模式进行 3 次 DIA 数据采集。在一次扫描循环中,目标母离子质核比范围 400–1000,四极杆的隔离窗口为 12 Da,包含 50 次 MS/MS 扫描。每一张 MS/MS 谱图中

沃特世在第55届美国质谱年会推出的新品

沃特世公司在2007年美国质谱年会上重新定义分子描述方法  创新技术推动生物学和化学分子科学的前沿,改进研发和定量手段 第55届美国质谱年会于6月3日至7日在印第安纳州,印第阿波利斯市举行。沃特世公司(Waters Corporation)(股票代码NYSE:WAT)在会上推出新型质谱,

MALDI-TOF MS技术在临床微生物实验室中的应用前景

质谱技术在临床微生物实验室中的应用前景引言自20世纪80年代起, 质谱技术就已经成为科学研究中用于蛋白分析的强大工具。随着技术的不断成熟和广泛使用, 其在微生物检验常规诊断中的作用越来越受到关注, 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption

创新数据非依赖性采集用于复杂基质目标蛋白质...(三)

对10 条肽段的分析结果汇总(表1),结果表明,3 种DIA 方法在fg ~ pg 数量级肽段范围内均显示出良好的线性、重现性和灵敏度。3 种方法的最低定量限均达到amol 级,其中肽段GEEMEEMVQSAR在DIA 中最低定量限达14 amol,超越了常规SRM 和PRM 的定量水平。比

蛋白质组技术的研究进展

  大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信

杂质蛋白鉴定与定量的完美结合—Hi3分析方法

液质数据中,不但含有蛋白药序列表达是否正确的肽图信息,其它杂质蛋白同样可以被挖掘出来。然而,单纯的杂质蛋白鉴定却又是不够远远的,其确切的含量信息同样至关重要。沃特世PLGS软件可以在肽图液质数据中,进一步鉴定其中的杂质蛋白,并其相对含量信息进行分析。 一、“顺便”完成的杂质蛋白鉴定与相对定量使用相应

质谱沙龙第三十三期活动报道

  2011年9月25日,第三十三期质谱沙龙活动在北京大学分析测试中心成功举行。来自第二炮兵总医院、北京大学、中科院微生物研究所、中国医学科学院基础医学研究所、空军总医院、AB SCIEX公司、北京艾米诺医学研究有限公司等,近四十位专家、学者、技术工程师参加了本次沙龙活动,本次沙龙以大分子为主题,共

蛋白质组技术的研究进展

大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信息仅

基于Q-OT-qIT 平台的第二代“三合一”超高分辨质谱介绍

摘 要 Orbitrap Fusion Lumos 是基于Q-OT-qIT 平台的第二代“三合一”质谱,通过离子入口、离子透镜、四极杆、ETD和真空技术等方面的深度改进,将仪器整体性能优化至极致。配合“三合一”质谱魔法般的功能,Orbitrap Fusion Lumos 能够有效应对蛋白