激光显微切割结合蛋白质组学技术分析DDAH21在肝细胞癌表达的变化

[摘　要] 　目的: 应用激光显微切割( laser cap ture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌( hepatocellular car2cinoma , HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1 ( dimethylargininedimethylaminohydrolase1,DDAH21)在肝细胞癌表达的变化。方法: 选取2003 - 2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术( two dimensional gel electrophore2sis, 22DE)筛选全部标本共同差异表达频率> 80%、差异强度> 3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱( electrosp ray ionisationtandem mass spectrometry, ESI2MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix2assisted laser desorp tion / ionization time of flightmass spectrometry,MALD I2TOF2MS) 对差异蛋白点进行质谱鉴定分析; 采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH21进行检测。结果: 22DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调, 7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH21是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示, 20例标本中16例DDAH21表达明显升高;免疫组化检测证实, 10例标本DDAH21全部呈强阳性表达。结论: 肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH21在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。