多元实时PCR实验
多元实时 PCR 时,在一个反应管中加入不同标记的成对引物,从而可以同时分析多个不同的基因。在许多反应中,用 JOE 标记看家基因对模板定量,用 FAM 标记目的基因,证明 LUX 引物非常有效。在标准的多元体系中,使用的引物浓度和加入的体积与进行一元反应时相同,如下。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸馏水反向引物正向引物仪器、耗材ABIPrism7700型号系列检测系统实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂以50ul反应体系为例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitrogen11730-025) 25ulROX染料(Invitrogen12223012) &......阅读全文
多元实时-PCR-实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸馏水反向引物正向引物 仪器、耗材 ABIPrism7700型号系列检测系统 实验步骤 一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 以50ul反应体系为例。 Platinum Quantitative PCR Su
多元实时-PCR-实验
多元实时 PCR 时,在一个反应管中加入不同标记的成对引物,从而可以同时分析多个不同的基因。在许多反应中,用 JOE 标记看家基因对模板定量,用 FAM 标记目的基因,证明 LUX 引物非常有效。在标准的多元体系中,使用的引物浓度和加入的体积与进行一元反应时相同,如下。本实验来源于 PCR 实验指南
多元实时-PCR-实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸馏水 反向引物 正向引物 仪器
实时-PCR-实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDG ROX 染料 蒸馏水 反向引物 正向引物 仪器
实时-PCR-实验
本方法运用 PlatinumQuantitativePCRSuperMix-UDG。进行实时 PCR 时,应该有一套设备可以检测每次 PCR 循环时释放的荧光信号。并且还能检測 FAM 和 JOE 激发后分别释放出的 520mn 和 550nm 的发射波。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作
实时-PCR-实验
试剂、试剂盒 PCR Super Mix-UDGROX 染料蒸馏水反向引物正向引物仪器、耗材 ABIPRISM7700 型号系列检测系统实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂以 50ul 反应体系为例。Platinum Quantitative PCR Super Mix-UDG(Invitro
实时-PCR-的参数实验
LUX 引物用 FAM(6-羧基荧光素)或 JOE(6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素)标记。在没有特异模板的反应中,LUX 引物可以对 100 个拷贝或更少的目的基因进行定量,定量范围可以从不足 100 到 107 个拷贝。运用 FAM 和 JO
实时-PCR-的参数实验
试剂、试剂盒 LUX引物单链或双链的 DNA 或 cDNAMg2+dNTP热启动酶仪器、耗材 PCR 仪实验步骤 一、方法1. 引物实时 PCR 的引物必须具有基因的特异性,并能进行较短片段的扩增。a.LUX 引物设计软件(LuxDsigner) 缺省的参数已经被设定为可以扩增 75~200bp
实时-RTPCR-实验
试剂、试剂盒 RNA 模板 DNA 酶缓冲液 DNA 酶 I DEPC 处理的水 oligo(dT) MgCl2 dNT
实时-RTPCR-实验
试剂、试剂盒 RNA 模板DNA 酶缓冲液 DNA 酶 IDEPC 处理的水oligo(dT)MgCl2 dNTPEDTA实验步骤 —、材料1. 缓冲液、溶液和试剂①10ul 消化体系的组分。RNA 模板(最多 1ug/10ul) xul10X
实时-RTPCR-实验
本方法使用Superscription反转录系统合成cDNA。进行实时PCR时,FAM或JOE荧光基团既可以标记正向引物,也可以标记反向引物。可以用Trizol试剂提取RNA或按第10章描述的方法提取RNA。样品中的基因组DNA用DNaseI消化掉(参照第10章)。本实验来源于PCR实验指南(第二版
实时-PCR-的参数实验
试剂、试剂盒 LUX引物 单链或双链的 DNA 或 cDNA Mg2+ dNTP 热启动酶
实时-PCR
一旦 RNA 收集纯化完成,可以采用对不同的细胞质或核糖体 RNA 专一的商业化的实时 PCR 试剂盒,以组成型的 rRNA 为标准对所有资料进行标定。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒cDNA 样品rRNA 引物和探针目的基因的引物和探针Tag Man Un
实时-PCR
试剂、试剂盒 cDNA 样品rRNA 引物和探针目的基因的引物和探针Tag Man Universal PCR Master Mix 超纯水仪器、耗材 序列监测仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂来自方案 5 的 cDNA 样品20X18SrRNA 引物和探针(AppliedBiosyste
