TCA沉淀方法

培养基上清直接电泳跑出来的条带经常很难看,可以TCA沉淀浓缩后跑电泳,一般表达量大于1mg/ml可以看到明显条带,这是我用的TCA沉淀方法,效果很好:1.菌液10000g,离心5分钟,收集表达上清。2.取500-1000ul上清于EP管中,加入1/9体积的100%TCA,颠倒10次混匀。3.样品置于冰浴中大于0.5小时,过夜效果更好。4.15000g,离心10-20分钟,可见有棕黑色沉淀,倒掉上清,将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下,除去残余在管口的液体。5.将EP管倒置于吸水纸长,37度烘箱10-20分钟,待管底无明显液体残留,如果管壁还残留有液体,可以吸水纸吸掉。可以改成室温或用电吹风,关键是除去管底和管壁残余液体。6.15000g,离心10-20分钟,用20ul枪头尽量吸去管底残余的液体,此步骤要快,不然沉淀容易散开,降低蛋白回收率,一般最多几ul或者没有,注意不要吸到沉淀。7.EP管倒置于吸水纸长,37度烘箱5分钟,确认管......阅读全文

TCA沉淀方法

培养基上清直接电泳跑出来的条带经常很难看,可以TCA沉淀浓缩后跑电泳,一般表达量大于1mg/ml可以看到明显条带,这是我用的TCA沉淀方法,效果很好:1.菌液10000g,离心5分钟,收集表达上清。2.取500-1000ul上清于EP管中,加入1/9体积的100%TCA,颠倒10次混匀。3.样品置于

TCA沉淀法定量DNA

1. Dilute radioactive sample to a 100 ml volume2. Spot 5 ml of the sample onto the center of a 2.4 cm Whatman GF/C glass-fiber disc.3. Mix 5 ml of the

tca-沉淀蛋白-最后蛋白沉淀加上样缓冲液不溶解怎么办

将蛋白样品稀释之后再加上样缓冲液就能溶解了。

100%三氯乙酸(TCA)配制方法

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)

10%三氯醋酸(TCA)的配制方法

有以下两种方法配制:1、直接称取10gTCA,溶解至100ml水中即可。2、在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解,即成100%三氯乙酸(TCA),再稀释到溶液体积的十倍即可。扩展资料:三氯乙酸的主要用途用于有机合成和制医药、化学试剂、杀虫剂。三氯乙酸在羊毛活性

氨基酸代谢标记实验_辅助方案-TCA沉淀测定标记掺入量

实验材料被标记的细胞悬液(见基本方案或备择方案 1~4)试剂、试剂盒0.1%(m V)BSA/0.02%(m V)NaN310%TCA 溶液冷冻乙醇仪器、耗材连接真空管道的滤过装置2.5 cm 玻璃微纤维滤膜(Whatman GF/C)实验步骤1. 加 10~20 μl 被标记的细胞悬液到 0.1

Protocol-for-Trichloroacetic-Acid-(TCA)-Precipitation

IntroductionThe efficiency of nucleotide incorporation in DNA/RNA polymerization reactions (e.g. transcription, reverse transcription, and DNA replica

TCA循环有什么作用

柠檬酸循环(tricarboxylicacidcycle):也称为三羧酸循环(tricarboxylicacidcycle,TCA),Krebs循环。是用于将乙酰—CoA中的乙酰基氧化成CO2的酶促反应的循环系统,该循环的第一步是由乙酰CoA与草酰乙酸缩合形成柠檬酸。在三羧酸循环中,反应物葡萄糖或者

Total-Protein-Extraction-with-TCAAcetone

We describe a procedure allowing extraction of total proteins that performs efficiently with a large variety of plant tissues, based on simultane

​分步沉淀的方法

分步沉淀是指在一定条件下,使一种离子先沉淀,而其他离子在另一条件下沉淀的现象。浸铜后渣硫酸盐分离沉淀过程是按银、铜、镍的先后顺序进行析出的。因此要实现其分离,简单可行的方法是将这些金属离子转化成钠盐或碳酸盐的沉淀。

tca循环生物学功能

tca循环生物学功能1.糖的有氧分解代谢产生的能量最多,是机体利用糖或其他物质氧化而获得能量的最有效方式。  2.三羧酸循环之所以重要在于它不仅为生命活动提供能量,而且还是联系糖、脂、蛋白质三大物质代谢的纽带。  3.三羧酸循环所产生的多种中间产物是生物体内许多重要物质生物合成的原料。在细胞迅速生长

环状沉淀试验的方法

环状沉淀试验是Ascoli于1902年建立的,其方法是:先将抗血清加入内径1.5~2mm小玻管中,约装1/3高度,再用细长滴管沿管壁叠加抗原溶液。

沉淀分离方法的简介

  沉淀分离方法是指利用沉淀反应实现组分分离的化学方法。在分析化学中常通过沉淀反应将欲测组分分离出来;或者把共存组分沉淀下来,以清除它们对欲测组分的干扰。根据沉淀剂的性质和沉淀的过程又分为:①无机沉淀剂分离法,例如用SO24为沉淀剂分离Ba2+离子,用S2-为沉淀剂分离Zn2+离子。②有机沉淀剂分离

