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一种可替代C18树脂的更有效的净化磷酸肽的离心柱 在ASMS 2010上被推出 赛默飞世尔科技在ASMS 2010上推出了一种可代替C18树脂，更有效地净化磷酸肽的离心柱。 ROCKFORD, Ill（2010年5月24日）——服务科学全球领先的赛默飞世尔科技，今天推出了Thermo Scientific Pierce 石墨离心柱（Pierce Graphite Spin Columns），用于纯化磷酸肽。Pierce 石墨离心柱能够有效地结合亲水的多肽，例如磷酸化肽。相比C18树脂来说，它可以去除尿素、盐类和其它污染物。对于从蛋白消解物，强阳离子交换馏分，从TiO2 和固定化金属亲合色谱（IMAC）柱和tip头上洗脱下来的磷酸化肽样品来说，Pierce石墨离心柱对于提高上述样品的质谱分析效果是非常理想的。 Pierce石墨离心柱将在犹他州盐湖城召开的第58届ASMS质谱年会会议期间，在Salt ......阅读全文
实验步骤基 本 方 案 1 多克隆抗磷酸肽抗体的制备材料B S A -琼 脂 糖 亲 和 基 质（Sigma) 填 装（如辅助方案 2 ) 于柱床体积IOml的层析柱磷酸化酪氨酸亲和基质层析柱（IOml 柱床体积；见辅助方案3)磷酸肽-B S A 偶联物免疫家兔的粗制血清PB S /叠氮钠.•含有0
预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法，包括冻干、反向萃取、溶质析出，precipitation、透析(溶剂交换） 、超滤和层析技术。值得注意的是，在众多微和设备发展的支持下，小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大
蛋白质浓缩和溶质的去除实验 实验步骤 一、层
实验材料pAS38pAS45pAS47试剂、试剂盒聚乙二醇（PEG) 氯化钠溶液HEPES 缓冲液涂布溶液Tris 缓冲盐水TBS-Tween-20琼脂糖-磷酸溶液仪器、耗材LBSOCYT实验步骤3.1 实物库构建我们用 Kunkel 突变技术构建大多数的实物库虽然我们证明了 AB 链套
独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 Akiko Koide and Shohei Koide
一、层析在过去的 2 0 年中，蛋白质组学技术的日益广泛应用，使蛋白质浓缩和脱盐的层析技术得到不断革新。蛋白质组学通常需要从少量复杂的混合物中富集蛋白质，包括选择性地浓缩特定种类的蛋白质。由于质谱 (M S ) 和基于抗体检测技术的高灵敏度及可提供详细生化特征的性质，它们在临床诊断、
赛默飞世尔科技在ASMS 2010展示定量定性蛋白质组学工具 美国犹他州盐湖城(2010年5月25日)– 全球服务科学领域的领导者赛默飞世尔科技，今日公布了其在蛋白质组学工具方面的重大进步，并表示这些进步将推动定量和定性蛋白质组学研究取得突破性的进展。这些新产品与赛默飞世尔科技其它的试剂和耗材
M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用实验实验材料 羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 CJ236试剂、试剂盒 生理磷酸缓冲液超纯甘油PBS-T 缓冲液PBS-T-BSA 缓冲液仪器、耗材 2YT 培养基SOC 培养基实验步骤 下述方法描述了 P8 库的设计（见 12.3.1)、构建（见
本章描述了改进融合蛋白在 M13 噬菌体颗粒表面展示水平的一个方法。向 M13 衣壳锚定蛋白引入突变后，蛋白质展示水平约能增加两个数量级。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 CJ236试剂、试剂盒生理磷酸缓冲液超纯甘油PBS-
实验材料 λ噬菌体臂 大肠杆菌菌株 用于λ噬菌体的包装抽提物 试剂、试剂
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
试剂、试剂盒 无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇：水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材 MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤 材料缓冲液和溶液稀释缓存液至
试剂、试剂盒 无菌的过滤水 乙腈 乙酸铵 正丁醇 不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液
试剂、试剂盒无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇：水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤材料缓冲液和溶液稀释缓存液至适当浓
实验步骤一、常规操作方案下面这个典型流程对许多蛋白质都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 据 N g u y e n 等(1993)首先开发的方案改编而成，并用于冷泉港蛋白质纯化与鉴定课程的不溶性重组蛋白纯化部分（Burgess and K n u t h ， 1996)。其他类似的流程也可能
实验步骤 一、常规操作方案 下面这个典型流程对许多蛋白质都有很好的效果。本 操 作 方 案 是 根 据 N g u y e n 等(1993)首先开发的方案改编而成，并用于冷泉港蛋白质纯化与鉴定课程的不溶性重组蛋白纯化部分（Bu
实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸
实验材料测序级膜蛋白酶
实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串
cDNA文库[原理]：cDNA文库不同于基因组文库，被克隆DNA是从mRNA反转录来源的DNA。CDNA组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列。从而做cDNA克隆时应是先从获得mRNA开始，在此基础上，通过反转录酶作用产生一条与mRNA相互补的DNA链，然后除掉mRNA，以第一条DNA链为模板复制
方法cDNA 末端的削平1.cDNA样品（来自步骤 11)于 68°C 加热5 min。这一步骤是使cDNA分子的单链突出端可能形成的双链结构发生变性。2. 将cDNA溶液冷却至37°C并加入下列试剂：5xT4噬菌体DNA聚合酶修复缓冲液 &n
T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是，它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑缓冲液中进行，以刺激酶促去
3.2.2 单噬菌体克隆的鉴定( 1 ) 从单克隆中制备噬菌体（或噬粒)。对噬粒，在 2 ml LB-Ap 上过夜生长一单菌落。混合 20 μl 培养液、2 ml LB-Ap ( 和 IPTG，如愿意的话）和 1010 个/ml 辅助噬菌体 KO7。37°C 剧烈摇动保育过夜。对
实验方法原理 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5'
实验方法原理 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应（Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是，它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性（pH 6.4）的咪唑
试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-
DNA 亲和介质的制备实验 试剂、试剂盒 ATP
试剂、试剂盒 乙腈碳酸氢铵TE 溶液放射性标记寡核苷酸仪器、耗材 离心干燥机微量离心管放于管架或收集器Sep-Pak 经典层析柱注射器实验步骤 材料溶液和缓冲液稀释贮存液至适当浓度。乙腈（5%、30% 和 100%)毎个 Sep-Pak C18 柱用 10 ml 髙效液相（HPLC) 级乙腈（100
试剂、试剂盒 乙腈 碳酸氢铵 TE 溶液 放射性标记寡核苷酸
本方案介绍的是利用寡核苷酸对于硅胶反相亲和的特性，将放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物分离的方法，本方案的方法只可用于纯化 5'端放射性标记或非标记的含磷酸基团的寡核苷酸，而方案 1 所介绍的方法多用于 5'末端为游离羟基的寡核苷酸。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册