病毒的培养方法实验

实验方法原理 鸡胚培养方法操作简便，适用于流感病毒，痘病毒，疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种，即绒毛尿囊膜接种法，羊膜腔（羊水囊）接种法，尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不同目的采用适宜的接种方法。

实验步骤

1.  鸡胚的检查

将9～11 日龄鸡胚置于检卵器上，照视观察鸡胚是否生活，根据①小血管是否清晰；②胚胎是否活动，观察小鸡的眼睛黑点是否移动。如果鸡胚不动，血管昏暗模糊，变黑或苍白都表示已死亡。

2.  接种

用铅笔标明天然气室及鸡胚位置，然后在绒毛尿囊膜发育区〈照视时呈现红色〉近胚位处的气室边缘作一记号，定为注射入口。

用碘酒消毒注射入口和天然气室端的蛋壳，再用电钻，口腔科用牙钻和小锉刀，于注射入口和天然气室端的蛋壳上锯一小孔，勿伤及卵膜。

用大头针通过火焰消毒后刺穿气室端所开小孔的卵膜，这样可避免在注射时液体回流出来。

将鸡胚横卧于蛋架上，用无菌l 毫升注射器抽取病毒液体，针头与卵壳成30（交角，由注射器小孔剌入0.5～1.0 厘米，注0.1～0.2 毫升。

注射完毕，用胶布封口，封口前胶布用碘酒消毒，并通过火焰烧去余碘，用过的注射器用煮沸法消毒，鸡胚放入35～37 ℃培养。

注射后次日，逐日观察鸡胚生活情况，孵育48～72小时后移入4℃冰箱过夜。注意鸡胚必须直立，令气室端朝上。

收获尿囊液之前取出鸡胚，用碘酒消毒气室端，并将镊子击破气室端卵壳，沿气室边缘小心打开一大缺口，然后用小镊子撕去卵膜及撕破绒毛尿囊膜，最后用毛细管吸取尿囊液，一般可吸得4～5 毫升。

滴定尿囊液的病毒血凝效价。

注意事项

尿囊接种法适用于某些呼吸道病毒如流感，副流感，新城鸡瘟等病毒之培养，唯分离培养不如羊膜腔接种法的阳性率高。