实时-PCR
试剂、试剂盒 cDNA 样品 rRNA 引物和探针 目的基因的引物和探针 Tag Man Universal PCR Master Mix 超纯水
实时荧光定量PCR具体实验步骤
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色水相
实时荧光定量PCR具体实验步骤
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚仿相,中间层以及无色水相上
实时荧光定量PCR(RealTime-PCR)实验流程
一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录)不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法,因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高,所以,正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法,在实验过程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在总rna的提取过程中,注意避免mRNA的断裂;取2u
实时荧光定量PCR具体实验步骤(一)
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间层以及无色
实时荧光定量PCR具体实验步骤(二)
5 制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板①针对每一需要测量的基因,选择一确定表达该基因的cDNA模板进行PCR反应。反应体系:序号 反应物 剂量1 10× PCR缓冲液 2.5 ul2 MgCl2 溶液 1.5 ul3 上游引物F 0.5 ul4 下游引物R 0.5 ul5
实时荧光定量PCR原理和实验(一)
无论是对遗传病(如地中海贫血和血友病)、传染病(如肝炎和艾滋病)或肿瘤进行基因诊断,还是研究药物对基因表达水平的影响,或者监控药物和疗法的治疗效果,定量PCR技术都可以发挥很大作用。定量PCR技术的最新进展是实时荧光定量。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到P
实时荧光定量PCR原理和实验(二)
归一后的荧光信号再扣除本底,就得到DRn:DRn = Rn,样本- Rn,空白。DRn是最后构建PCR实时扩增曲线的纵坐标。 无论绝对定量还是相对定量,在得到实验结果后,还要考虑数据之间的可比性问题。在实验操作中,取样都是以体积或重量为单位的,但是同样体积或重量的样本所来源的细胞数目并不一样
实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】
【FT-PCR】实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】_风途厂家_Kgaoletšo ya dikarolo tše bopago seswantšho tša kgole ya PCR 具体来讲扑杀无害化处理染疫动物,禁止泔水饲喂生猪,加强生猪养殖运输屠宰等各个环节的清洗和消毒,包括养
实时荧光定量PCR(realtime-PCR)
实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰仪器、耗材 离心管离心机风光光度计电泳槽凝胶板Realtime PCR仪实验步骤 一、 样品
实时荧光定量PCR(realtime-PCR)
实验步骤一、 样品RNA的抽提 1. 取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的
实时荧光定量PCR(realtime-PCR)
实验方法原理 实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 实验材料
实时荧光定量PCR(RealTimePCR)实验流程
一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录) 不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法,因为Real-TimePCR对RNA样品的质量要求较高,所以,正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法,在实验过程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。 在总rna的提取过程中,注意避免m
实时荧光定量-PCR
实时荧光定量 PCR 是一种可以实时检测核酸扩增的技术,在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化对 PCR 过程进行实时监控,以此实现对初始模板的定量分析。常用标记方法主要有两种,一是非特异性荧光标记:SYBR Green I;二是特异性荧光标记:Taqman 探针法。 实时荧光
实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,
实时荧光定量PCR
Real Time PCR实时荧光定量PCR 其定量的基本原理是在 PCR 反应体系中加入非特异性的荧光染料(如: SYBR GREEN I )或特异性的荧光探针(如: Taqman 探针),实时检测荧光量的变化,获得不同样品达到一定的荧光信号(阈值)时所需的循环次数: CT 值( Cycle