小鼠雌激素（Estrogen）ELISA检测试剂盒使用说明

小鼠 (Mouse) 雌激素 (Estrogen) ELISA 检测试剂盒

试验原理：

小鼠雌激素 (Estrogen) ELISA 检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知Estrogen浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将Estrogen和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中Estrogen的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制

试剂盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制

96/48人份酶标板 1块板（96T） 半块板（48T） 即用型

塑料膜板盖 1块 半块 即用型

标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按说明书进行稀稀

空白对照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型

标准品稀释缓冲液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型

生物素标记的抗Estrogen抗体 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型

洗涤缓冲液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按说明书进行稀释

底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

终止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型

标本稀释液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自备材料

1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作步骤

1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

局限

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结果判断与分析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的Estrogen标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的Estrogen含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-80ng/ml

4、敏感度： 0.1 ng/ml