环状沉淀试验的方法

环状沉淀试验是Ascoli于1902年建立的,其方法是:先将抗血清加入内径1.5~2mm小玻管中,约装1/3高度,再用细长滴管沿管壁叠加抗原溶液。

共沉淀方法的介绍

  共沉淀(coprecipitation),一种沉淀从溶液中析出时,引起某些共存的可溶性物质一起沉淀的现象。共沉淀是重量分析法误差的主要来源之一,主要原因有表面吸附,混晶,包埋等。  共沉淀分离法是富集痕量组分的有效方法之一,是利用溶液中主沉淀物(称为载体)析出时将共存的某些微量组分载带下来而得到

沉淀分离方法分析过程

沉淀分离方法是指利用沉淀反应实现组分分离的化学方法。在分析化学中常通过沉淀反应将欲测组分分离出来;或者把共存组分沉淀下来,以清除它们对欲测组分的干扰。根据沉淀剂的性质和沉淀的过程又分为:①无机沉淀剂分离法,例如用SO42-为沉淀剂分离Ba2+离子,用S2-为沉淀剂分离Zn2+离子。②有机沉淀剂分离法

共沉淀的减少方法

共沉淀现象是玷污沉淀的主要因素,要通过沉淀反应在溶液中获得绝对纯的沉淀是不可能的。在重量分析中,总是设法减少共沉淀的影响。洗涤是经常采取的措施,它们虽然对减少混晶共沉淀无能为力,却可以有效地减少表面吸附和包藏引入的杂质。较少包埋另一种常用的方法是重结晶。减少或者消除同形混晶最好的办法是实现分离出杂质

Phosphoamino-acid-analysis-of-nonTCA-precipitable-proteins

Phosphoamino acid analysis of non-TCA precipitable proteins 1. Cut out gel slice, incubate 60 min with 1 ml 5.7 M HCl @ 110oC in 13 x 100 mm screw c

蛋白质的沉淀方法及常见沉淀剂

名称  上清液 0.5ml血浆中不同沉淀剂使蛋白沉淀的% PH值 0.20.4 0.60.8 1.0 1.5  2.03.0   4.0 10%三氯醋酸 1.4-2.0 99.7 99.3 99.6 99.5 99.5 99.7 99.8 99.8 99.8 6%高氯酸 

用酸沉淀法浓缩蛋白质实验

三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法             实验方法原理 实验材料 含蛋白质的样品

蛋白质沉淀方法有机溶剂沉淀法介绍

  多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化  有机溶剂的沉淀机理是降低水的介电常数,导致具有表面水层的生物大分子脱水,相互聚集,最后析出。  该法优点在于:  1)分辨能力比盐析法高,即蛋白质或其它溶剂只在一个比较窄的有机溶剂浓度下沉淀;  2)沉淀不用脱盐,过滤较为容易;  3)在生化制备中应

蛋白质沉淀方法等电点沉淀法介绍

  此法单独应用较少,多与其它方法结合使用  两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低,不同的两性电解质具有不同的等电点,以此为基础可进行分离。如工业上生产胰岛素时,在粗提液中先调PH8.0去除碱性蛋白质,再调PH3.0去除酸性蛋白质。利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性,不然盲目使用十

用酸沉淀法浓缩蛋白质实验

实验方法原理 实验材料 含蛋白质的样品试剂、试剂盒 100%三氯醋酸(TCA)0.1N NaOH(400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸馏水)实验步骤 1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100% 的三氯醋酸(TCA),混匀;2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30

载体共沉淀的方法特点

中文名称载体共沉淀英文名称carrier coprecipitation定  义当样品中待检测或分离的某种成分含量极少、难以直接沉淀时,可加入与其性质相同或能与其结合的物质(载体)一起沉淀的技术。如用放射性核素标记某微量蛋白作示踪研究时,可加入非放射性同种蛋白质,然后用抗体结合并沉淀。应用学科生物化

蛋白质沉淀浓缩方法

在生化制备中,沉淀主要用于浓缩目的,或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂:  1.盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。  2.有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化,有时也用于蛋白质沉淀。  3.等电点沉淀法 用于氨基酸、

免疫沉淀的方法步骤

   说到实验,毕竟是“说”,重要的是动手“做”。其实我们所发布的一些过程步骤等相当于说明书,我们能够给出的是一些知识与提醒注意,一个实验是不能看会的,所以朋友们可通过来了解,需要的朋友们可以自己动手来实践的。我们今天说的这个实验呢是免疫沉淀的实验,过程还是比较简单的。    免疫沉淀一般用于分析抗

免疫共沉淀实验方法

免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x

沉淀溶解平衡的常用方法

根据溶度积规则,沉淀溶解的必要条件是Qc

蛋白质沉淀方法重金属盐沉淀法简介

  常用于抢救误服重金属盐中毒的病人  许多有机物质包括蛋白在内,在碱性溶液中带负电荷,能与金属离子形成沉淀。根据有机物与它们之间的作用机制,可分为羧酸、胺及杂环等含氮化合物类,如铜锌镉;亲羧酸疏含氮化合物类,如钙镁铅;亲硫氢基化合物类,如汞银铅。蛋白质-金属离子复合物的重要性质是它们的溶解度对溶液

逆向TCA循环,提示地球上早期生命线索

  深海热液喷口能够释放大量二氧化碳,生活在那里的微生物成为了代谢适应的绝佳例子。这一代谢途径为极端环境中的微生物生态学带来了启示,提示了地球上早期生命的线索。  很少有化学物质能像二氧化碳(CO2)一样频繁上头条,让自己的分子式广为人知。二氧化碳对于理解气候变化至关重要,以至于我们觉得CO2是个未